国家自然科学基金(30471658)
- 作品数：11 被引量：38H指数：4
- 相关作者：王焱林何祥虎王成夭李娜代乐更多>>
- 相关机构：武汉大学中国预防医学科学院湖北省妇幼保健院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响被引量：5
- 2007年
- 目的评价重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素加氧酶-1（rHO-1）基因转染在大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法健康雄性SD大鼠81只，体重220～280g，随机分为4组：假手术组（SH组，n=9）、生理盐水组（NS组，n=24）、重组腺相关病毒-荧光蛋白组（rAAV—EGFP组，n=24）和重组腺相关病毒-HO-1组（rAAV-HO-1组，n=24）。NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-HO-1组分别心肌注射600μl生理盐水、rAAV-EGFP（1．5×10^11v．g．）或rAAV-HO-1（1．5×10^11v．g．）。在基因转染后3个月，NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-HO-1组各处死3只大鼠，取注射部位心肌，通过测定心肌细胞荧光蛋白的表达，计算转染率，并通过免疫组化染色和RT-PCR法检测HO-1蛋白和HO-1 mRNA的表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min，再灌注120min的方法建立心肌缺血再灌注模型；再灌注120min后，处死大鼠，测定心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果心肌细胞转染率为（53．5±2．0）％。与NS组比较，rAAV-HO-1组HO-1蛋白及HO-1 mRNA表达增加（P〈0．01）；与rAAV-EGFP组比较，rAAV-HO-1组HO-1蛋白及HO-1 mRNA表达增加（P〈0．01）；与SH组比较，NS组和rAAV-EGFP组SOD活性下降，MDA含量升高（P〈0．01）；与NS组和rAAV-EGFP组比较，rAAV-HO-1组SOD活性升高，MDA含量降低（P〈0.01）。NS组及rAAV-EGFP组心肌细胞超微结构损伤较SH组和rAAV-HO-1组重。结论腺相关病毒介导的血红素加氧酶-1基因转染大鼠心肌细胞后，可减轻心肌缺血再灌注损伤，其机制与抗氧化有关。
- 王成夭代乐王焱林何祥虎李娜
- 关键词：心肌再灌注损伤腺病毒科
- 大鼠气管插管直视下心肌注射方法被引量：1
- 2006年
- 目的:建立大鼠气管插管后开胸直视下心肌注射模型,探讨心血管疾病治疗研究的新兴方法。方法:大鼠开胸后心肌内注射腺相关病毒,并与同期对照组比较,观察大鼠术后存活率、一般状况及病毒感染情况。结果:手术组术后存活率84%,心肌切片可见荧光。结论:该法有效且重复性好,可较理想的将药物注射入心肌,对治疗心血管疾病的相关研究有重要意义。
- 代乐王焱林王成夭何祥虎
- 关键词：SPRAGUE-DAWLEY大鼠心肌注射气管插管
- 血红素氧合酶-1基因转染对大鼠心肌缺血／再灌注损伤诱导心肌细胞凋亡的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素氧合酶-1（rHO—1）基因转染对心肌缺血／再灌注（I／R）损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法95只体重225～250g的雄性SD大鼠随机分为假手术组（SO组，n-8）、生理盐水组（NS组，n=29）、rAAV-荧光蛋白组（rAAV—EGFP组，n=29）及rAAV—rHO-1组n=29）。NS组、rAAV—EGFP组和rAAV—rHO-1组分别于大鼠左心室前后壁共取4点分别注入生理盐水、rAAv—EGFP或rAAV—rHO-1病毒液共600μl。在基因转染后3个月，各组处死3只大鼠，取注射部位心肌，荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达并计算转染率；用免疫组化染色和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测HO-1的蛋白和mRNA表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min、再灌注120min建立心肌I／R模型；成模后处死大鼠测定其心肌梗死面积及心肌细胞凋亡指数（AI），光镜下观察心肌组织病理学改变。结果荧光显微镜下仅rAAV—EGFP组可见心肌有荧光蛋白表达，转染率为（53．54±2．0）％。与SO组比较，NS组、rAAV—EGFP组和rAAV—rHO-1组AI增加（P均〈0．01）；与NS组和rAAV—EGFP组比较，rAAV—rHO-1组HO—1的蛋白及mRNA表达增加，心肌梗死面积减小，AI减少（P均〈0．01）；NS组及rAAV—EGFP组心肌组织病理学损伤较SO组和rAAV—rHO-1组为重。NS组与rAAV—EGFP组间上述指标比较无统计学意义。结论rAAV介导的rHO-1基因转染大鼠心肌细胞后，能够显著减少心肌细胞凋亡，从而减轻心肌I／R损伤。
- 李娜王焱林王成天何祥虎代乐
- 关键词：血红素氧合酶心肌基因转染腺病毒科
- 携带血红素加氧酶1基因的重组腺相关病毒的制备被引量：4
- 2007年
