辽宁省博士科研启动基金(20051068)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 相关作者：雷阳李胜齐中华高颖王莹更多>>
- 相关机构：大连医科大学附属第一医院大连医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肌球蛋白轻链激酶和Rho激酶在兔脑血管平滑肌细胞迁移中的作用被引量：7
- 2008年
- 目的探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和Rho激酶在颅内血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用。方法体外培养兔大脑中动脉VSMC。构建携带反义MLCK cDNA的腺病毒载体并转染VSMC以降低MLCK表达。应用Rho激酶特异性抑制剂Y-27632来抑制Rho激酶的活性。免疫印迹法测定细胞内MLCK和Rho激酶的表达水平;改良Boyden小室法检测血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)诱导的VSMC迁移;甘油凝胶电泳和免疫印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化水平。结果反义MLCK cDNA转染后,MLCK表达量较LacZ基因转染组下降(84.6±5.8)%(P<0.01),但ATⅡ刺激引起的MLC磷酸化和VSMC迁移未受明显影响(P均>0.05)。Y-27632预处理反义MLCK cDNA转染后的VSMC可明显降低基础水平以及ATⅡ刺激引起的MLC磷酸化,并部分阻断VSMC迁移(P均<0.05)。结论颅内、外动脉VSMC迁移的分子机制不同,在ATⅡ诱导的颅内VSMC迁移中MLCK作用有限,而Rho激酶可能通过非钙依赖型MLC磷酸化途径发挥重要作用。
- 李胜高颖雷阳齐中华王莹崔颖
- 关键词：颅内动脉硬化肌球蛋白轻链激酶RHO激酶迁移
- 大鼠脑动脉平滑肌细胞的体外培养与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的建立大鼠颅内脑动脉平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)的体外培养方法。方法无菌条件下分离大鼠脑基底动脉,去除血管外膜后剪成约0.2mm的小段,分别用0.1% Ⅰ型胶原酶、0.125%胰蛋白酶消化,细胞用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养。采用人工刮除法及差速贴壁法纯化细胞。SMCs通过形态学观察及α-平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学方法鉴定。结果原代培养3d后细胞开始贴壁,2w后细胞呈梭形,汇合后具有典型的"峰-谷"生长特点。传代培养的细胞保持上述特征,第5代细胞经α-平滑肌肌动蛋白表达鉴定,纯度达97%以上。台盼蓝排斥实验检测细胞存活率>95%。结论这种方法操作简单、结果可靠、成本低廉,可为颅内动脉粥样硬化等脑血管病机制和治疗的研究提供适宜的体外培养细胞模型。
- 郭悦劼蔡正旭雷阳孙大勇齐中华李胜
- 关键词：平滑肌细胞颅内动脉细胞培养
