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国家自然科学基金(30471660)

作品数：17 被引量：44H指数：4
相关作者：田玉科田学愎王公明陈建平杨辉更多>>
相关机构：华中科技大学广东省中医院中山大学附属第一医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 17篇中文期刊文章

领域

  • 16篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 5篇天冬氨酸
  • 5篇细胞
  • 5篇氨酸
  • 5篇NR2B
  • 4篇受体
  • 4篇基因
  • 4篇N-甲基-D...
  • 4篇表位
  • 3篇镇痛
  • 3篇神经痛
  • 3篇经痛
  • 3篇抗原
  • 3篇抗原表位
  • 2篇亚基
  • 2篇腰段
  • 2篇腰段脊髓
  • 2篇疫苗
  • 2篇永生化
  • 2篇镇痛效应
  • 2篇神经病

机构

  • 16篇华中科技大学
  • 2篇广东省中医院
  • 2篇中山大学附属...
  • 1篇山东省立医院
  • 1篇江汉大学附属...

作者

  • 16篇田玉科
  • 15篇田学愎
  • 10篇王公明
  • 9篇杨辉
  • 9篇陈建平
  • 7篇安珂
  • 5篇杨少兵
  • 4篇高峰
  • 3篇董航
  • 3篇项红兵
  • 2篇徐颖
  • 2篇罗婷
  • 1篇宋珂
  • 1篇王红
  • 1篇马国平
  • 1篇冯颢
  • 1篇金小高
  • 1篇曹菲
  • 1篇程秋菊
  • 1篇许爱军

传媒

  • 9篇中华麻醉学杂...
  • 1篇中华医学杂志
  • 1篇中华实验外科...
  • 1篇实用医学杂志
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇医学研究生学...
  • 1篇山西医科大学...
  • 1篇中国临床康复
  • 1篇Chines...