- 目的:制备携带大鼠血红素加氧酶1(rHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)。方法:通过RT-PCR的方法,从大鼠脾脏组织中扩增rHO-1基因,克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV中构建重组质粒pSNAV-rHO-1,通过酶切和测序鉴定。利用Lipofectamine将pSNAV-rHO-1转染BHK-21细胞,G418筛选得到表达外源基因的细胞系BHK/rHO-1。用具有能表达Rap和Cap及包装重组AAV功能的一种重组单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2分别感染这株细胞系后收获并纯化病毒,DNA斑点杂交检测重组病毒滴度。结果:扩增了rHO-1基因,测序证实与GenBank中的一致,病毒滴度为1.5×1015v.g/L。结论:成功获得了高滴度、高纯度的重组AAV-rHO-1,这为以后心血管系统疾病的基因治疗研究奠定了基础。
- 何祥虎王焱林王成夭吴小兵代乐李娜
- 关键词：血红素加氧酶1腺相关病毒斑点杂交
- 介导人血红素加氧酶-1基因的重组腺相关病毒载体的构建被引量：2
- 2006年
- 目的:构建含人血红素加氧酶-1(hHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)载体并进行鉴定。方法:利用基因重组技术,采用限制性内切酶HindⅢ从质粒XM-6/hHO-1中将目的基因hHO-1基因片段切出,克隆到质粒PAAV-MCS的HindⅢ位点中,构建重组质粒pAAV-hHO-1,采用限制性内切酶酶切,PCR和DNA测序鉴定。结果:PCR扩增出1 317 bp大小的片段,酶切鉴定证实插入位点及方向与预期的完全一致;测序证实hHO-1与Gene Bank提供的原始序列完全一致。结论:成功构建了含hHO-1基因的重组腺相关病毒载体,为缺血性疾病基因治疗的研究奠定了基础。
- 何祥虎王焱林王成夭李娜代乐
- 关键词：血红素加氧酶-1腺相关病毒
- 大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响被引量：6
- 2008年
- 目的观察重组腺相关病毒介导大鼠血红素加氧酶-1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法雄性sD大鼠30只随机分成3组，对照组（C组，n=6），缺血再灌注组（I／R组，n=12），腺相关病毒介导血红素加氧酶-1基因组（A-r组，n=12）。基因转染3个月后，建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型，C组持续灌注100min，其他各组均平衡15rain，停灌40min与再灌注45min，记录冠脉流量（CF），测定冠脉流出液肌酸激酶（CK）活性，测定再灌注后45min时的心肌心肌组织超氧化物岐化酶（SOD）活性活性及丙二醛（MDA）含量，同时取每组大鼠心肌检测梗死面积、心肌细胞凋亡率以及心肌组织bax、bcl-2蛋白表达量。结果离体心肌Langendorff灌注后，与IYR组比较，A-r组在复灌后冠脉流出液CK活性降低（P〈0．01），复灌后45min后心肌MDA含量降低（P〈O．01），SOD活性增高（P〈0．01），梗死面积较小（P〈0．01），心肌组织bax表达量、心肌细胞凋亡率均显著下降，心肌组织bcl-2表达量明显增加（P〈0．01）。结论重组腺相关病毒血红素加氧酶1基因转染心肌后，可抑制离体缺血再灌注心肌细胞凋亡和增强心肌抗氧化能力。对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有显著保护作用。
- 颜学滔王焱林王成天何祥虎周立文
- 关键词：基因转染血红素加氧酶缺血再灌注
- 异丙酚对大鼠缺血再灌注心肌Toll样受体4、NF-κB及血清IL-6的影响被引量：8
- 2007年
- 目的探讨异丙酚对大鼠缺血再灌注心肌Toll样受体4（TLR4）、核转录因子加（NF-κB）和血清白细胞介素-6（IL-6）的影响。方法健康雄性SD大鼠40只，体重200～250g，随机分为4组，每组10只，假手术组（A组）左冠状动脉前降支只穿线；缺血再灌注组（B组）左冠状动脉前降支穿线结扎30min后，再灌注120min；A组和B组在缺血前10min经股静脉注射生理盐水5ml／kg后以5ml·kg^-1·h^-1持续静脉输注至再灌注120min；低剂量异丙酚组（C组）缺血前10min经股静脉注射异丙酚5mg／kg后以5mg·kg^-1·h^-1持续静脉输注至再灌注120min，余处理同B组；高剂量异丙酚组（D组）缺血前10min经股静脉注射异丙酚10mg／kg后以10mg·kg^-1·h^-1持续静脉输注至再灌注120min，余处理同B组。再灌注120min后，测定血清IL-6的浓度及心肌TLR4 mRNA、NF-κB蛋白的表达。结果与A组比较，B组、C组及D组心肌TLR4 mRNA、NF-κB蛋白表达上调，血清IL-6水平升高；与B组比较，C组和D组心肌TLR4 mRNA、NF-κB蛋白表达下调，血清IL-6水平降低；与C组相比，D组心肌TLR4 mRNA、NF-κB蛋白表达下调，血清IL-6水平降低。结论静脉注射异丙酚可抑制大鼠缺血再灌注心肌TLR4 mRNA、NF-κB的表达及血清IL-6浓度的升高，呈剂量依赖性。
- 郑勇萍王焱林王成天张宗泽
- 关键词：二异丙酚心肌再灌注损伤NF-ΚBTOLL样受体4
- 大鼠血红素加氧酶-1基因转染对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎性因子的影响
- 2007年
