广西壮族自治区自然科学基金(2011GXNSFA018096)
- 作品数：4 被引量：14H指数：3
- 相关作者：谢志勤谢丽基庞耀珊谢芝勋范晴更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所更多>>
- 发文基金：广西特聘专家专项经费资助项目广西壮族自治区自然科学基金国家百千万人才工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及临床效果评价被引量：2
- 2014年
- 旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的间接ELISA方法。将BVDV的囊膜蛋白E2基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接E2-ELISA检测方法,证实该方法的特异性、敏感性和重复性均较好。用所建立的E2-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份血清样品,检出率为24.8%;与商品化试剂合作比较,符合率为95%。结果表明,建立的E2-ELISA方法简便易行,适用大量样本检测,可用于BVDV的抗体水平监测及牛病毒性腹泻的流行病学调查。
- 范晴谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基罗思思
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白BOVINE
- 牛轮状病毒VP7基因在昆虫细胞中的表达被引量：4
- 2013年
- 利用PCR方法扩增出牛轮状病毒外衣壳蛋白VP7基因,经BamHⅠ+PstⅠ特异性酶切后,连接于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA中,成功构建了重组质粒pFastBacHTA-VP7。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素筛选和PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-VP7。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。结果显示,成功扩增了VP7基因,大小为981bp,所表达的重组蛋白大小为40.4ku,与预期值相符,该蛋白能与牛轮状病毒阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性。此研究结果为进一步研发牛轮状病毒ELISA检测试剂盒奠定了物质基础。
- 范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基罗思思
- 关键词：牛轮状病毒VP7蛋白昆虫细胞
- 牛病毒性腹泻病毒E2结构蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：5
- 2014年
- 根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒囊膜糖蛋白E2基因设计1对特异性引物,以Oregon CV24株为模板,PCR扩增目的片断后与pET-32a原核表达载体连接,转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物,结果表明重组E2蛋白在体外得到较好表达,表达的融合蛋白分子量为57.7 ku。可溶性分析表明重组E2蛋白以包涵体的形式存在,经镍柱His标签蛋白纯化后进行western-blot检测。结果表明:E2重组蛋白均具有反应原性,能与BVDV的阳性血清进行反应。
- 范晴谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文谢丽基罗思思
- 关键词：BVDVE2原核表达
- 牛病毒性腹泻病毒E2基因在昆虫细胞中的表达被引量：4
- 2013年
- 为了获得具有良好抗原性的牛病毒性腹泻病毒E2囊膜蛋白,利用PCR方法扩增牛病毒性腹泻病毒E2基因,连接于昆虫杆状病毒表达载体中,构建pFastBacHTA-E2重组质粒。将该重组质粒转化入DH10BAC感受态细胞,经PCR鉴定获得转座杆粒Bacmid-E2。转座杆粒Bacmid-E2转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,感染细胞后,收获得到目的蛋白,用SDS-PAGE和Western blot对重组的表达蛋白进行分析。结果表明,重组E2蛋白大小为43.6ku,与预期值相符,该蛋白能与牛病毒性腹泻病毒阳性血清发生特异性反应,为进一步研发牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒奠定基础。
- 范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基罗思思
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白昆虫细胞
