艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008ZX10003-004)
- 作品数：8 被引量：74H指数：6
- 相关作者：李庆阁胡思玉刘小立王峰桂静更多>>
- 相关机构：厦门大学深圳市慢性病防治中心中山大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 耐多药结核分枝杆菌pncA基因突变特征及与吡嗪酰胺耐药相关性研究被引量：16
- 2012年
- 目的了解耐多药MTB的pncA基因突变特征及其与吡嗪酰胺（PZA）耐药之间的关系。方法收集2007-2009年深圳市耐多药MTB共127株，采用BACTECMGIT960系统检测其PZA耐药性，并用Wayne法检测吡嗪酰胺酶（PZase）活性；对pncA基因进行测序，分析其突变情况和分布特征，对PZA药物敏感性与PZase活性、pncA基因突变进行相关性分析。结果127株耐多药菌株中有62株对PZA耐药，耐药率为48．8％。耐PZA菌株中有55株PZase阴性。62株耐药株中有48株发生了pncA基因突变，突变率为77．4％，突变形式包括碱基置换（33株）、移码突变（12株）和整码突变（3株）。48株pncA突变的耐药菌株中，PZase阴性为45株。全部65株敏感株酶活性均为阳性，其中1株菌株发生了pncA基因突变（N11D）。pneA基因突变分析中发现了5个新的突变类型位点：H57P、P62Q、G108R、D110Y、G162V。耐多药菌株对PZA的敏感性与PZase活性（r=0．895，P〈0．05）、pncA基因突变（r=0．779，P〈0．05）存在相关。结论pncA基因突变类型多样，突变随机分布整个基因片段，发现了5个此前未曾报道过的新突变类型，所有突变主要分布于PZase活性位点和金属结合位点及其相邻区域上，且与PZA耐药存在较高相关性。
- 洪创跃王峰桂静刘小立
- 关键词：分枝杆菌结核吡嗪酰胺突变
- 探针熔解分析法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的应用和评价被引量：9
- 2011年
- 目的 评价PMA技术检测MTB对INH耐药突变的价值,调查INH耐药突变发生特征.方法 MTB标准株H37Rv来自国家结核病参比实验室,1株INH敏感株和1株katG S315TACC突变株来自厦门市疾病预防控制中心,7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株来自深圳慢性病防治中心、河南省疾病预防控制中心、中国人民解放军第309医院和厦门市疾病预防控制中心.707份MTB临床分离株来自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心,126份MTB涂阳痰标本来自厦门市同安区疾病预防控制中心.MTB标准株H37Rv、7株MTB INH耐药株和833份临床标本均采用厦门致善结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒热裂解法提取基因组DNA,1株INH敏感株和1株katG S315T ACC突变株采用AxyPrepTM细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA.熔解曲线分析所检标本与野生型对照在katG315位密码子、inhA启动子区（- 17～-8位点）、ahpC启动子区（-44～-30以及-15 ～3位点）及inhA94位密码子的熔解温度（Tm值）差异判断标本是否发生INH耐药突变.3×105拷贝/反应的野生株和katG S315T ACC突变株以10倍梯度稀释至300拷贝/反应,分析PMA技术的灵敏度.用PMA技术检测7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株,评价特异性,并就其中5种耐药突变进行重复性检验.测序验证PMA技术对833份标本INH耐药性的临床检测效能.结果 PMA技术从核酸提取到结果判断可在3小时内完成,在标准96孔实时PCR仪器上可同时检测46份标本.对野生株和katG S315T ACC突变株的灵敏度均为300拷贝/反应,能够同时区分9种INH耐药相关点突变或缺失,5种耐药突变的Tm值标准偏差均在0.5℃之内.检出的162份突变标本与测序验证结果均一致.临床标本验证突变率为19.4％（ 162/833）,在所检出的14种INH耐药突变katGS315T（ AGC →ACC）、inhA启动子区- 15C→T和katG S315N （AGC→AAC）这3种突变�
- 胡思玉牛建军权胜卯黄建炜李庆阁
- 关键词：异烟肼突变聚合酶链反应
- 体外γ-干扰素检测结核分枝杆菌不同方法的应用价值比较被引量：13
- 2012年
- 目的探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放(TB-IGRA)定量试验,对于结核病诊断的应用价值。方法用国产TB-IGRA试剂定量检测342例结核病患者、143例非结核病患者外周血特异性γ-干扰素的含量,同时与澳大利亚QFT GIT和英国牛津T-SPOT.TB试剂进行平行比较分析。结果 TB-IGRA试剂对结核病患者的检测阳性率为90.1%,且对肺结核与肺外结核的检测差异无统计学意义,检测结果不受BCG的影响,与QFT GIT和T-SPOT.TB试剂比较,3种方法差异无统计学意义。结论 TB-IGRA检测结核分枝杆菌有较高的敏感性,对于结核病的诊断及预防有较好的应用价值。
- 李晓非李明武苏俊华周敏杨飞李惠敏熊俊辉
- 关键词：结核分枝杆菌结核病
- 基因芯片检测结核分枝杆菌利福平异烟肼耐药性的应用评价被引量：8
- 2012年
