黑龙江省自然科学基金(ZD20116)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：黑龙江八一农垦大学吉林大学更多>>
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- ENO1过表达对籽鹅卵泡颗粒细胞凋亡基因Bcl-2表达的影响被引量：1
- 2013年
- 本试验将原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞转染ENO1腺病毒过表达载体,应用实时荧光定量PCR方法检测ENO1过表达对颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量的影响。结果发现ENO1过表达使卵泡颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量极显著增加(P<0.01)。提示ENO1可能通过使Bcl-2基因表达量增加,从而抑制籽鹅卵泡颗粒细胞凋亡,促进卵泡的发育。
- 王江璐计红张伟宏赫荣贺郭景茹郭丽杨焕民
- 关键词：籽鹅BCL-2基因颗粒细胞
- 籽鹅卵泡颗粒细胞烯醇化酶过表达模型的建立及其对孕酮分泌的影响被引量：4
- 2014年
- 目的:建立α-烯醇化酶(ENO1)腺病毒过表达载体转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞模型,探讨ENO1过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。方法:采用ENO1腺病毒过表达载体以梯度感染复数值(MOI)100、250、350、400pfu/cell转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞,于转染后24 h、48 h,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达。双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)研究ENO1过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果:最佳转染条件是,当MOI为350 pfu/cell,转染48 h后,转染率达100%;通过荧光定量PCR与Western blot法,检测到ENO1 mRNA与蛋白均过表达(P<0.01);与培养液组和腺病毒空载体组相比较,ENO1过表达使颗粒细胞孕酮分泌量极显著增加(P<0.01)。结论:ENO1过表达会使体外原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞孕酮分泌量增加。
- 张伟宏计红王江璐赫荣贺杨焕民
- 关键词：过表达孕酮颗粒细胞
- 表达α-烯醇化酶重组腺病毒的构建及其在籽鹅卵泡颗粒细胞中的过表达被引量：3
- 2013年
- 为构建表达籽鹅α-烯醇化酶(ENO1)基因的重组腺病毒,本研究利用RT-PCR技术,从籽鹅卵巢组织中扩增ENO1基因,克隆至pShuttle-CMV穿梭载体中,并利用I-CeuI与I-SceI将ENO1基因的表达框切下,连接到腺病毒骨架的pAdxsi载体中。采用PacⅠ酶切,将其线性化,并转染至293(R)细胞进行病毒的包装,制备重组腺病毒。实验结果显示,制备的表达ENO1重组腺病毒的滴度达到1.1×1011pfu/mL。将重组腺病毒感染籽鹅卵泡颗粒细胞后,荧光定量RT-PCR与western blot检测显示细胞中ENO1基因和蛋白表达水平显著高于正常细胞(p<0.05),这些结果为研究ENO1生物学活性及功能奠定了基础。
- 计红王江璐张伟宏郭景茹杨焕民柳巨雄李士泽孔凡志
- 关键词：重组腺病毒颗粒细胞
