湖北省自然科学基金(2010CDZ036)
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 相关作者：孟忠吉陈悦张永红柯昌征李东更多>>
- 相关机构：湖北医药学院附属太和医院太和医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNA干扰上调天然免疫被引量：1
- 2013年
- 目的:研究特异性RNA干扰对于天然免疫的上调作用。方法:分别分离WHV感染的土拨鼠和WHV转基因小鼠原代肝细胞,转染针对WHV、小鼠β-actin和GAPDH的siRNA。Northern blot和Real-time RT-PCR分别检测原代肝细胞中WHV、MxA、MHCⅠ、β-actin、GAPDH、IFN-β和IP-10的mRNA水平。结果:针对WHV、小鼠β-actin和GAPDH的siRNA抑制靶基因mRNA伴随MxA、MHCⅠ、IP-10等干扰素刺激基因的上调表达。这种干扰素刺激基因的上调表达只有在靶基因被特异siRNA降解时出现,呈剂量和沉寂效应依赖性,而且可以被siRNA特异性抑制剂所阻断。结论:RNAi上调天然免疫可能增强siRNA的抗病毒效应,有可能在抗病毒RNAi研究中发挥重要作用。
- 孟忠吉张永红李东汤守兵柯昌征陈悦
- 关键词：RNA干扰土拨鼠肝炎病毒原代肝细胞天然免疫
- 乙型肝炎肝衰竭的临床特征及治疗分析
- 目的:揭示乙型肝炎肝衰竭患者临床特征,探讨乙型肝炎肝衰竭患者病情进展和预后预测指标,分析乙型肝炎肝衰竭适用的治疗方法。方法:收集并分析我科2012年7月至2014年3月收治入院的100例乙型肝炎肝衰竭患者的临床资料、实验...
- 刘平龚作炯孟忠吉
- 文献传递
- siRNA联合恩替卡韦在原代肝细胞中抑制土拨鼠肝炎病毒基因表达和复制被引量：1
- 2013年
- 目的:在原代土拨鼠肝细胞中研究siRNA联合恩替卡韦(ETV)对土拨鼠肝炎病毒(WHV)基因表达和复制的抑制作用。方法:分别设计合成针对WHV PreS1、S、C、X基因的4种siRNA,转染原代土拨鼠肝细胞,同时给予ETV处理,Southern和Northern印迹检测WHV病毒复制中间体和mRNA水平,realtime PCR检测细胞上清中WHV DNA。结果:4种siRNA对WHV基因表达和复制的作用显示出不同的动力学特征,siWHs和siWHx的抑制作用最强,而siWHpreS1和siWHc的活性相对较弱。在原代肝细胞中,首先出现的是WHV mRNA水平的降低,然后是WHV复制中间体水平的降低,siWHs和siWHx最高抑制60%～70%的mRNA和病毒复制中间体,同时抑制细胞上清中90%的WHV DNA。另外siWHx与ETV联合应用不仅可以增强抗病毒作用,而且可以防止ETV停药反跳。结论:siRNA在WHV自然感染的原代肝细胞中可以有效抑制病毒的基因表达和复制,因而siRNA有可能开发成为新的抗HBV药物,尤其适用于核苷(酸)类似物的联合应用。
- 孟忠吉张永红柯昌征李东汤守兵陈悦
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒原代肝细胞核苷(酸)类似物
- RNAi通过PKR和TLR通路活化天然免疫
- 2013年
- 目的:研究特异性RNA干扰(RNA interference,RNAi)上调天然免疫的分子机制。方法:分别从土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)转基因小鼠和WHV慢性感染的土拨鼠分离原代肝细胞,转染针对WHV和小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),同时用特异性siRNA抑制剂和信号通路抑制剂,研究RNA活化蛋白激酶(RNA-activated protein kinase,PKR)、Toll样受体(toll-like receptor,TLR)3、7/8和视黄酸诱导基因Ⅰ(Retinoic acid-inducible gene-Ⅰ,RIG-Ⅰ)/黑色素瘤分化相关基因5(Melanoma differentiation-associated gene-5,MDA5)等信号通路在RNAi上调天然免疫中的作用,Real-time RT PCR检测靶基因和MxA的mRNA水平,Western blot检测信号通路分子磷酸化PKR、核因子κB(Nuclear FactorκB,NF-κB)和干扰素调节因子(interferon regulator factor,IRF)3的蛋白水平。