国家质检总局科技计划项目(2007IK184)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：田甜王伟薛强邹明强董英更多>>
- 相关机构：中国检验检疫科学研究院江苏大学山东农业大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 诺如病毒RT-PCR-反向斑点杂交检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 旨在建立诺如病毒RT-PCR-反向斑点杂交检测方法。选取诺如病毒较为保守的RdRp基因作为扩增对象,经RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针及生物素标记引物。生物素标记引物的扩增产物经热变性后与固定在硝酸纤维素膜上的探针进行杂交反应,经显色后判定结果。出现明显的蓝紫色斑点为诺如病毒阳性,如无斑点则为阴性。对5份临床样品进行检测,并以RT-PCR对比验证。结果显示,利用反向斑点杂交法对重组质粒的检测限为100拷贝/μL,在5例实际样品检测中有1例为阳性,与RT-PCR判定结果一致。建立了诺如病毒的RT-PCR-反向斑点杂交检测方法,该方法特异性好,灵敏度高,操作简便,具有重要的应用价值。
- 田甜董英薛强邹明强王伟
- 关键词：诺如病毒反转录-聚合酶链式反应反向斑点杂交
- H5和H9亚型禽流感病毒反向斑点杂交同步检测法的建立被引量：1
- 2010年
- 【目的】建立H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交鉴别诊断方法。【方法】在H5和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的保守区段内,选择设计2对引物,RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中,得到重组质粒pGEM-T-H5与pGEM-T-H9。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针与生物素标记引物。将探针通过紫外交联方法固定在带正电荷的尼龙膜上,用生物素标记引物扩增特异性片段,扩增产物经热变性后与探针进行杂交,杂交后显色,出现明显蓝紫色斑点的判定为阳性,无斑点判定为阴性。【结果】利用建立的反向斑点杂交方法检测,H5、H9亚型禽流感病毒的血凝效价分别可达到2-9.6和2-11.9,杂交特异性好,且2亚型间无交叉反应。【结论】建立了H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交检测方法,该方法灵敏度高、特异性好,可以实现H5与H9亚型禽流感病毒的鉴别诊断。
- 王伟薛强邹明强柴同杰田甜
- 关键词：反向斑点杂交H5H9亚型禽流感病毒血凝素灵敏性