- 目的评价基因芯片检测结核分枝杆菌临床株对利福平和异烟肼耐药性的效果，探讨耐多药结核分枝杆菌基因检测合适的靶位点。方法回顾性收集深圳市慢性病防治中心2009年门诊患者痰标本菌株24株及2007至2009年深圳市耐药监测项目痰标本培养分离菌株127株。采用基因芯片检测其对利福平和异烟肼耐药性，与比例法药敏试验结果比较，评价其敏感度、特异度和准确性。Kappa检验评价芯片检测和表型药敏结果的一致性。对结核分枝杆菌利福平、异烟肼主要耐药相关基因rpoB、katG、inhA编码区、inhA启动子区和ahpC启动子区测序，分析耐药相关突变位点及频率。结果基因芯片检测利福平耐药的敏感度为94．4％，特异度为97．5％，准确性为96．0％；检测异烟肼耐药的敏感度为79．1％，特异度为100％，准确性为86．8％。耐利福平菌株中97．2％（70／72）在rpoB突变热点区域发生突变，位点包括531、526、516、511和533位密码子。耐异烟肼菌株中，70．3％（64／91）发生katG315密码子突变，11．0％（10／91）发生inhA-15突变，还有9株（9．9％）在ahpC启动子区发生突变，包括ahpC-9（4株）、ahpC-10（2株）、ahpC-6（2株）、ahpC-12（1株）和ahpC-32（1株）。结论基因芯片系统可以快速检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性，对利福平的检测具有良好的敏感度和特异度，检测异烟肼敏感度稍低。ahpC启动子区可以作为异烟肼耐药突变检测靶基因，联合筛选katG315密码子、inhA-15和ahpC启动子区突变可以显著提高异烟肼耐药性检测敏感度。
- 王峰桂静赵广录崔运勇刘小立
- 关键词：利福平异烟肼寡核苷酸序列分析
- 应用探针熔解分析法检测结核分枝杆菌rpoB基因突变被引量：3
- 2011年
- 目的 研究结核分枝杆菌利福平耐药突变实时PCR检测试剂盒（探针熔解分析）的临床应用价值.方法 用37株非结核分枝杆菌考察该方法的特异性,用菌株H37Rv考察其检测限,并检测962份结核分枝杆菌培养标本的rpoB基因利福平耐药决定区突变,检测结果经测序验证.结果 37株非结核分枝杆菌中仅有3株出现耐药突变峰,检测限考察结果表明该方法每反应可重复检出30个菌.用该试剂盒检测962份标本,检出突变株186份,野生株751份,扩增失败标本25份.选取2009年11月以后的标本中试剂盒检出为突变的标本112份,并数字表法随机选取200份试剂盒检出为阴性的标本,进行测序验证,除5份测序失败其余107份标本的DNA序列分析结果与试剂盒检测结果一致.结论 该试剂盒准确快速,方便易行,是检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的有力工具.
- 牛建军张轶温慧欣刘歆胡思玉李庆阁
- 关键词：分子探针技术
- 深圳市耐多药结核分枝杆菌流行株耐药基因序列分析被引量：8
- 2011年
- 目的了解深圳市耐多药结核分枝杆菌(multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-TB)的分子流行病学特征。方法参照WHO/I UATLD标准,使用L-J药敏培养基,采用1%比例法药敏试验筛选出敏感株和异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)双耐药临床分离株,通过DNA测序检测深圳地区153株敏感株与132株MDR-TB的INH耐药基因katG、inhA、oxyR-ahpC基因间区域及RFP耐药基因rpoB碱基排列顺序,运用DNASTAR和blastn进行序列分析。结果 153株敏感株突变率为27.5%(42/153)。132株MDR-TB突变率为98.5%(130/132),其中katG基因突变率为73.5%(97/132),68.9%(91/132)为katG315位突变;inhA基因突变率为18.2%(24/132),11.4%(15/132)为启动子区域突变,未发现inhA94特异突变株;ahpC基因突变率为16.7%(22/132),10.6%(14/132)为启动子区域突变;rpoB基因81 bp核心区域突变率为93.2%(123/132)。结论 katG315、inhA启动子区域、ahpC启动子区域以及rpoB 81 bp核心区域突变为深圳地区耐多药结核分枝杆菌主要突变类型,与其他国家和地区差异无统计学意义;但深圳地区未见inhA94突变株。
- 崔运勇王峰刘小立杨慧桂静胡思玉
- 关键词：突变
- 探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药突变被引量：4
- 2011年
- 目的评价探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药突变的应用价值,为临床应用提供依据。方法首先用中国药品生物制品检定所提供的含37份标准非结核分枝杆菌的标准盘进行特异性评价,然后将野生型结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA梯度稀释进行灵敏度考察,最后对906株结核分枝杆菌临床分离株(其中37份有药物敏感性试验结果)的链霉素耐药相关基因进行检测,并对突变菌株、有药敏结果的菌株以及疑似杂合的菌株进行测序分析。结果标准盘评价结果证实该体系特异检测H37Rv结核分枝杆菌。分析灵敏度为5～50拷贝每反应。在所有的906份结核分枝杆菌培养标本中,103份标本发生突变且与测序结果一致,18份标本存在杂合信号,17份标本无信号。37份有药敏结果的标本中,敏感的标本用探针熔解分析法所得结果均为野生型,耐药的16份标本仅检测到7份突变,另有9份耐药的标本实时检测为野生型,与测序结果相符。结论探针熔解分析技术特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌链霉素耐药常见突变,有望直接用于临床标本链霉素耐药性检测。
- 张向东张婷牛建军温慧欣胡思玉李庆阁
- 关键词：结核分枝杆菌链霉素耐药突变
