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组织因子／活性凝血7因子体外激活大肠癌LOVO细胞基质金属蛋白酶-7基因启动子: 2008年; 目的观察组织因子（TF）／活性凝血7因子（FVIIa）复合物对大肠癌LOVO细胞系基质金属蛋白酶-7（MMP-7）基因启动子的激活。方法靶向组织因子基因的小干扰RNA（siRNA）构建及稳定转染获得TFRNAi LOVO细胞系；Western blot检测组织因子的干扰效率；NNP-7基因上游5′非翻译区DNA调节序列及缺失体克隆到pGL3-basic荧光素酶报告基因载体；双报告基因检测FVIIa因子存在时，MMfr7．luc1592、MMP7．luc978、MMP7．luc615瞬时转染LOVO细胞或TFRAi LOVO细胞启动子活性。结果Western blot灰度半定量显示TFRNAi LOVO细胞中组织因子蛋白表达水平较LOVO细胞下降41．7％；双报告基因检测FVIIa因子存在时MMP7．luc1592具有启动子活性并依赖组织因子，活性区域位于MMP-7基因转录起始点上游-978bp及-615bp之间。结论TF／FVIIa能直接激活大肠癌LOVO细胞系MMP-7基因启动子。; 张剑权万远廉刘玉村汪欣汤坚强吴涛朱静潘义生; 关键词：结肠癌基质金属蛋白酶-7 启动子

组织因子促进人类大肠癌细胞的侵袭及与基质金属蛋白酶类的相关性研究被引量：13: 2005年; 目的:探讨组织因子促进人类大肠癌细胞侵袭的机制,研究其与MMP 2和MMP 9的相关性。方法:获取转染正义/反义TFcDNA的人类大肠癌HT 29细胞系/LoVo细胞系裸鼠皮下种植瘤标本,应用Westernblot和RT PCR技术,检测转染组和对照组肿瘤组织中MMP 2和MMP 9的蛋白和mRNA表达水平;同时采用明胶酶谱法检测转染反义LoVo细胞系培养上清中的MMP 2和MMP 9活性的变化。结果:与对照组相比较,转染正义TFcDNA的HT 29细胞系成瘤标本TF表达升高,其所对应的MMP 9和MMP 2蛋白水平和mRNA水平表达也明显升高; 转染反义TFcDNA的LoVo细胞系成瘤标本中的TF,MMP 9和MMP 2蛋白和mRNA水平表达明显低于对照组,转染反义TFcDNA的LoVo细胞系培养上清液中的MMP 9和MMP 2活性较对照组低;MMP 9和MMP 2表达与组织因子表达具有相关性。结论:组织因子促进人类大肠癌细胞的侵袭,其部分机制可能与组织因子上调MMP 9和MMP 2的表达有关,组织因子可能是大肠癌细胞分泌MMPs的内在激动剂。; 汤坚强万远廉刘玉村戎龙汪欣吴涛潘义生叶京明姚宏伟朱静; 关键词：基质金属蛋白酶类 HT-29细胞系 MMP-9活性转染反义皮下种植瘤明胶酶谱法