结果:针对WHV和GAPDH的RNAi介导的黏病毒抵抗蛋白A(myxovirus resistance A,MxA)上调可以被PKR抑制剂和内体酸化抑制剂所阻断,特异性RNAi可以诱导PKR磷酸化和NF-κB与IRF3的核内转位。结论:特异性RNAi介导的靶RNA降解产物可能通过PKR和TLR-3,-7/8通路活化天然免疫。
- 孟忠吉张永红李东汤守兵柯昌征陈悦
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒原代肝细胞天然免疫
- RNA干扰抑制土拨鼠肝炎病毒X基因表达被引量：4
- 2011年
- 目的:研究土拨鼠肝炎病毒(WHV)序列特异性siRNA对WHV X基因表达的抑制作用。方法:以WHV全长质粒为模板PCR扩增WHV X基因,克隆到pXF3H载体构建WHX-HA融合蛋白真核表达质粒(pXF3H-WHx);合成siRNA的模板序列,克隆到siRNA表达质粒psiRNA构建shRNA表达质粒(psiWx1、psiWx2);质粒pXF3H-WHx与psiWx1、psiWx2共转染Hela细胞,Western blot检测WHV X蛋白的表达。结果:Hela细胞中WHVX蛋白的表达受siRNA的抑制,psiWx1表达的siRNA抑制90%以上的X蛋白表达,并呈剂量依赖性,但是WHV X基因靶位点中2个突变的核苷酸可使这种干扰作用消失。结论:质粒表达的siRNA序列特异性抑制WHV X蛋白的表达。
- 孟忠吉吴珺张永红汤守兵李东柯昌征陈悦
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒RNA干扰小干扰RNA
- 乙型肝炎基因治疗的前景展望被引量：3
- 2014年
- 乙肝病毒（Hepatitis B Virus,HBV）感染呈全球分布,而我国乃至亚太地区是乙型肝炎高发地区,严重威胁人类健康。全球约20亿人曾感染过HBV,其中3.5亿人为慢性HBV感染者,每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞肝癌[1]。
- 孟忠吉
- 关键词：乙型肝炎基因治疗乙肝病毒
- PTVE联合PSE双介入治疗肝硬化并门脉高压、脾功能亢进被引量：5
- 2013年
- 目的:观察经皮经肝胃冠状静脉栓塞术(percutaneous transhepatic variceal embolization,PTVE)联合部分脾栓塞术(partial splenic embolization,PSE)的双介入栓塞术治疗肝硬化并门脉高压及脾功能亢进的临床疗效。方法:10例肝硬化并门脉高压、脾功能亢进患者,给予PTVE治疗预防出血,3～7 d后,再行PSE降低门脉压及改善脾功能亢进。随访3月,观察止血率、再出血率、血象、肝功能、胃镜及并发症等指标。结果:10例患者中8例完成栓塞治疗及后续PSE治疗,2例急性出血患者迅速止血。随访3月,全部病例肝功能改善、血细胞回升至正常水平,无再出血和严重并发症发生。其中3例胃镜复查显示2例食管胃底静脉曲张均减轻,1例消失。结论:PTVE联合PSE的双介入栓塞术治疗肝硬化并门脉高压及脾功能亢进疗效确切,安全性好,值得临床推广。
- 张银华杜恩辅孟忠吉
- 关键词：部分脾栓塞术门脉高压脾功能亢进
- 急性肝衰竭病因与预后分析被引量：1
- 2013年
