教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-09-0654)
- 作品数：9 被引量：14H指数：3
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- MiR-302/367在体细胞向多能性干细胞重编程中的作用被引量：1
- 2013年
- MicroRNA-302／367（miR-302／367）发现于2003年，是一类长度在21～22nt的miRNA簇，与多能性干细胞自我更新及多向分化有重要关系．在体细胞向多能性干细胞重编程中具有重要作用．miR-302／367簇中各miRNA具有相对保守的种子区及靶基因，主要通过抑制靶基因蛋白质的翻译，从而促进间质．上皮转化（mesenchymal-epithelial transition，MET）、抑制细胞周期、调控细胞分化相关基因及表观遗传水平等方式促进体细胞向多能性细胞重编程．本文对miR-302／367的发现、结构、miR．302／367在多能性细胞中的作用及在体细胞向多能性干细胞重编程中的作用及其机理等做一综述．
- 朱海鲸唐芙蓉华进联
- 关键词：体细胞重编程
- Mmu-miR-34c慢病毒表达载体构建及在奶山羊雄性生殖干细胞的表达
- 2012年
- 【目的】用两种方法构建miR-34c的慢病毒表达载体,并包装成慢病毒颗粒,为经济、高效的进行miR-34c超表达提供方案,为进一步研究miR-34c的作用奠定基础。【方法】从小鼠基因组中扩增miR-34c前体,分别插入pLL3.7的CMV启动子起始的GFP之后或U6启动子后,构建成载体pLL3.7-CMV-34c及pLL3.7-U6-34c。将重组慢病毒载体和包装质粒混合物转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,测定病毒滴度。感染293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞,用293T细胞与奶山羊雄性生殖干细胞的GFP表达程度测定转染效率,用定量PCR方法测定miR-34c的表达效率。【结果】重组质粒酶切及PCR分析及转化菌液测序,证明插入序列正确,qPCR检测显示:miR-34c的表达在慢病毒载体感染的293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞均显著上调。【结论】用pLL3.7慢病毒载体中的CMV和U6两种启动子均可经济高效地进行miR-34c超表达,且由U6启动子启动的miR-34c慢病毒表达载体可以成功高效感染关中奶山羊雄性生殖干细胞。
- 刘超于萌朱海鲸李明昭华进联
- 关键词：慢病毒载体奶山羊
- 小鼠Dazl基因融合蛋白表达载体的构建及转染被引量：1
- 2013年
- 根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-Dazl,单双酶切和测序验证正确。将pEGFP-C1-Dazl质粒转染293和NIH-3T3细胞,荧光显微镜下观察到融合表达的绿色荧光蛋白,且呈胞质表达;对照组转染pEGFP-C1,绿色荧光遍布整个细胞。Dazl蛋白的免疫荧光试验也证明重组载体转染后,Dazl基因和GFP共同定位于胞质部分。pEGFP-C1-Dazl融合蛋白表达载体的成功构建为进一步研究生殖特异性基因Dazl在小鼠和大型动物的表达特性奠定了一定的基础。
- 王龙周莹胡玥于萌白耀富华进联
- 关键词：小鼠生殖细胞绿色荧光蛋白
- 哺乳动物精子发生中减数分裂的起始被引量：1
- 2013年
- 生殖细胞的发生、增殖和分化是生命科学领域研究的重要课题之一.生殖是所有动物赖以生存的基础,精子发生是完成繁殖所必须经历的过程,其最终目的是源源不断地产生单倍体精子.精子发生过程本身是一个复杂特殊的细胞增殖与分化过程,其中减数分裂是精子发生最重要的步骤,但关于减数分裂如何精确起始的分子机制仍知之甚少.已有报道发现,维甲酸(RA)调控Stra8可能是哺乳动物减数分裂起始的机制之一,Nanos2、Boule对RA-Stra8通路具有重要的调控作用.本文对哺乳动物精子发生中减数分裂起始的相关研究进展进行综述.
