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冬生疫霉的实时荧光PCR检测方法被引量：7: 2013年; 冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)是我国检疫性病原菌。本研究根据冬生疫霉的ITS基因序列,设计了实时荧光PCR引物PH-F和PH-R及TaqMan-MGB探针PH-Pr,建立了冬生疫霉的实时荧光PCR检测方法,可检测到冬生疫霉DNA最低浓度为50 fg/μL,而冬生疫霉的近似种、近缘种和空白对照,无荧光信号增加。因此,利用该方法可以稳定、高效的检测出冬生疫霉。; 杜洪忠吴品珊严进张秋娥; 关键词：PHYTOPHTHORA 实时荧光PCR

苹果属3种检疫性疫霉的四重PCR分子检测被引量：1: 2017年; 为建立苹果属冬生疫霉Phytophthora hibernali、丁香疫霉P.syringae和栗黑水疫霉P.cambivora 3种检疫性疫霉的同步分子检测方法,根据疫霉属18S rRNA,ITS,HSP90和Ypt1基因分别设计通用引物,冬生疫霉、丁香疫霉及栗黑水疫霉特异引物,建立了四重PCR检测方法,并进行了灵敏度和模拟带菌测试.建立了可同时检测苹果属上冬生疫霉、丁香疫霉和栗黑水疫霉的特异四重PCR检测体系:在20μL反应体系中,最佳引物浓度组合为10μmol/L的18SUF/18SUR,PHSF/PHSR,PCSF/PCSR和PSSF/PSSR分别为0.2,0.6,0.8,1.0μL;最佳退火温度和退火时间分别为63℃和20s.该体系扩增冬生疫霉出现884bp的18S rRNA条带和232bp的ITS基因特异带,丁香疫霉出现884bp的18S rRNA条带和683bp的HSP90基因特异带,扩增栗黑水疫霉出现884bp的18S rRNA条带和314bp的Ypt1基因特异带,对照菌只出现18S rRNA条带;四重PCR反应体系检测灵敏度低于单重PCR;模拟带菌试验可同时扩增出4个片段.表明该四重PCR检测方法能实现冬生疫霉、丁香疫霉和栗黑水疫霉的同步特异检测,实现苹果属类水果及种苗检疫性疫霉的快速检测.; 朱林慧廖芳曹保红李碧娟张豆豆罗加凤李关荣; 关键词：苹果属

木薯细菌性萎蔫病菌的LAMP快速检测方法被引量：8: 2015年; 建立了一种木薯细菌性萎蔫病菌的环介导恒温扩增快速检测方法,为木薯细菌性萎蔫病的快速检测提供有力的技术支持。针对木薯细菌性萎蔫病菌TAL效应器蛋白质(pthBXam)靶序列的6个位点设计4条特异性引物,并对反应温度和内引物浓度等参数进行了优化,设计的引物与试验中提供的其他黄单胞近缘种都没有扩增反应,表现了较好的特异性。LAMP方法对木薯细菌性萎蔫病菌菌株DNA的检测下限为1pg/μL,比常规PCR灵敏度高100倍。该方法采用SYBR Green I染料法对扩增产物闭管检测,裸眼观察颜色变化判断反应结果,能快速、准确地对田间样品进行检测,没有出现假阳性和假阴性。与其他检测方法相比,LAMP方法检测时间短,效率高,降低了设备投入,易于操作,适合木薯细菌性萎蔫病菌的现场检疫和大规模监测。; 封立平李洪林倪新王简纪瑛甘琴华; 关键词：环介导等温扩增

同步分子检测两种腥黑粉菌近似种Tilletia bromi和T.fusca被引量：2: 2013年; 早熟禾是优良的牧草和草坪草,近年来,从进境早熟禾上多次截获一种腥黑粉菌,但一直被鉴定为禾草腥黑粉菌Tilletia fusca。通过比较研究,作者已将该菌种名改为雀麦腥黑粉菌T.bromi。依据T.bromi和T.fusca的序列差异位点设计了6对引物,成功建立了适合菌丝检测的T.bromi和T.fusca的双重PCR方法和适合冬孢子检测的套式双重PCR方法,检测灵敏度达到10pg/μL,为早熟禾腥黑粉菌鉴定提供了快速、可靠的检测方法。; 廖芳罗加凤刘跃庭刘鹏黄国明; 关键词：早熟禾套式PCR

柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法的建立及应用被引量：3: 2015年; 以柑橘溃疡病菌特异性高的假定蛋白基因(登录号:AE008923.1)为靶标,设计并筛选4条引物来特异性识别靶标序列中的6个独立区域,建立柑橘溃疡病菌LAMP实时浊度检测方法。该方法利用实时浊度仪检测反应过程中产生的焦磷酸镁白色沉淀,实现对LAMP整个反应过程的实时监控。从镁离子浓度、甜菜碱浓度、d NTPs浓度、引物浓度和反应温度5个变量参数对LAMP检测体系进行优化,并对方法的特异性、灵敏度、稳定性及实际样品检测效果进行评价。结果显示,该体系经优化后稳定性良好,可在66℃恒温条件下,60 min内完成检测;DNA检测下限可达0.02 ng/μL,灵敏度与荧光定量PCR方法相同,比常规PCR方法高1个数量级;能快速、准确地对田间疑似样品进行检测,与荧光定量PCR方法的检出情况一致,没有漏检。结果说明柑橘溃疡病菌实时浊度LAMP检测方法操作简便、所需时间短,特异性与灵敏度高,为柑橘溃疡病菌的快速筛查提供较好的途径。; 封立平孔德英孙涛孙冬纪瑛王简; 关键词：柑橘溃疡病菌

逆转录环介导等温扩增技术检测南方菜豆花叶病毒被引量：10: 2014年; 根据南方菜豆花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了4组RT-LAMP引物,通过引物筛选试验,确定SB1组引物为最佳引物,并进行了引物特异性与灵敏度检测试验,最终建立了南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测方法。灵敏度检测试验显示,RT-LAMP方法比普通RT-PCR法灵敏度高10倍,而检测时间明显缩短,整个反应过程只需40 min。此外,体系中加入钙黄绿素,反应结束后,可裸眼观察颜色变化来判定结果。本研究所建立的SBMV RT-LAMP方法具有快速、稳定、灵敏、特异、操作简单的特点,适合于SBMV的现场快速检测。; 郭立新段维军徐亚飞徐颖张永江张吉红; 关键词：南方菜豆花叶病毒

向日葵黑茎病双重PCR检测实用化研究被引量：2: 2015年; 本研究采用从新疆田间分离经ITS序列扩增、测序鉴定了的黑茎病菌株BXC1为供试菌,对其双重PCR分子检测、灵敏度试验以及模拟带菌组织的分子检测,再将此菌株采用不同接种方式人工接种2种向日葵品种幼苗,待其出现典型症状时,对其进行双重PCR实际检测。结果表明,无论是黑茎病菌基因组DNA、还是其与向日葵基因组的混合DNA都能扩增出真菌的ITS区特异带(580 bp)和黑茎病菌Actin基因的特异带(255 bp),且混合DNA还能扩增出向日葵的ITS特异带(约740 bp),说明向日葵黑茎病菌的此种双重PCR分子检测方法具有很好的特异性;梯级稀释真菌DNA或向日葵基因组DNA或其混合DNA模板的双重PCR检测表明,在20μl PCR反应体系中,黑茎病菌DNA的检测灵敏度均为0.05 ng/μl;接种了BXC1的向日葵,其带菌组织DNA均能检测出向日葵与黑茎病的ITS序列以及黑茎病Actin基因特异条带。这些结果表明,此向日葵黑茎病菌的双重PCR检测体系特异、可靠、便捷,可对带菌向日葵组织进行直接快速分子检测。; 米瑶李培江张伟宏王香廖芳李关荣; 关键词：向日葵黑茎病

基于ITS基因、Actin基因和EF-1α基因序列的新疆向日葵黑茎病菌亲缘关系分析被引量：5: 2013年; 对不同地理来源的向日葵黑茎病菌的ITS基因、Actin基因和EF基因进行测序,结合GenBank中的同源序列,对这3种基因的序列进行比对分析和系统进化分析,探讨ITS、Actin以及EF基因用于向日葵黑茎病菌的种内鉴定以及其系统进化的可行性。结果表明:ITS序列和Actin序列比较保守,无法作为种内鉴定的依据。EF基因序列其变异几率比较高,不同地理来源的菌株在EF-1α基因序列上表现出了比较大的差异,可以用于种内亲缘关系的研究。; 刘启鹏赵思峰吴品珊杜洪忠张海燕王志霞; 关键词：向日葵黑茎病基因序列亲缘关系 ITS基因 ACTIN基因

实时荧光环介导等温扩增技术检测洋葱腐烂病菌研究: 洋葱腐烂病菌（Burkholderia gladioli pv.alliicola）寄藏在洋葱、郁金香等多种经济植物种子及鳞茎、球茎中,是我国重要检疫性有害生物,在口岸多次截获,一旦传入将对我国农业生产造成严重的经济损失...; 况卫刚郑春生罗来鑫高文娜李健强; 关键词：LAMP; 文献传递

进境日本罗汉松上可可花瘿病菌的截获鉴定被引量：10: 2014年; 可可花瘿病菌（Albonectria rigidiuscula（Berk．＆Broome）Rossman＆Samuels）属菌物界（Fungi）、子囊菌门（Ascomycota）、粪壳菌纲（Sordariomycetes）、肉座菌目（Hypocreales）、丛赤壳科（Nectriaceae）、白壳属（Albonectria）。; 段维军郭立新段丽君; 关键词：病菌截获进境子囊菌门

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国家科技支撑计划(2012BAK11B02)

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