年份

  • 1篇2014
  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 2篇2008
  • 5篇2007
  • 7篇2006
共 17 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
rAd5／NR2B镇痛疫苗对神经病理性痛大鼠认知功能的影响被引量：1
2010年
目的评价N-甲基-D天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）基因重组腺病毒（rAd5／NR2B）对神经病理性痛大鼠认知功能的影响。方法雌性SD大鼠40只，体重180～200g，随机分为4组（n=10）：对照组（C组）、rAd5／NR2B镇痛免疫组（rAd5／NR2B组）、神经病理性痛组（SP组）和rAd5／NR2B镇痛疫苗＋神经病理性痛组（rAd5／NR2B＋SP组）。C组和rAd5／NR2B组分别胃内灌注生理盐水0．1ml和rAd5／NR2B镇痛疫苗1×10^8 PFU，2周后重复灌注。SP组制备神经病理性痛模型，1周后腹腔注射生理盐水0．1ml。rAd5／NR2B＋SP组胃内灌注rAd5／NR2B镇痛疫苗1×10^8 PFU，2周后重复灌注，再1周后制备神经病理性痛模型。测定大鼠机械缩爪阈值（MWT）。行Morris水迷宫实验测定大鼠认知功能，记录潜伏期和游泳速度。采用免疫组织化学法检测大鼠海马NR2B的表达水平。结果（1）与C组比较，rAd5／NR2B组MWT差异无统计学意义（P〉0．05），SP组和rAd5／NR2B＋sP组MWT降低（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组MWT升高（P〈0．05）。（2）各组游泳速度比较差异无统计学意义（P〉0．05）；与C组比较，rAd5／NR2B组潜伏期差异无统计学意义（P〉0．05），SP组和rAd5／NR2B＋SP组潜伏期延长（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组潜伏期差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）与C组比较，rAd5／NR2B组和rAd5／NR2B＋SP组海马NR2B表达差异无统计学意义（P〉0．05），SP组海马NR2B表达上调（P〈0．05）；与SP组比较，rAd5／NR2B＋SP组海马NR2B表达下调（P〈0．05）。结论rAd5／NR2B疼痛疫苗对神经病理性痛大鼠认知功能无明显影响。
杨少兵王公明杨辉高峰田学愎刘希江罗婷田玉科
关键词：腺病毒科神经痛
骨癌痛模型大鼠患侧腰段脊髓p38α和p38β的细胞定位及其意义被引量：5
2007年
目的 观察骨癌痛模型大鼠患侧腰段脊髓p38d和p38B的分布及细胞定位，探讨其在骨癌痛中的作用机制。方法 选择雌性SD大鼠20只，随机分为2组，每组10只：A组（对照组）：左侧胫骨上段骨髓腔注入3μl Hanks液；B组（模型组）：左侧胫骨上段骨髓腔注入3μl MADB-106大鼠乳腺癌细胞（4．8×10^3／μl）。术前及术后14d，各组大鼠隔日观察机械痛及辐射热痛阈值变化。第14d，取大鼠脊髓L4～6节段，采用免疫组织化学ABC法和荧光双标法观察骨癌痛模型大鼠患侧腰段脊髓p38α和p38β免疫反应阳性产物的分布变化和细胞定位。结果 A组大鼠对机械、辐射热痛刺激的缩爪阈值在术后各时间点组内相比，差异无统计学意义；B组大鼠对辐射热痛刺激缩爪阈值在术后的前6d与A组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；术后第14d，与A组大鼠对机械痛刺激缩爪阈值和辐射热痛阈值相比，B组差异有统计学意义（P〈0．05）。B组大鼠患侧腰段脊髓背角Ⅰ～Ⅳp38ct和p38B免疫反应吸光值明显高于A组，两组相比差异有统计学意义（均P〈0．05）。荧光双标显示患侧腰段脊髓背角p38d与神经元特异性核蛋白标志物NeuN有共表达，p38B与小胶质细胞标志物OX-42有共表达。结论 脊髓p38d和p38B参与了骨癌痛的发生和发展，p38d主要在脊髓神经元表达，而p38B则在脊髓小胶质细胞中表达。
董航田玉科项红兵田学愎金小高
关键词：骨肿瘤脊髓
NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠的镇痛效应被引量：2
2008年
目的评价NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠的镇痛效应。方法成年雌性SD大鼠，体重180～200g，制备保留性神经损伤（SNI）模型，7d后选取SNI模型制备成功的大鼠18只，随机分为3组（n=6），NR2B组沿背部两侧皮下多点注射NR2B多肽疫苗50μl（含NR2B100μg）3次，每隔2周注射1次；PBS组和KLH组分别给予PBS50μl和匙孔虫戚血蓝蛋白100μg，均用弗氏佐剂稀释至100μl。分别于制备SNI前1d（基础值）、第1次免疫前1d及第3次免疫后14d时测定机械痛阈；分别于制备SNI前1d及第3次免疫后14d时取血清和脑脊液，测定NR2B抗体滴度，然后处死大鼠，取L3-5，脊髓组织，其中3只采用免疫组化法测定脊髓背角胶质纤维酸性蛋白表达水平，反映星形胶质细胞激活程度；另外3只采用Western blotting法测定脊髓背角NR2B蛋白表达水平。结果NR2B组第3次免疫后14d时血清及脑脊液中均可检测到NR2B抗体，而SNI前1d时未检测到NR2B抗体，PBS组及KLH组各时点均未检测到NR2B抗体。与基础值比较，各组机械痛阈均降低（P〈0．05）；与PBS组和KLH组比较，NR2B组第3次免疫后机械痛阈升高，脊髓背角星形胶质细胞激活程度降低，NR2B蛋白表达下调（P〈0．05）。结论NR2B多肽疫苗对神经病理性痛大鼠具有镇痛作用，其机制与进入脊髓的NR2B抗体下调了NR2B蛋白表达有关。