- 目的:根据最新指南回顾性分析急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)病因构成与预后。方法:通过检索及病例查阅共确定61名ALF患者,分析其病因、实验室指标及预后。结果:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染为ALF的主要病因,占85.2%。死亡组与存活组比较,除丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、肌酐(creatinine,Cr)外,其他指标如年龄、白蛋白(albumin,Alb)、总胆红素(total bilirubin,TBil)、血清钠、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、国际标准化比值(international normalized ratio,INR)组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HBV感染是湖北省及周边地区ALF的主要发病原因。年龄、白蛋白、总胆红素、血清钠、凝血酶原时间、国际标准化比值等与ALF预后密切相关。
- 康健陈悦杨东亮孟忠吉
- 关键词：急性肝衰竭病因学预后
- 土拨鼠肝炎病毒转基因小鼠模型的建立被引量：1
- 2014年
- 目的：建立土拨鼠肝炎病毒（Woodchuck hepatitis virus,WHV）转基因小鼠模型,以用于嗜肝病毒感染的发病机制研究。方法：采用微注射技术将1.3-倍WHV基因[野生型和WHV S抗原（WHV surface antigen,WHsAg）缺陷型]注射入C57BL/6xC3H小鼠的胚胎,然后与C57BL/6小鼠回交,建立WHV转基因小鼠。肝内WHV DNA复制和mRNA表达水平分别采用Southern杂交和real-time RT-PCR检测,血清中WHV病毒载量采用real-time PCR检测,HE染色进行肝组织病理学检测,ELISA检测血清中WHV核心抗体,流式细胞仪检测WHV核心抗原（WHV core antigen,WHcAg）特异性细胞毒性T淋巴细胞。结果：成功建立野生型WHV转基因小鼠和WHsAg缺陷型转基因小鼠。WHsAg缺陷型小鼠肝内WHV复制水平显著高于野生型小鼠,野生型WHV转基因小鼠血清WHV载量104-108copies/mL。而且雄性小鼠肝内和血清WHV复制水平显著高于雌性小鼠。16周龄以上的WHV转基因小鼠约半数血清可检测出高滴度的WHV核心抗体。而且少数转基因小鼠可以检测到WHcAg特异性细胞毒性T淋巴细胞。结论：这种新建的WHV转基因小鼠肝内可检测到病毒复制和mRNA表达,血清有高水平的WHV病毒载量,可以用于嗜肝病毒感染的发病机制、抗病毒治疗等研究。
- 孟忠吉张永红柯昌征李东汤守兵陈悦
- 关键词：土拨鼠肝炎病毒转基因小鼠细胞免疫
- 核酸内切酶制备的siRNA抑制HBV基因表达和复制
- 2012年
- 目的:研究核酸内切酶制备的siRNA(esiRNA)对HBV基因表达和复制的抑制作用。方法:利用分子生物学方法制备了分别针对HBV S基因和C基因的esiRNA(SesiRNA、CesiRNA),与HBV复制型质粒pHY106+wta共转染HepG2细胞,化学发光微粒免疫分析方法检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg,Northern和Southern印迹检测HBV的mRNA和病毒复制中间体水平。结果:EsiRNA特异抑制HBV基因表达和复制,呈剂量依赖性。在工作浓度为100 nM时,SesiRNA和CesiRNA分别抑制细胞培养上清中75.96%和68.09%的HBsAg,79.69%和78.40%的HBeAg,降低细胞内60%和58%的HBV mRNA,抑制90%和87%的HBV病毒复制中间体。而且SeciR-NA对于多种HBsAg自然突变体的表达均有抑制作用。结论:EsiRNA可以有效抑制HBV的基因表达和病毒复制,尤其对于HBV的不同基因型/亚型和准种可以发挥广谱效应。
- 孟忠吉张永红汤守兵柯昌征李东陈悦
- 关键词：RNA干扰
