公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

以gfp为报告基因的肺炎链球菌启动子诱捕文库的构建与分析被引量：2: 2008年; 首先构建一个以gfp(green fluorescence protein)为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP,将肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段(200bp^800bp)克隆到该质粒gfp基因上游的多克隆位点,得到约58000个含有肺炎链球菌基因组DNA随机酶切片段的重组子,提取质粒即为质粒库,该库大约覆盖肺炎链球菌基因组全长的5倍,插入率达到90%以上,且有较强的随机性,质量较高。将该质粒库转化入肺炎链球菌TIGR4菌株,带有随机片段的报告质粒通过同源重组的方式将gfp基因融合于细菌染色体上该随机片段之后,利用质粒的抗生素抗性基因筛选出重组菌株,从而构建出相应的菌株库,共获得包含约500000个肺炎链球菌转化子的菌株库,经体内、外实验表明,其包含插入了S.pn体内、外表达基因片段的细菌,可以报告特定条件下的基因表达,并可通过流式细胞仪识别、分选。该文库的构建为进一步利用差异荧光诱导技术筛选肺炎链球菌体内诱导基因奠定了基础。; 胥文春赵清孟江萍单幼兰李南舒朝忠朱新华尹一兵; 关键词：肺炎链球菌绿色荧光蛋白

生物源性基因疫苗的运送系统被引量：2: 2006年; 基因疫苗具有很多独特的优点,已经成为疫苗研究领域的热点。但由于其免疫原性相对较弱,限制了基因疫苗的广泛应用。人们一直在寻求一种理想的基因疫苗运送系统,它不仅能将基因疫苗导入体内,还能提高基因疫苗的免疫原性,诱导机体产生持续高水平的免疫应答反应。; 陈大鹏尹一兵; 关键词：基因疫苗

肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒的构建及评价: 2008年; 目的:构建一个可高效报告基因表达的绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)报告质粒,为采用差异荧光诱导(Differential fluorescence induction,DFI)技术筛选肺炎链球菌(Streptoccus pneumoniae,S.pn)体内诱导的毒力基因奠定基础。方法:酶切质粒pGreenTIR的SD-ENH-GFP片段,将其插入含氯霉素抗性基因的自杀质粒pEVP3中,构建以绿色荧光蛋白为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP。再将肺炎链球菌的溶血素基因(Pneumolysin,ply)上游约500bp片段插入到该质粒报告基因上游的多克隆位点中,得到质粒pEVP3-SDGFP-Ply,将其转化入肺炎链球菌TIGR4中,比较新建质粒pEVP3-SDGFP与同样处理质粒pEGFP-1(报告基因gfp前无SD及ENH序列)报告上游基因表达的情况。结果:通过体内、外实验证实新建质粒pEVP3-SDGFP不但可以报告肺炎链球菌溶血素基因的表达,并且其报告上游基因表达的能力明显强于质粒pEGFP-1。结论:所构建的质粒pEVP3-SDGFP可用于DFI筛选肺炎链球菌体内诱导基因所需启动子诱捕文库的构建。; 胥文春单幼兰许颂宵王虹陈淑惠尹一兵; 关键词：肺炎链球菌绿色荧光蛋白报告质粒

肺炎链球菌毒力因子ClpP蛋白酶的体外表达及纯化被引量：5: 2008年; 目的构建ClpP原核表达载体,获取原核表达的ClpP蛋白分子。方法分离培养TIGR4型肺炎链球菌,获取其染色体DNA,采用基因体外重组的方法将完整的ClpP读码框克隆到pET-32a原核表达载体,并经测序鉴定,所表达的抗原蛋白用Western blot鉴定,镍柱纯化并透析复性,真空冷冻干燥保存。结果测序结果证实克隆的基因与GenBank中的序列相符,Western blot证实获得了ClpP融合蛋白。结论获得了高表达的重组抗原蛋白,经镍柱纯化后纯度可达90%以上。; 袁军陈曜曹炬尹一兵; 关键词：毒力因子肺炎链球菌

鼻腔滴注法建立小鼠肺炎链球菌性脑膜炎模型被引量：2: 2008年; 目的鼻腔滴注法建立小鼠肺炎链球菌性脑膜炎模型，为研究肺炎链球菌致脑膜炎的分子机制奠定基础。方法将冻存的TIGR4在新鲜TSA血平板上培养16h～18h后，刮取细菌并稀释成3种不同密度的菌液，每种密度分成2份，其中1份加入一定量的透明质酸酶，另1份不加。对小鼠行浅麻醉，用卡介苗注射器将上述菌悬液缓缓滴入小鼠鼻腔，待其自动吸入，每只小鼠50μl。每天观察小鼠情况，分别于感染后24、48和72h处死小鼠，取心脏血和一半脑组织匀浆，做细菌计数，另一半脑组织用于组织病理学检查。结果加透明质酸酶的TIGR4 3个剂量组小鼠脑膜炎发生率分别为20．00％、65．00％和46．67％，对照组分别为13．33％、53．33％和66．67％，差异无统计学意义（P=1．0000）；其中3×10^7 CFU组和3×10^4 CFU组差异无统计学意义（P=0．4621），两组合并后与3×10^6 CFU组差异有统计学意义（P=0．0196）。结论1）透明质酸酶不能促进鼻腔滴注TIGR4致小鼠脑膜炎的发生；2）小鼠脑膜炎的发生率与鼻腔感染TIGR4剂量有关，适宜剂量为3×10^7 CFU，低于该剂量脑膜炎的发生率显著降低。; 胥文春单幼兰李南赵清张雪梅刘明芳尹一兵; 关键词：肺炎链球菌脑膜炎

一种快速检测HBV基因的荧光定量PCR法的建立被引量：5: 2007年; 目的利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种能用于临床的快捷、敏感、特异、价格低廉的HBV实时荧光定量PCR检测方法。方法根据HBV基因组保守区域precore/core设计二聚体蝎型荧光探针和引物,构建质粒标准品,优化荧光定量PCR条件,并进行方法学评价。结果所建方法的检测范围为101～108copies/μl,灵敏度达到10copies/μl,低拷贝样品的批内和日间重复性(CV)分别为1.71%和2.57%,高拷贝样品的批内和日间CV分别为3.00%和3.86%。与商品化TaqMan试剂盒相比,本法阳性检出率较高,且检测时间缩短了45min(约减少1/3),成本降低50%。结论成功建立了快速检测HBVDNA的二聚体蝎型荧光定量PCR方法,为研发适合临床应用的HBV基因定量检测试剂盒奠定了基础。; 赵清许颂霄袁军罗进勇单幼兰尹一兵; 关键词：乙型肝炎病毒荧光定量PCR

全选清除导出

共1页<1>

国家自然科学基金(30471838)