组织因子/活化凝血Ⅶ因子复合物对大肠癌LoVo细胞系表达基质金属蛋白酶-7的调控作用被引量：1: 2007年; 目的:观察活化凝血Ⅶ因子(actived factorⅦ,FⅦa)对大肠癌LoVo细胞系表达基质金属蛋白酶-7(ProMMP-7)的影响,探讨其可能的组织因子信号转导通路。方法:(1)用Western blot检测100nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞系不同时间点及不同浓度FⅦa刺激LoVo细胞系12h后细胞ProMMP-7蛋白水平;用Western blot检测5mg/L组织因子(tissue factor,TF)抗体预孵育LoVo细胞系0.5h后再给予100nmol/L FⅦa刺激12h后细胞ProM-MP-7蛋白水平。(2)观察用100nmol/L FⅦa刺激时丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)各亚通路信号蛋白(包括细胞外信号调节激酶ERK1/2,丝裂原激活蛋白激酶P38及c-Jun-N末端蛋白激酶JNK)磷酸化水平变化。(3)在FⅦa刺激前0.5h分别加入ERK1/2,P38和JNK信号通路特异阻断剂PD98059,SB203580和SP600125,培养12h后检测细胞ProMMP-7蛋白的变化。结果:(1)FⅦa可刺激LoVo系细胞表达ProMMP-7并呈时间依赖性和剂量依赖性,在刺激的12h左右ProMMP-7达峰值,是正常对照组的5.5±0.6倍(P=0.006);用TF抗体预处理的LoVo细胞系,其FⅦa上调ProMMP-7表达的作用被完全阻断。(2)用100nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞5min时,MAPKs磷酸化活性蛋白p-ERK1/2和p-P38表达水平开始增加,至10min时达峰值(分别为对照组的2.2±0.3倍和3.9±0.5倍,P值分别为0.02和0.01),存在时间效应关系,而p-JNK活性无改变(为对照组的1.1±0.1倍)。(3)ERK1/2通路阻断剂PD98059及P38通路阻断剂SB203580可部分减少FⅦa上调LoVo细胞系表达ProMMP-7的效应,分别降低了32%±5%(P=0.01)和61%±10%(P=0.009),JNK通路特异性阻断剂SP600125对ProMMP-7的表达无明显影响。结论:FⅦa通过与LoVo细胞表面的TF结合诱导ProMMP-7的表达,并呈时间依赖性和剂量依赖性;ERK1/2和P38MAPKs亚通路参与LoVo细胞TF信号转导通路并与TF/FⅦa调控ProMMP-7表达有关。; 汤坚强万远廉刘玉村戎龙汪欣吴涛潘义生朱静; 关键词：结直肠肿瘤基质金属蛋白酶类丝裂原激活蛋白激酶类

组织因子和基质金属蛋白酶-9在乳腺癌中的表达与预后分析被引量：7: 2008年; 目的:研究乳腺癌组织中组织因子(tissuefactor,TF)和基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的表达并分析其阳性表达与预后的关系。方法:应用二步法(EnVision)免疫组化方法检测71例乳腺癌组织中TF和MMP-9的表达情况并分析其随访资料。结果:TF和MMP-9在71例乳腺癌组织中染色阳性率分别为43.7%和42.3%。K-M法单因素分析显示其阳性表达患者的5年生存率低于阴性患者(P<0.05)。COX多因素分析提示TNM分期、淋巴结转移是乳腺癌的预后因子,而TF、MMP-9不能作为独立预后因子(P>0.05)。结论:TF和MMP-9在乳腺癌组织中的阳性表达率较高,对判断患者的预后有一定的作用。; 赵建新林增茂姚宏伟万远廉; 关键词：乳腺癌基质金属蛋白酶免疫组织化学预后

过氧化物酶增殖物激活受体γ配体曲格列酮对大肠癌细胞生长的影响被引量：3: 2006年; 目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisom e proliferator-activated receptorγ-,PPARγ)在大肠癌细胞SW-480中的表达及PPARγ被其配体曲格列酮(troglitazone,TGZ)活化后对SW-480细胞生长的影响。方法:将SW-480细胞分为对照组和TGZ不同浓度(5,10,20,25μmol/L)处理组。采用免疫印迹(W estern b lot)法检测SW-480细胞中PPARγ蛋白质的表达,利用细胞计数法和3-(4,5二-甲基-2噻-唑)-2,5二-苯基溴化四唑(MTT)检测TGZ和PPARγ选择性阻断剂T0070907对SW-480细胞生长的影响,用流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:大肠癌细胞系Lovo和HT-29中均有PPARγ高表达,SW-480细胞有相对低表达。细胞计数法和MTT法显示随着TGZ浓度的增加,TGZ对大肠癌细胞SW-480生长抑制作用也增加。各组间比较差异有统计学意义。用TGZ的不同浓度(5,10,20,25μmol/L)刺激SW-480后第48小时的抑制率分别为3.3%,8.3%,25%,29%。用流式细胞仪检测显示TGZ对SW-480细胞诱导凋亡,而且有剂量依赖关系。用TGZ刺激SW-480细胞后48 h测细胞凋亡时发现,TGZ浓度低于15μmol/L时,TGZ对SW-480细胞诱导凋亡作用弱。TGZ浓度≥20μmol/L时,诱导凋亡作用明显,与未加药组比较差异有统计学意义。TGZ浓度达25μmol/L时诱导凋亡更明显。细胞计数法显示随着PPARγ选择性阻断剂T0070907浓度的增加,对大肠癌细胞SW-480生长诱导作用也增加。不同组间比较差异有统计学意义。结论:PPARγ在大肠癌细胞Lovo,HT-29,SW-480中均有表达,PPARγ被其配体活化后可抑制大肠癌细胞的生长,诱导凋亡。; 卡马尔万远廉刘玉村汪欣崔巍王春雷陈焕年王会元朱静; 关键词：PPARΓ 结直肠肿瘤酮类

