湖南省自然科学基金(11JJ6020)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 戊型肝炎病毒IV型衣壳蛋白缺失突变体原核表达与性质
- 2014年
- 采用PCR技术扩增基因IV型HEV(Hepatitis E Virus,HEV)开放阅读框2(Open Reading Frame 2,ORF2)的缺失突变体(aa384-606),亚克隆到表达载体后,转化到大肠杆菌中进行诱导表达,表达蛋白命名为rP24。SDS-PAGE和免疫印迹实验表明,rP24获得了高效表达,且和单克隆抗体15B2具有强的反应活性。rP24经过包涵体洗涤、溶解复性、离子交换层析和分子筛层析纯化后,免疫印迹实验表明,纯化rP24能与抗HEV ORF2中和单克隆抗体8C11以及HE(Hepatitis E,HE)阳性血清发生很强的免疫反应性,说明rP24上具有构象型中和表位,模拟了HEV衣壳蛋白的空间结构。动态光散色测量结果表明,rP24的平均水化半径为7.48 nm;纯化rP24免疫动物实验表明,rP24具有强的抗原性,小鼠阳转周期短,抗体持续时间长;纯化rP24作为包被抗原检测HE阳性血清和阴性血清,结果显示rP24对HE阳性血清和阴性血清检出率与北京万泰公司的抗HEV-IgG检测试剂盒的检出率一致。这些实验结果说明,具有较好免疫反应性和免疫原性的rP24获得了高效表达,该蛋白模拟了天然病毒衣壳蛋白的中和表位,为进一步研究基因I型和基因IV型HEV感染不同宿主细胞差异的分子机制奠定了基础。
- 邱义兰吴俊文邱果李桑李烨刘胜姿刘如石
- 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白原核表达免疫反应性免疫原性
- 高住低练对大鼠不同类型肌纤维HSP70和VEGF表达的影响
- 2014年
- 目的:研究模拟不同海拔高度高住低练对大鼠Ⅰ型肌纤维(比目鱼肌)和Ⅱ型肌纤维(腓肠肌)热休克蛋白70(HSP70)和血管生长因子(VEGF)表达的影响。方法:适应性喂养1周后,将48只SD大鼠按体重随机分为6组:常氧对照组(C组)、14.5%O2低氧暴露组(14.5%O2LH组)、12.7%O2低氧暴露组(12.7%O2LH组)、常氧训练组(TL组)、14.5%O2高住低练组(14.5%O2HiLo组)、12.7%O2高住低练组(12.7%O2HiLo组),每组8只。分别采用20.9%、14.5%和12.7%氧浓度的模拟高住低练模型,运动强度逐渐递增,实验共4周。采用免疫组织化学技术检测大鼠腓肠肌和比目鱼肌HSP70和VEGF的定位和半定量表达。结果:(1)与14.5%O2LH组相比,12.7%O2LH组腓肠肌和比目鱼肌HSP70阳性物质表达显著下降(Ρ<0.05,Ρ<0.01),而14.5%O2HiLo组和12.7%O2HiLo两组腓肠肌和比目鱼肌HSP70阳性物质表达与相应的两LH组变化相反;14.5%O2HiLo组腓肠肌HSP70表达显著低于14.5%O2LH组(Ρ<0.05),12.7%O2HiLo组却高于12.7%O2LH组(Ρ<0.05),两个LH组比目鱼肌HSP70表达分别显著高于两个HiLo组(Ρ<0.01)。(2)12.7%O2LH组腓肠肌VEGF阳性物质表达高于14.5%O2LH组(Ρ<0.05),14.5%O2HiLo组和12.7%O2HiLo组两组变化相似,但两HiLo组腓肠肌VEGF表达高于两LH组,氧浓度降低则VEGF表达增加更显著(Ρ<0.01);与C组相比,12.7%O2LH组、TL组和两HiLo组比目鱼肌VEGF阳性物质表达显著增加(Ρ<0.05),比目鱼肌VEGF表达整体趋势类似于腓肠肌。结论:单纯低氧暴露、运动或低氧运动应激/刺激原诱导HSP70和VEGF的表达具有肌纤维类型特异性,单纯低氧暴露比高住低练对HSP70表达的影响明显,而高住低练比单纯低氧暴露、运动对VEGF表达的影响大,Ⅰ型肌纤维(比目鱼肌)中HSP70和VEGF的表达显著高于Ⅱ型肌纤维(白腓肠肌);在Ⅱ型肌纤维中HSP70和VEGF之间存在协同效应,而在Ⅰ型肌纤维中未见。
- 刘文锋李烨瞿树林印大中汤长发王芝琴龚晓明
- 关键词：高住低练热休克蛋白70血管生长因子
