国家重点基础研究发展计划(2012CB518801)
- 作品数：11 被引量：24H指数：3
- 相关作者：刘思国于申业田秋丰衣菲周薇更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江八一农垦大学吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化
- 肠炎沙门菌(Salmonella enterica)是一种无宿主特异性的病原菌,不但引起畜禽疾病,而且是一种重要的人类食源性致病菌,具有重要的公共卫生意义。肠炎沙门菌的热不稳定延伸因子EF-Tu(Elongation f...
- 曹俊刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业
- 结核分枝杆菌酯酶Rv1400c原核表达及表达产物的酶活性分析被引量：2
- 2014年
- 为探究结核分枝杆菌酯酶Rv1400c活性，以进一步研究Rv1400c的结构和功能。以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，对 Rv1400c 基因进行扩增，并将其克隆到 pET28b （＋）原核表达载体上，构建pET28b－Rv1400c重组质粒，然后将构建的重组质粒转化到BL21（ DE3）表达菌株中，增菌后用IPTG进行诱导表达再用亲和层吸树脂法进行纯化，利用不同底物、不同pH、不同温度对纯化后的Rv1400c酯酶进行活性分析。结果表明：成功构建出pET28b－Rv1400c重组质粒；SDS－PAGE和Western blot显示，Rv1400c以包涵体形式表达，蛋白分子质量为39 ku；在对8种底物的筛选中发现Rv1400c在C2～C14中具有活性，其中以在C2中活性最好；在以C12为底物、pH 8？0、37℃条件下酯酶活性最高。
- 陶荣珊李金伟刘思国王全凯
- 关键词：包涵体酯酶活性
- 结核分枝杆菌Rv1400c多抗制备及反应原性分析被引量：1
- 2015年
- 将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;Western-blot分析鹿结核阳性血清的反应情况。SDS-PAGE和Western-blot结果显示:Rv1400c以包涵体形式表达,蛋白分子质量为39 ku;目的蛋白免疫新西兰兔后,ELISA检测血清效价达到1∶51 200。纯化的Rv1400c重组抗原蛋白能与鹿的阳性血清发生体外结合反应。
- 陶荣珊胡太超李金伟刘思国王全凯
- 关键词：结核分枝杆菌包涵体复性反应原性
- 大肠杆菌肽聚糖合成酶MraY在杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2013年
- 磷酸-N-乙酰胞壁酸酯-胸腺喷丁转位酶(MraY)是参与大肠杆菌细胞壁合成的一种膜蛋白。由于该蛋白不能通过大肠杆菌表达系统进行过表达制备重组蛋白,本研究采用杆状病毒表达系统,通过PCR从大肠杆菌基因组中扩增出目的基因MraY,纯化后克隆于pFastBac 1质粒中构建重组转移质粒pFastBac-MraY。将其转化DH10感受态,构建重组杆粒Bacmid-MraY,并转染于Sf9昆虫细胞中进行重组杆状病毒制备和目的蛋白表达,采用western blot和间接免疫荧光鉴定结果表明,目的蛋白在昆中细胞Sf9中获得表达,分子量为41 ku并以可溶性形式表达。该蛋白的表达为MraY的高级结构的解析以及噬菌体溶菌机制的研究奠定了基础。
- 许莉莉于申业田秋丰衣菲刘思国
- 关键词：杆状病毒表达系统间接免疫荧光
- 大肠杆菌肽基脯氨酰顺反异构酶slyD基因缺失株的构建及生物学特性研究被引量：2
- 2016年
- 肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D缺失株,命名为BL21Δsly D;并通过突变株的形态学变化、生长特性、生化代谢特性、耐酸性、耐渗透压能力、耐温度缺氧能力对其进行鉴定。结果表明,缺失株生长速率、耐高温缺氧能力与亲本株相比差异不显著,然而突变株的耐酸性与耐渗透压能力则显著低于亲本株(p<0.01),表明大肠杆菌PPIases sly D基因可能影响双组份调控系统的调节作用。本研究构建的大肠杆菌sly D基因缺失株BL21Δsly D为进一步研究大肠杆菌sly D基因的功能奠定了基础。
- 周薇刘松艳王曼宇衣菲田秋丰陈志宝刘思国于申业
- 关键词：大肠杆菌生物学特性环境压力
- 结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 为制备结核分枝杆菌(Mtb)rv3036c基因的多克隆抗体,本研究以Mtb强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3036c基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-rv3036c,并转化大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白Rv3036c,采用Ni-NTA His-Bind Resin纯化目的蛋白,经western blot验证纯化蛋白。将Rv3036c蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE和westernblot分析结果表明,Rv3036c以可溶形式表达,蛋白分子量大小为28 ku,并且具有良好的免疫原性。以上结果为进一步研究rv3036c基因在Mtb的致病性作用奠定了基础。
- 曹俊陈利苹刘银冰鄢秋龙刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达多克隆抗体
- 一株溶原性鸡大肠杆菌的分子特征鉴定被引量：3
- 2016年
- 为了鉴定和了解实验室保存的1株溶原性鸡大肠杆菌的病原学特性,试验对其遗传进化和基因型等进行了分子特征鉴定。结果表明:鸡大肠杆菌Leco13的16S rRNA与大肠杆菌K12标准株16S rRNA部分序列的同源性达到了99%;用MLST分型特异引物对菌株的基因型进行鉴定,发现该菌株属于ST10型。同时参考其他文献中的噬菌体提取方法,对分离株进行了噬菌体的提取,成功提取噬菌体DNA后,用EcoRⅠ和HindⅢ进行酶切鉴定并获得了较为清晰的酶切图谱。
- 李鹤李兆利刘思国倪宏波
- 关键词：禽病原性大肠杆菌RRNA酶切鉴定
- 肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化被引量：5
- 2016年
- 延伸热不稳定因子(EF-Tu)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是在蛋白质合成过程中负责肽链的延伸。为研究肠炎沙门菌EF-Tu的tuf A基因缺失对环境压力的应答变化,本研究利用改进的Red同源重组方法构建肠炎沙门氏菌SM6株的tuf A缺失株,命名为SM6Δtuf A,并鉴定缺失株的形态学变化,分析耐酸性、渗透应力、温度缺氧应力、氧化应力的改变。结果表明缺失株对酸性条件及升温缺氧的耐受与亲本株相似;对渗透压的耐受稍强于亲本株,但差异不显著;对氧化压力的耐受显著弱于亲本株。本研究构建的肠炎沙门氏菌tuf A基因缺失株SM6Δtuf A,为进一步研究EF-Tu在沙门氏菌的生物学和致病机制中的作用奠定了基础。
- 刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业
- 关键词：RED同源重组沙门氏菌生物学特性环境压力
- 肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化
- <正>肠炎沙门菌(Salmonella enterica)是一种无宿主特异性的病原菌,不但引起畜禽疾病,而且是一种重要的人类食源性致病菌,具有重要的公共卫生意义。肠炎沙门菌的热不稳定延伸因子EF-Tu(Elongatio...
- 曹俊刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业
- 关键词：肠炎沙门菌基因缺失环境压力
- 文献传递
- 以结核分枝杆菌为研究模型的自噬免疫学效应
- 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)已造成全球超过10亿人的无症状感染,每年新增数百万的活动病例,病死率达到25%~30%。M.tb最重要的一个特点是:M.tb能够阻断巨噬细胞中...
- 曹俊陈利苹鄢秋龙刘思国
- 关键词：结核分枝杆菌自噬结核病
- 文献传递