- 目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素加氧酶-1（HO-1）基因转染对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎性因子的影响。方法雄性SD大鼠93只，体重225．275g，随机分为4组：假手术组（SH组，n=12）、生理盐水组（NS组，n=27）、重组腺相关病毒．荧光蛋白组（rAAv-EGFP组。n=27）及重组腺相关病毒．血红素加氧酶-1组（rAAV-rHO-1组，n=27）。NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-rHO-1组分别于左心室前后壁共取4点注入600μl生理盐水、rAAV-EGFP或rAAV-HO-1病毒液。在基因转染后3个月，通过RT-PCR和Westernblot法检测HO-1mRNA和蛋白的表达，荧光显微镜下观察荧光蛋白的表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min、再灌注120min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注模型，再灌注120min后，处死大鼠，测定心肌梗死面积及血清TNF-α、IL-6水平，电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果rAAV-rHO-1组HO-1表达明显高于NS组和rAAV-EGFP组（P〈0．01），仅rAAV-EGFP组心肌观察到荧光蛋白的表达；与SH组比较，NS组、rAAV-EGFP组和rAAV-rHO-1组心肌梗死面积增加，血清TNF-α、IL-6水平明显升高（P〈0．05），心肌结构紊乱；与NS组和rAAV-EGFP组比较，rAAV-rHO-1组心肌梗死面积减少（P〈0．01），血清TNF-α、IL-6水平明显降低（P〈0．05），心肌结构破坏程度较轻。结论重组腺相关病毒介导大鼠血红素加氧酶-1基因转染大鼠心肌细胞后，降低炎性因子的产生，从而减轻心肌缺血再灌注损伤。
- 何祥虎王焱林王成夭吴小兵代乐李娜
- 关键词：心肌再灌注损伤转染腺病毒科
- 血红素氧合酶-1基因转染对大鼠心肌缺血再灌注过程中Toll样受体4表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的观察重组腺相关病毒（rAAV）介导大鼠血红素氧合酶-1（rHO-1）基因转染对心肌缺血再灌注（IR）过程中T011样受体4（TLR4）表达的影响。方法构建携带rHO-1基因的rAAV载体，并转染大鼠心肌细胞。基因转染后3个月，用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测HO-1mRNA表达。采用结扎左冠状动脉前降支30min、再灌注120min建立心肌IR模型。成模后测定心肌梗死面积，光镜下观察心肌组织病理学改变，采用蛋白印迹法（Westernblot）检测TLR4、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）和核转录因子-KB（NF—KB）的蛋白表达水平。结果rAAV—rHO-1组HO-1mRNA表达（1．67±0．32）较IR组（0．82±0．09）增加，差异有统计学意义（P〈0．05），同时心肌梗死面积较IR组减少（P〈0．05）、心肌组织病理学损伤较轻；rAAV—rHO-1组TLR4、TNF-a和NF—KB的蛋白表达量分别为（0．33±0．04、0．36±0．02、0．33±0．03），明显低于IR组（0．45±0．05、0．42±0．05、0．46±0．07），差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论rAAV介导的rHO-1基因转染大鼠心肌细胞后，通过降低心肌TLRd表达水平，抑制炎症反应，从而减轻心肌IR损伤。
- 李娜王焱林王成夭张宗泽何祥虎
- 关键词：血红素氧合酶基因转染腺病毒科TOLL样受体4
- 血红素加氧酶1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:观察重组腺相关病毒介导血红素加氧酶1(AAV-rHO-1)基因在大鼠心肌的表达情况,及其对大鼠心肌离体缺血再灌注损伤的影响。方法:雄性SD大鼠30只随机分成3组,对照组(C组,n=6),缺血再灌注组(I/R组,n=12),AAV-rHO-1基因组(A-r组,n=12)。基因转染3个月后,半定量RT-PCR检测转染基因的表达情况,并建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,C组持续灌注100 min,其他各组均平衡15 min,停灌40 min与再灌注45 min,记录各组心功能变化,测定冠脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)活性,测定再灌注后45 min时的心肌超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,同时取每组大鼠心肌检测梗死面积。结果:经半定量RT-PCR分析显示,血红素加氧酶在A-r组心肌中有效表达。离体心肌Langendorff灌注时,与I/R组比较,A-r组在复灌后各时间点心功能明显增强(P<0.01),复灌后冠脉流出液LDH活性降低(P<0.01),复灌后45 min后心肌MDA含量降低(P<0.01),SOD活性增高(P<0.01),梗死面积较小(P<0.01)。结论:腺相关病毒携带的血红素加氧酶1基因能有效地转染心肌组织,并在体内稳定表达,AAV-rHO-1转染预处理对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有显著保护作用。
- 颜学滔王焱林王成夭何祥虎
- 关键词：血红素加氧酶腺病毒转染心肌缺血再灌注
