国家高技术研究发展计划(2001AA217111)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：郭艳红高炜鄢华郑德先许瑞安更多>>
- 相关机构：北京大学第三医院中国医学科学院中国协和医科大学香港大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新型血清型1型重组腺相关病毒载体携带血管内皮生长因子基因促血管生成的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨采用腺相关病毒血清型1型的衣壳蛋白构建的"假毒粒"型重组腺相关病毒(rAAV)1载体介导血管内皮生长因子(VEGF)促血管新生的可行性、有效性。方法以每个细胞10~5vg rAAV1-绿色荧光蛋白(GFP)及 rAAV1-VEGF 载体量感染 C2C12细胞(小鼠成肌细胞)分化的肌管,荧光显微镜下观察 rAAV1-GFP 的转染效率。ELISA 法检测 rAAV1-VEGF 转染后细胞上清中VEGF 表达量。构建小鼠后肢缺血模型,术后10天每只小鼠股部缺血骨骼肌内注射3×10^(11)vg 的rAAV1-VEGF 载体,载体转染后1个月 ELISA 法检测小鼠缺血骨骼肌中 VEGF 蛋白表达量。载体转染后6周免疫组化检测小鼠缺血骨骼肌中毛细血管及小动脉新生情况。结果 rAAV1-GFP 感染后120 h 60%～80%的肌管可表达GFP。rAAV1-VEGF 载体感染后第3天细胞上清中分泌的 VEGF 表达量达到高峰,VEGF 浓度为(567.7±16.8)pg/ml。小鼠缺血骨骼肌中 rAAV1-LacZ 载体转染后1个月转染效率可达100%。rAAV1-VEGF 载体转染后1个月平均 VEGF 浓度为(205.4±36.1)pg/mg总蛋白,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01,n=5)。rAAV1-VEGF 载体转染有效促进了血管新生(P<0.001,n=6),载体转染6周缺血骨骼肌中毛细血管计数与小动脉计数分别为(147.0±13.3)/mm^2,(17.0±1.2)/mm^2。结论新型"假毒粒"型 rAAV1-VEGF 载体可能是治疗缺血性心血管疾病更为优越的基因治疗载体。
- 鄢华吴小兵郭艳红张鹏陈莉董小岩王贵松高炜
- 关键词：血管内皮生长因子腺相关病毒
- 腺相关病毒介导的肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体的表达及其体外抗肿瘤活性的研究被引量：6
- 2004年
- 目的 研究腺相关病毒 (AAV)介导的重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL114 2 81)在体内外的表达规律及其杀伤肿瘤细胞的生物学活性 ,探讨重组腺相关病毒用于肿瘤基因治疗的应用前景。方法 构建编码TRAIL胞外区 114 2 81位氨基酸的多肽的重组腺相关病毒载体rAAV TRAIL114 2 81,转染HEK2 93人胚肾细胞 ,获得高滴度的重组病毒颗粒后 ,转导人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat、人肝癌细胞株HepG2和SMMC 772 1以及人宫颈癌细胞株HeLa等 ,并采用经C5 7BL/ 6小鼠门静脉输入、皮下注射、肌内注射、腹腔注射或口服等不同给药途径 ,研究重组腺相关病毒介导的TRAIL114 2 81蛋白在体内外的表达规律。采用实时PCR方法测定重组病毒滴度。采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)、Western印迹法和免疫组化法测定蛋白表达。采用MTT法测定重组rAAV TRAIL114 2 81杀伤肿瘤细胞的生物学活性。结果 成功地获得了rAAV TRAIL114 2 81重组病毒 ,其滴度为每毫升 7 5× 10 12基因组颗粒数 (Gps/ml)。重组病毒转导使TRAIL114 2 81在宿主细胞中高效表达 ,并可显著诱导Jurkat、HeLa和SMMC 772 1等肿瘤细胞凋亡 ,但不能诱导HepG2细胞凋亡。体内实验中 ,经小鼠门静脉输入重组病毒 ,可使TRAIL114 2
- 马宏刘彦信刘士廉许瑞安郑德先
- 关键词：介导重组腺相关病毒重组病毒滴度体外抗肿瘤活性
- 小鼠后肢缺血模型中新型“假毒粒”型重组血清型1型腺相关病毒载体的安全性研究
- 2013年
- 目的探讨骨骼肌注射法导入新型“假毒粒”型重组血清1型腺相关病毒（rAAVl）载体的安全性。方法构建小鼠后肢缺血模型，术后10d每只小鼠股部缺血骨骼肌内注射3×10^11vg的rAAV1-LacZ、rAAV1-VEGF165载体，检测载体介导外源基因表达的高峰时间和持续时间；观察小鼠血循环、各主要脏器中有无外源基因表达。结果载体转染后1月外源基因表达至高峰，表达持续时间超过9个月。rAAV1-VEGF165载体转染后1月酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血浆样品未发现VEGF螂表达。rAAVI—LacZ载体转染后1个月小鼠各主要脏器病理检测均未发现外源LacZ基因表达。结论骨骼肌注射法导入新型“假毒粒”型rAAVl载体安全，rAAV1-VEGF165载体是治疗外周动脉疾病的1种安全载体。
- 鄢华吴小兵郭艳红高炜
- 关键词：腺相关病毒血清型基因治疗