- 李明昭刘维帅华进联
- 关键词：减数分裂精子发生维甲酸
- Retinol促进小鼠雄性生殖干细胞的增殖
- 2013年
- Retinol(RE)作为维生素A的一种,对生命有机体内多种生理生化和代谢反应均有重要的影响。本试验以雄性生殖干细胞(mGSCs)为对象,用RE培养mGSCs,探讨RE对mGSCs增殖的影响。试验分别设置对照组,RE组,RE+LY(LY294002,PI3K抑制剂)组,RE+PD(PD98059,MAPKK抑制剂)组。选取培养不同时间的mGSCs进行半定量与定量PCR分析,检测基因的表达情况。对培养48h的mGSCs进行Brdu荧光染色。结果显示,RE培养能够显著促进mGSCs的增殖,培养后C-myc等增殖标记基因表达上调,加入LY、PD抑制剂后,增殖效果显著降低;表明RE可能通过PI3K或MAPKK促进mGSCs的增殖。本研究证明了RE具有促进mGSCs增殖的作用,对于探明RE对mGSCs增殖调控的机理具有重要意义。
- 褚志礼孙军伟刘超王龙胡玥华进联
- 关键词：RETINOL增殖小鼠
- 猪肌肉卫星细胞的分离培养及生物学特性鉴定被引量：2
- 2011年
- 以猪胎儿为材料,采用胶原酶消化法或组织块法培养胎儿背部最长肌获得了肌肉卫星细胞,该细胞体外可以传到9代以上。培养的细胞多呈纺锤体型和梭型,具有明显的方向性,呈典型的长轴平行排列。流式细胞仪分析结果显示,该细胞呈CD29、CD166、CD45、CD44阳性,CD71、CD34阴性。RT-PCR检测发现其表达Desmin、C-Myc、Nanog、Pcna、Oct4、Klf4,弱表达Myog,不表达Sox2、MyoD。免疫组化染色发现其表达Desmin等肌肉细胞的特异性标记,同时表达Nanog、Pcna等多能性细胞标记。本试验建立了一种简便高效的猪肌肉卫星细胞体外分离和培养方法,得到的细胞具有肌肉卫星细胞的典型生物学特性,同时表达间质干细胞和多能性干细胞的部分标记。
- 吕晓朱海鲸曹晖孙军伟华进联
- 关键词：胚胎干细胞间质干细胞诱导多能干细胞
- Nanos3与生殖细胞发育分化被引量：3
- 2012年
- 小鼠Nanos3基因是果蝇Nanos的同源基因,是Nanos基因家族的一员.Nanos3是一种RNA结合蛋白,靠近其C端有两个非常保守且连续的Cys-Cys-His-Cys特异锌指结构域.研究显示,Nanos3在小鼠生殖细胞中特异表达,不仅在原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的维持方面发挥重要作用,而且是一种启动雄性生殖细胞分化程序的内源性因子,其在精子发生中的重要作用已引起越来越多的关注.探讨Nanos3的生物学功能,有助于了解生殖细胞发育过程中的部分重要机制.本文就Nanos3维持生殖细胞更新和原始生殖细胞的维持等作用作一综述.
- 于萌廉智敏华进联
- 关键词：自我更新生殖细胞
- Figla基因过表达促进小鼠胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化被引量：3
- 2012年
- 生殖系a因子(Figla)是最早表达的生殖细胞特异性转录因子之一,对卵泡的发育、Zp基因的表达和透明带的形成具有调节作用.Figla基因异常会引起卵巢早衰的发生.本研究通过PCR自小鼠基因组中扩增出Figla基因,将其克隆到真核报告载体pDsRed1-N1,构建了携带609 bp的Figla重组载体pDsRed1-N1-Figla.用该载体转染小鼠胚胎干细胞(mESCs)系J1、小鼠成纤维细胞系NIH-3T3、小鼠畸胎瘤细胞P19和小鼠精原细胞系GC1,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白(RFP)在细胞中的表达,同时检测转染细胞中Figla基因及其它生殖细胞特异性基因的表达.结果显示,转染2 d,mESCs内Figla总表达量明显增加,且内源性表达量亦有所提高,即转入的外源性Figla基因可以促进内源性Figla的启动和表达.免疫荧光染色显示,表达RFP的细胞同时表达生殖特异性基因Vasa,减数分裂特异性基因Stra8、Scp3及卵母细胞标志基因Zp3.通过QRT-PCR检测发现,在转染3 d的细胞中,Vasa、Scp3和Zp1的表达较对照组均有明显上调,而Oct4和Stra8的表达量下降.研究表明,Figla基因对生殖特异性基因的表达具有调控作用,可以激活雌性生殖基因表达,为更清楚地了解Figla基因在生殖细胞生长发育过程中的调控机制,以及发现该基因在生殖细胞中的新功能奠定了基础.
- 胡玥褚志礼白耀富王龙王一然彭莎华进联
- 关键词：胚胎干细胞
- 雄性关中奶山羊胎儿生殖细胞增殖分化的研究被引量：3
- 2011年
- 旨在阐明山羊胚性腺的发生规律,这对于山羊的繁殖育种、丰富胚胎学有关研究内容都具有重要意义。该研究对22枚从39日胎龄胎儿至初生奶山羊性腺进行石蜡组织切片,用组织学和免疫组化、免疫荧光方法对山羊胎儿性腺发育的组织学特点,山羊胎儿性腺发育过程中VASA及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达规律进行了系统研究。结果表明:奶山羊性腺在39～47日胎龄时已出现精索和白膜,已发生性别分化,并可分辨出生殖细胞、支持细胞及间质细胞,细胞增殖率较高。在大约50日胎龄前生殖细胞可称作性原细胞,细胞为球形、核质比高。在51～59日胎龄,生殖细胞发生剧烈变化:体积增大、核质比降低。此后逐渐由性原细胞发育为前精原细胞,并且在此期间表达VASA的生殖细胞增多。50～90日胎龄,生殖细胞增殖率最高,生殖细胞所占比例也达到峰值。在90日胎龄后生殖细胞增殖率下降,比例下降,间质细胞大量退化。结果表明,山羊胎儿的生殖细胞在50日胎龄后由性原细胞发育为前精原细胞,生殖细胞在50～90日胎龄的增殖率最高,VASA可作为雄性山羊胎儿前精原细胞的标记。
- 刘超朱海鲸刘维帅郑伟俊王静杨春荣华进联
- 关键词：分化雄性奶山羊
