湖北省自然科学基金(2007ARA316)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：华中农业大学武汉工程大学更多>>
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- 华癸中生根瘤菌共生质粒的定向标记、消除与结瘤功能的鉴定被引量：2
- 2008年
- 采用Tn5-mob-sacB转座子对华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)菌株7653R的共生质粒进行定向标记,获得该质粒标记菌株7653RT14。利用sacB基因对蔗糖的敏感性,对标记质粒进行消除实验,获得7653R的共生质粒消除突变株7653R-1。测得Tn5-mob-sacB转座频率高于10?5。突变株的培养特征与出发菌株基本一致。采用琼脂管法对7653RT14和7653R-1进行回接实验,结果显示7653RT14能正常结瘤固氮,表明Tn5的插入并未影响其共生能力,但失去共生质粒的7653R-1则为不结瘤或只结个别小瘤。稳定性实验结果表明供试菌株的标记质粒在本实验条件下是稳定的,可以作为共生质粒转移的供体菌。
- 胡国元李伟伟周俊初
- 关键词：华癸中生根瘤菌结瘤
- 华癸中生根瘤菌7653R共生质粒pMH7653Rb的不相容性行为被引量：1
- 2009年
- 华癸中生根瘤菌菌株7653R含有2个内源质粒(pMH7653Ra,pMH7653Rb).用三亲本杂交法将7653R的共生质粒pMH7653Rb分别导入HN308SR(Smr,Rifr;含pMHHN308a,pMHHN308b和pMHHN308c)和HN3015SR(Smr,Rifr;含pMHHN3015a,pMHHN3015b和pMHHN3015c).发现受体菌HN308SR的两个稳定内源质粒pMHHN308b和pMHHN308c随着pMH7653Rb的导入而同时被消除.该接合子命名为HN308SRN14.这一结果表明pMH7653Rb与pMHHN308b和pMHHN308c不相容,可以归于同一不相容群.另一转移接合子HN3015SRN14的质粒图谱显示其第二大质粒pMHHN3015b由于pMH7653Rb的导入而被消除.该结果表明,pMH7653Rb与pMHHN3015b不相容.植物结瘤实验结果表明,pMH7653Rb的导入能恢复HN308SRN14的结瘤能力,其结瘤数目超过HN308SR,但不能替代pMHHN308b和pMHHN308c的固氮作用,HN308SRN14失去了固氮能力.质粒消除突变株HN308SRN14D只含有pMHHN308a,能形成少量无效根瘤,确认pMHHN308a与HN308的结瘤能力有关.HN3015SRN14(含pMH7653Rb,pMHHN3015a和pMHHN3015c)只能形成无效根瘤,而质粒消除突变株HN3015SRN14D(仅含pMHHN3015a和pMHHN3015c)则完全失去结瘤能力.通过PCR反应从7653R,HN308,HN3015,HN308SRN14,HN3015SRN14中均检测到质粒复制基因repC.供试菌株的repC基因序列相似性达到99%.
- 胡国元李伟伟周俊初
- 关键词：紫云英华癸中生根瘤菌质粒消除
