山西省自然科学基金(2010021035-2)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白的纯化及其活性被引量：3
- 2013年
- 目的纯化赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并鉴定其活性。方法将制备的赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白粗提液透析后,经Bio-CAD CM柱层析系统非连续梯度洗脱,收集洗脱峰,对有活性的梯度洗脱峰样品进行单向聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D-PAGE)及切胶纯化,将切胶回收纯化的蛋白样品进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE),回收蛋白,进行活性和浓度检测。结果透析后的蛋白粗提液经Bio-CAD CM柱层析分离,得到3个不同洗脱梯度的可降解DNA的活性峰,3个梯度蛋白的PAGE带型基本一致,经PAGE分离获得3个核酸酶样蛋白纯品EWD1、EWD2和EWD3,得率和纯化倍数分别为:27.9%,11.6;16.7%,11.2;16.7%,18.6。结论成功纯化了赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并保持了其良好的生物活性。该纯化方法简单、快速、经济、实用,为该蛋白结构及功能的进一步研究奠定了基础。
- 于保锋刘志贞张悦红解军程牛亮王建华牛勃
- 关键词：赤子爱胜蚓纯化
- 赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白的一级结构特征被引量：2
- 2014年
- 背景:前期研究从赤子爱胜蚓组织中获得一组核酸酶样蛋白,对该组核酸酶样蛋白的一级结构进行研究,有利于揭示其结构的基本性质,为进一步结构与功能的研究奠定基础。目的:对核酸酶样蛋白EWD1和EWD2进行一级结构的测定。方法:采用Edman降解法测定EWD1和EWD2的N末端氨基酸序列,采用酸水解法测定其氨基酸组成,LC-MS/MS测定蛋白质内部分氨基酸的序列,MALDI-TOF-MS测定蛋白的含糖量和二硫键数目。结果与结论:核酸酶样蛋白EWD1和EWD2的氨基酸组成中,天冬氨酸和天冬酰胺之和的含量最高,都达到近10%,疏水氨基酸亮氨酸的含量也较高,半胱氨酸含量较少,氨基酸组成比较显示,该2种酶与其它核酸酶较相似。Edman降解法测定,EWD1蛋白大亚基的N末端6个氨基酸序列为:D、E、W、V、Y、P,EWD2蛋白的N末端9个氨基酸序列为:L、L、G、P、Y、K、P、K、C;串,联质谱的结果提示2种核酸酶为新蛋白;MALDI-TOF-MS法显示1号核酸酶中含有8个半胱氨酸,形成4对二硫键,2号核酸酶中有6个半胱氨酸,形成3对二硫键。EWD1,2均为糖蛋白,EWD1中的含糖量为17.3%,EWD2蛋白中的含糖量为15.6%。
- 于保锋刘志贞张悦红解军程牛亮王建华牛勃
- 关键词：赤子爱胜蚓质谱二硫键国家自然科学基金
- 赤子爱胜蚓Eisenstasin样蛋白cDNA和氨基酸序列分析被引量：2
- 2014年
- 目的对赤子爱胜蚓Eisenstasin样蛋白cDNA序列和氨基酸序列进行综合分析,为其结构和功能的研究奠定理论基础。方法从赤子爱胜蚓cDNA文库中随机测序获得目标cDNA序列,利用基因和蛋白质分析处理软件DNAMAN、NCBI ORF finder、BLAST、Conserved Domains、GOR、SWISS-MODEL等软件对该目标的基因序列和氨基酸序列进行综合分析。结果测序获得的赤子爱胜蚓Eisenstasin样蛋白cDNA序列长为565 bp,编码148个氨基酸残基,基因序列比对显示该蛋白与EisenstasinⅠmRNA的编码序列同源度最高,两者核苷酸的相似度为78%(148/190),氨基酸序列比对显示该蛋白与EisenstasinⅡ的氨基酸序列同源度最高,两者氨基酸的相似度为37%(61/166),目标序列中存在3段Antistasin家族保守结构域,二级结构和三级结构预测显示目标蛋白中主要存在β折叠和无规卷曲的结构,与Antistasin的预测结果高度相似。结论经多种生物软件分析,可以认为本次发现的Eisenstasin样蛋白与安德爱胜蚓组织中发现的Eisenstasin和水蛭中发现的Antistasin同源度高,可能具有抗凝功能。
- 于保锋刘志贞张悦红解军程牛亮王建华牛勃
- 关键词：赤子爱胜蚓CDNA