冯颢王公明王红陈建平杨少兵许爱军曹菲田玉科
关键词：N-甲基-D-天冬氨酸神经痛
四环素调控系统修饰永生化大鼠星形胶质细胞株的构建及鉴定
2006年
目的构建四环素及其衍生物强力霉素诱导表达目的基因的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法用脂质体法将逆转录病毒载体四环素调控系统中的质粒pRevTet-On转染病毒包装细胞 PT67,经筛选培养后获得病毒载体RevTet-On,采用RT-PCR进行鉴定,并应用NIH313细胞测定病毒滴度。将RevTet-On感染永生化大鼠星形胶质细胞,用有限稀释法挑选阳性细胞单克隆后扩大培养,每个克隆瞬时转染含萤光素酶报告基因的质粒pRevTRE-Lue,加入强力霉素48h后分别检测其萤光素酶活性值,挑选出强力霉素诱导表达高、背景表达低的细胞株并检测其诱导表达的时效、量效关系。结果 RT-PCR结果显示逆转录病毒包装成功,病毒最高滴度为7．4×105CFU／ml。RevTet-On转染永生化大鼠星形胶质细胞后挑选出48个单克隆,瞬时转染pRevTER-Luc后筛选出1株高表达低背景细胞株, 其诱导表达值为876．1 RLU,背景表达值为42．5 RLU,诱导倍数为20．6。该细胞株在加入诱导因子强力霉素1 h后目的基因即开始表达,在24 h时达到高峰,在强力霉素浓度100-2 000 ng/ml的范围内, 其诱导表达活性与药物浓度呈剂量依赖性。结论含四环素调控系统的永生化大鼠星形胶质细胞株诱导活性可靠,可用于调控表达外源基因的研究。
田学愎田玉科徐颖高峰杨辉安珂
关键词：四环素基因表达调控星形细胞
N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基基因重组腺病毒镇痛疫苗的构建被引量：1
2007年
目的构建携带N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）基因的重组腺病毒镇痛疫苗。方法以携带NR2B基因的腺病毒穿梭质粒pDC515-NR2B和腺病毒骨架质粒pBHGfrt（del）E1，3FLP共转染腺病毒包装细胞293细胞，连续观察细胞的形态学。取形成病毒空斑的293细胞，分别采用PCR、RT-PCR及Western blotting的方法从基因水平、转录水平和蛋白水平对病毒空斑筛选和鉴定，对鉴定正确的病毒空斑进行扩增和纯化。结果转染后12d可观察到细胞病变效应，15d后形成病毒空斑。NR2B基因不仅正确插入重组腺病毒载体，而且可在293细胞正确表达NR2B蛋白。鉴定正确的病毒空斑命名为NR2B基因重组腺病毒5型镇痛疫苗，滴度为5×10^11VP／ml，纯度100％。结论成功地构建了NR2B基因重组腺病毒镇痛疫苗，可用于疫苗镇痛的研究。
王公明陈建平杨少兵田学愎高峰杨辉安珂田玉科
关键词：受体腺病毒科疫苗镇痛
N-甲基-D天冬氨酸受体2B亚基重组腺病毒穿梭载体的构建及鉴定被引量：1
2006年
目的:构建携带N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)基因的腺病毒5型(Ad5)穿梭载体,为NR2B重组腺病毒镇痛疫苗的包装做准备。方法:以限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切质粒pcDNA3.1-NR2B获得目的基因NR2B;将NR2B定向克隆入腺病毒穿梭载体pDC515,并行酶切及DNA测序鉴定。在脂质体介导下将pDC515-NR2B转染293细胞,并以RT-PCR及W estern b lot分别从转录水平和翻译水平检测目的基因NR2B的表达。结果:经酶切和DNA测序证实目的基因NR2B被成功克隆入载体pDC515-NR2B中,RT-PCR及W estern b lot检测NR2B可在293细胞表达。结论:成功构建NR2B重组Ad5穿梭载体pDC515-NR2B,该载体可用于NR2B重组Ad5载体镇痛疫苗的包装。
王公明田玉科田学愎陈建平安珂杨辉
关键词：基因重组
不同剂量氯胺酮对骨癌大鼠痛行为学及腰段脊髓胶质细胞活化的影响被引量：4
2014年
