广东省自然科学基金(015003)
- 作品数：39 被引量：135H指数：8
- 相关作者：陈政良张丽芸左大明卢晓余新沛更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CGT52TGT和GGA57GAA甘露聚糖结合凝集素突变体的构建被引量：8
- 2003年
- 目的 构建CCT52TGT和GGA57GAA 2种甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因突变体。方法 设计2对引物52F/52R和57F/57R(R中引入了点突变),以含汉族人野生型MBL cDNA的重组质粒pGEM-mbl为模板,采用TaKaRa MutanBEST突变试剂盒进行定点突变,以PCR和测序分析进行鉴定。结果 分别用52F/52R和57F/57R为引物对进行PCR,均得到1个约3800 bp的DNA片段,自身连接后获得重组质粒。以SP6/T7P为引物对进行PCR,获得约900 bp的扩增产物。序列分析表明,2种克隆分别除其第52、57位密码变为TGT、GAA外,其余与野生型MBL cDNA完全相同。结论 构建成功CGT52TGT和GGA57GAA MBL基因突变体,为深入探索MBL基因突变引起调理吞噬缺损的机理和MBL分子的结构-功能关系提供了分子模型。
- 张丽芸陈政良王宏伟
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素定点突变
- 广东地区汉族人MBL基因启动子区SNP的研究被引量：8
- 2003年
- 目的研究广东汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL) 基因启动子单核苷酸多态性(SNP) 。方法抽提人外周血白细胞基因组DNA,建立SSP-PCR及分子灯塔实时荧光PCR技术,检测MBL基因启动子区SNP位点-550(G/C,称H/L等位基因) 、-220(G/C,X/Y等位基因) 和+4(C/T,P/Q等位基因),分析其单倍型及基因型频率。结果从167人中检出等位基因型LYP/LYP 10例(5.9%)、HYP/LYQ 7例(4.2%)、LYP/LYQ 94例(56.3%)、LXP/LXP 6例(3.6%)、LYQ/LYQ 4例(2.4%)、LXP/LYQ 29例(17.4%)、HYP/LYP 3例(1.8%)、HYP/LXP 2例(1.2%)、HYP/HYP 12例(7.2%)。结论广东地区汉族人群MBL基因启动子区SNP等位基因型以LYP/LYQ和LXP/LYQ为主。
- 吕成伟陈政良刁志宏王方勇
- 关键词：汉族MBL基因启动子区SNP甘露聚糖结合凝集素
- 人MASP1 N端片段原核表达载体的构建及其表达被引量：5
- 2008年
- 目的:在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)N端片段。方法:采用PCR技术从含人MASP1cDNA的质粒pGEM-MASP1中扩增MASP1-N端基因片段,将其插入原核表达载体pGEX4T-1,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP1-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与重组MBL-CLR、重组MBL的结合活性。结果:从pGEM-MASP1中扩增得到约860bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900bp和860bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR、重组人MBL蛋白结合。结论:获得了表达人MASP1N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP1N端片段/GST融合蛋白,为MASP1分子的进一步研究提供了条件。
- 蔡学敏赵娜左大明张丽芸陈政良
- 关键词：N端片段原核表达
- 模式抗原破伤风毒素C蛋白的克隆、表达条件优化及免疫原性初步分析被引量：2
- 2008年
- 目的获得高纯度、高免疫原性的破伤风毒素C片段(TTC)蛋白。方法以PCR从破伤风杆菌质粒DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pET43.1a(+)并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白,经凝血酶酶切,再用Ni2+-NTA琼脂糖柱分离目的蛋白。SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,动物免疫实验鉴定其免疫原性。结果获得1373bp的TTC基因片段,构建成重组表达载体pET43.1a(+)-TTC并在大肠杆菌中表达。TTC-Nus融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的22%,酶切后TTC蛋白可与载体蛋白有效分离,获得纯度为95.5%的TTC蛋白,该蛋白可被破伤风抗毒素识别;将TTC蛋白免疫小鼠后,免疫血清可与破伤风毒素特异性结合,三次免疫后其抗体效价可达1∶25600。结论所获TTC蛋白纯度高,免疫原性好,为研究体内外抗原提呈、免疫应答提供了良好的模式抗原。
- 王明永张雅妮雷鸣左大明张丽芸陈政良
- 关键词：基因克隆免疫原性
- 人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达被引量：6
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性。结果从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合。结论获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。
- 蔡学敏左大明赵娜张丽芸陈政良
- 关键词：N端片段原核表达
- Balb/C小鼠甘露聚糖结合凝集素-A糖识别域的原核表达被引量：1
- 2009年
- 目的获取具有生物学活性的Balb/C小鼠血清型甘露聚糖结合凝集素(MBL-A)糖识别域(CRD)蛋白。方法应用PCR从含Balb/C小鼠MBL-A基因的质粒pmMBL-A中扩增目的基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白。表达产物(包涵体)经洗涤和复性处理后,利用GST柱纯化,以SDS-PAGE、Westernblotting和ELISA进行分析鉴定。结果从pmMBL-A中扩增到约450bp的DNA片段,构建重组载体pET41a-mMBL-A-CRD,经酶切和测序鉴定后,将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约47000。包涵体经洗涤及复性处理,GST柱纯化后,融合蛋白的纯度达90%以上。Westernblotting显示重组融合蛋白与抗GST抗体特异性反应,糖结合试验表明表达产物具有生物学活性。结论成功获得了具有生物学活性的Balb/C小鼠MBL-ACRD蛋白,为MBL-A分子的研究奠定了一定基础。
- 左大明张丽芸卢晓陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素原核表达天然免疫
- 小鼠MBL-A基因的克隆和序列分析被引量：3
- 2003年
- 目的 克隆小鼠甘露聚糖结合凝集素 A(MBL A)基因的全长编码区cDNA。方法 利用RT PCR方法 ,从Balb c小鼠的肝细胞中 ,分离出MBL A基因cDNA片段 ,克隆入pUC T载体 ,测序并进行分析。结果 扩增得到的小鼠MBL A基因cDNA全长 72 0bp ,编码 2 4 0个氨基酸残基 ,包含了完整的富含半胱氨酸区、胶原区、颈区和糖识别域。分析表明 ,与Genbank中发表的序列具有 99.9%的同源性。结论 获得小鼠MBL A基因的克隆 ,为进一步研究MBL
- 王宏伟陈政良左大明张丽芸
- 关键词：小鼠克隆RT-PCR氨基酸
- 中国维吾尔族人群MBL基因CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变基因频率的研究被引量：6
- 2006年
- 目的了解我国维吾尔族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1第52、54和57位密码点突变(CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA)的情况。方法收集新疆维吾尔自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以PCR扩增目的基因片段并应用荧光探针杂交可视技术检测点突变。结果95例维吾尔族样本中,检出54位密码点突变纯合子2例和杂合子28例,未发现CGT52TGT和GGA57GAA点突变。结论维吾尔族人群MBL结构基因CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变的频率分别为0、0.168和0。
- 钟成全余新沛王方勇库热西江.托呼提陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素点突变分子杂交
- 中国佤族人群MBL基因SNP及其单倍型与基因型的研究被引量：4
- 2005年
- 余新沛吕成伟葛争鸣李江川马丽陈政良
- 关键词：MBL基因基因型单倍型甘露聚糖结合凝集素佤族
- 白细胞介素12研究新进展被引量：13
- 2005年
- 陈月陈政良
- 关键词：白细胞介素12天然免疫获得性免疫