反义组织因子cDNA转染对LoVo细胞基质金属蛋白酶-7及其抑制物-1表达的影响被引量：5: 2006年; 目的探讨反义组织因子cDNA转染对LoVo细胞基质金属蛋白酶(MMP)-7及其抑制物(TIMP)-1表达的影响。方法利用构建有反义TFcDNA的质粒pcDNA3．1/Zeo转染LoVo细胞系,应用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染组和对照组细胞系中ProMMP-7/TIMP-1蛋白和mRNA表达水平。结果10%胎牛血清刺激组中,转染反义TFcDNA的LoVo细胞系中MMP-7 mRNA的表达水平明显低于空载体组和未转染细胞组(分别为0．07±0．02、0．25±0．05、0．24±0．06,P＜0．05),其ProMMP-7蛋白表达也低于对照组(分别为0．10±0．02、0．21±0．04、0．20±0．03,P＜0．05)；TIMP-1在三组细胞中的表达未见明显改变；MMP-7表达与各组细胞中的TF表达相关(r=0．938,P＜0．01)。结论MMP-7/TIMP-1表达的失平衡在组织因子促进人类大肠癌细胞侵袭转移的过程中发挥作用。; 汤坚强万远廉刘玉村戎龙汪欣朱静; 关键词：转染金属蛋白酶类

组织因子促进肿瘤侵袭及转移的研究进展被引量：5: 2007年; 肿瘤导致患者死亡的主要原因是侵袭和转移，涉及癌脱离原发病灶、通过淋巴和血管迁移、躲避免疫监视、黏附血管内皮、穿过淋巴和血管、锚定生长等一系列病理过程。近年发现组织因子（tissue factor，TF）与肿瘤侵袭和转移密切相关。组织因子是外源性凝血途径始动因子，TF涉及血管形成、胚胎发育、细胞黏附和运动、细胞内信号转导以及恶性肿瘤的侵袭与转移等生物学过程，目前对其中的机制尚不十分清楚。; 张剑权万远廉; 关键词：肿瘤侵袭外源性凝血途径细胞内信号转导血管内皮细胞黏附生物学过程

TF/FⅦa体外诱导大肠癌LOVO细胞系表达MMP-7mRNA的研究被引量：2: 2007年; 目的观察组织因子/活性凝血七因子(TF/FⅦa)诱导大肠癌 LOVO 细胞系表达基质金属蛋白酶7(MMP-7)mRNA 及信号传导途径。方法构建靶向组织因子基因干扰的 RNAi 质粒并稳定转染 LOVO 细胞获得 TFRNAi LOVO 细胞系,Western blot 检测干扰效率;RT-PCR 观察100 nmol/L FⅦa刺激0、4、8、12、24 h 后 LOVO 细胞中 MMP-7mRNA 的变化,Northern blot 证实时间效应及测定0、10、50、100、200 nmol/L FⅦa刺激后的 MMP-7mRNA 水平;100 nmol/L FⅦa分别刺激LOVO 细胞0、4、8、12、16、24 h,Western blot 测定 p-P38的水平;Northern blot 分别检测预先使用10 mmol/L P38阻断剂 SB203580 0.5 h 再以100 nmol/L FⅦa刺激 LOVO 细胞8 h 及100 nmol/L FⅦa刺激 TFRNAi LOVO 细胞系8 h 后 MMP-7mRNA 水平。结果 Northern blot 结果显示 FⅦa刺激MMP-7mRNA 表达存在时间、浓度依赖性;Western blot 测定 FⅦa刺激 p-P38表达存在时间依赖性。应用 P38通路阻断剂 SB203580后 MMP-7mRNA 基因表达下降59.2%,转染组织因子干扰质粒的LOVO 细胞中,MMP-7mRNA 的表达水平较 LOVO 细胞组下降48%。结论活性Ⅶ因子与组织因子结合诱导体外大肠癌 LOVO 细胞系表达 MMP-7mRNA,其机理可能与 P38通路有关。; 张剑权万远廉刘玉村汪欣汤坚强吴涛朱静潘义生; 关键词：结直肠肿瘤肿瘤转移 P38

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国家自然科学基金(30471683)

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