目的 观察不同剂量氯胺酮对骨癌大鼠痛行为学及腰段脊髓胶质细胞活化的影响,探讨氯胺酮治疗骨癌痛的机制.方法 将雌性SD大鼠24只,随机分为4组（n=6）：A组（对照组）：左侧胫骨上段骨髓腔注入3μl Hank液;B组（模型组）：左侧胫骨上段骨髓腔注入3μl MADB-106大鼠乳腺癌细胞（4.8×10^9/L）;C组（氯胺酮10 mg/kg）;D组（氯胺酮20 mg/kg）;C、D两组造模同B组.从第14天开始,A、B组大鼠腹腔分别注射生理盐水1ml,C、D组大鼠腹腔分别注射氯胺酮10 mg/kg（1 ml）及20 mg/kg（1 ml）,1次/天,连续4d.术前及术后22 d,各组大鼠隔日观察机械痛及辐射热痛阈值变化.第22天,取大鼠脊髓L4～6节段,采用免疫组织化学法观察骨癌痛大鼠腰段脊髓中星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫反应阳性产物及OX42标记的小胶质细胞阳性产物分布及变化.结果 A组大鼠对机械、辐射热痛刺激的缩爪阈值在术后各时间点组内比较差异无统计学意义（P＞0.05）;B、C、D组大鼠对辐射热痛刺激缩爪阈值在术后的前6d与A组比较升高（P＜0.05）,术后14～ 22 d,与A组大鼠对机械痛刺激缩爪阈值和辐射热痛阈值比较,B、C组降低（P＜0.05）,而D组差异无统计学意义（P＞0.05）.大鼠腰脊髓背角Ⅰ～ⅣGFAP、OX42免疫反应吸光度值B组（57.05＆#177;2.03、72.04 ＆#177;2.25）、C组（52.02＆#177;2.08、69.32 ＆#177;2.14）比A组（30.62＆#177;1.06、42.34 ＆#177;3.16）升高（P＜0.05）,D组与A组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 骨癌痛模型大鼠患侧腰段脊髓背角星形胶质细胞和小胶质细胞均被广泛激活,20 mg/kg氯胺酮可以显著抑制其激活.
董航田玉科项红兵田学愎
关键词：氯胺酮神经胶质细胞脊髓骨癌痛
用于包装复制缺陷性腺病毒的低代次293细胞的培养被引量：2
2006年
目的:建立体外培养低代次293细胞的方法。方法:细胞复苏,将冻存的低代次293细胞于37℃水浴中快速融解,移入75cm^2细胞培养瓶中,加入10mL低代次293细胞培养基,6～8h细胞贴壁后更换培养基。细胞传代,吸出培养基,用1×柠檬酸盐细胞消化液洗2遍,留取0.5mL37℃消化5～10min,待细胞脱壁后加入3mL培养基,轻轻吹匀以1∶2比率传代培养。细胞冻存,以1×柠檬酸盐细胞消化液消化5～10min,细胞脱壁后加入5mL细胞培养基中和消化液,离心收集细胞,以1mL的细胞冻存液(90%FBS+10%DMSO)重悬、冻存。结果:细胞传代后8h细胞完全贴壁;以腺病毒感染质粒感染293细胞14d后可观察到腺病毒空斑形成。结论:该方法操作简便,对细胞损伤小且保持细胞生物学特性不变。
王公明田玉科田学愎陈建平安珂杨辉
关键词：细胞培养技术
携带NR2B抗原表位的表达载体的构建与鉴定
2006年
目的构建携带N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)2B亚基抗原表位的表达载体并进行初步鉴定。方法在获得NMDAR2B(NR2B)抗原模拟表位碱基序列TCGCATCCGCCTGTGATGCCTTGGCC-TACTTCGACT的基础上,设计两条含起始密码子、终止密码子、双酶切位点的互补引物,应用PCR技术合成该表位,与表达载体pDC515重组为pDC515/nr2b,采用限制性内切酶酶切及DNA测序进行鉴定。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实pDC515/nr2b含有NR2B抗原模拟表位片段。结论成功构建了含有NR2B模拟抗原表位的表达载体,为进一步研制NR2B抗原表位的DNA疫苗及其镇痛效应奠定了实验基础。
陈建平田玉科王公明田学愎
关键词：N-甲基天冬氨酸表位受体基因表达
pDC515-nr2B重组质粒的构建及其免疫效应被引量：1
2007年
目的构建pDC515-nr2B重组质粒,并研究其在体外表达及体内的免疫效应。方法根据本研究前期从噬菌体随机12肽库中筛选出的NR2B(N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基)表位DNA序列,合成两条部分互补的DNA单链,用PCR法合成NR2B表位DNA片段。将NR2B表位编码基因克隆入真核高效表达载体pDC515中,构建pDC515-nr2B重组质粒,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切和DNA测序鉴定其正确性。在293fectinTM介导下将pDC515-nr2B体外转染293细胞后,经RT-PCR及免疫细胞化学染色法鉴定目的基因的表达。将10只SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组用100μg的pDC515-nr2B免疫,0d及7d各肌注1次,对照组于相同时间注射相同剂量的空质粒pDC515。免疫后14d,检测大鼠血清中抗NR2B抗体的水平。结果正确构建了pDC515-nr2B重组质粒。以其转染293细胞后,在转染的293细胞中用RT-PCR可检测到NR2B的mRNA,用免疫细胞化学染色法检测其胞质染色呈阳性。实验组大鼠的血清中可检测到抗NR2B抗体。结论成功地构建pDC515-nr2B重组质粒并可诱导SD大鼠产生相应的抗体。
陈建平王公明田学愎杨辉马国平田玉科
关键词：抗体产生
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