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急性期Guillain—Barre综合征患者人类肿瘤坏死因子样分子1A表达与T细胞分泌γ-干扰素水平的关系被引量：1: 2009年; 目的探讨人类肿瘤坏死因子样分子1A（hTL1A）在急性期Guillain—Barre综合征（GBS）中表达及其与T细胞分泌γ-干扰素（IFN-γ）水平的关系。方法①重组人可溶性hTL1A（rhsTL1A）免疫6周龄雌性Balb／c小鼠，用人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）以免疫荧光染色法鉴定rbsTL1A抗血清。②鉴定rhsTL1A的生物学活性：健康捐赠者外周血单个核细胞（PBMCs）接种于96孔板，设2μg/ml植物血凝素（PHA）、2μg/ml PHA＋25ng／ml rhsTL1A、2μg/ml PHA＋100ng／ml rhsTL1A、2μg／ml PHA＋400ng／ml rhsTL1A组，^3H—TdR掺入法检测T细胞增殖。③酶联免疫吸附（ELISA）法检测急性期GBS患儿血清中IFN-γ水平。④流式细胞术检测急性期GBS患儿外周血中CD3＋hTL1A^＋T／CO3^＋T细胞的百分比。⑤分离急性期GBS患儿PBMCs，给予2μg/mlPHA和400ng／ml rhsTL1A，培养72h后ELISA法检测IFN-γ水平。结果①rhsTL1A抗血清能够识别真核细胞HUVECs表达hTL1A。②T细胞增殖实验结果显示各组刺激指数（SI）均较对照组升高，400ng/ml rhsTL1A组的SI最大（2．65）。③急性期GBS患儿血清IFN-γ水平[（102．25±22．17）pg／ml]较对照组[（28．75±1.31）pg／ml]显著升高（t=3．309，P〈0．05）。④急性期GBS患儿外周血中CD；TL1A^＋T／CD3^＋T细胞比例（18．22％±1．83％）较健康对照组（5．17％±0．48％）显著增高（t=6．884，P〈0．01）。⑤健康对照组和急性期GBS组PBMCs经2μg／mlPHA和400ng／ml rhsTL1A孵育后，IFN-γ分泌量[（43．56±4．41）pg／ml、（180．64±38．39）pg／ml]均显著增高（t=4．523、2．600，P〈0．01、0．05），并且急性期GBS组的IFN-γ水平显著高于健康对照组（t=3．545，P〈0．05）。结论①400ng/ml rhsTL1A能有效促进2μg/ml PHA活化的T细胞增殖，抽sTL1A具有生物学活性。②急性期GBS患儿外周血中活化T细胞表达hTL1A增加，可通过与其受体DR3相互结合，促进IFN-γ的分泌。; 杨立彬李树蕾谭岩许淑芬段秀梅方艳秋刘立华车媛媛刘磊周立威; 关键词：格林巴利综合征

rhTL1A基因原核表达载体的构建、表达与纯化被引量：1: 2008年; 目的:构建人肿瘤坏死因子样分子1A(TL1A)原核表达质粒并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白。方法:人HUVECs总RNA经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增TL1A基因,克隆到pTA2载体,酶切和测序鉴定正确后构建重组原核表达质粒pQE-TL1A,并转化大肠杆菌M15[pREP4]。IPTG诱导目的蛋白表达并进行Western blotting鉴定;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白。结果:目的基因经酶切其结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GenBank登录的序列(登录号AF520785)完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达相对分子质量约22 000的目的蛋白;Western blotting鉴定结果显示,重组蛋白能够与抗His单克隆抗体特异性结合。结论:成功地构建了重组原核表达质粒pQE-Tl1A,并纯化获得高纯度重组TL1A蛋白。; 杨立彬李树蕾谭岩许淑芬汪军; 关键词：克隆分子原核表达蛋白质纯化

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吉林省卫生厅重点实验室科研课题(2006079)

文献类型

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机构

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