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牛腺病毒3型免疫荧光检测方法的建立: 2022年; 目的建立免疫荧光检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus type3,BAV-3)的方法,用于生物制品用牛源材料的检测。方法分别以牛鼻甲骨细胞、传代牛肾细胞、原代牛肾细胞培养BAV-3,筛选最适宜的敏感细胞培养BAV-3,纯化获得抗原后免疫BALB/c小鼠。采用杂交瘤抗体技术制备抗BAV-3单克隆抗体(单抗),亲和层析法纯化后用异硫氰酸荧光素标记。用制备的单抗建立直接免疫荧光法检测BAV-3,并对方法的特异性、灵敏度及中间精密度进行验证。结果用抗BAV-3单抗检测牛腹泻病毒、副流感病毒3型、呼肠孤病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、羊轮状病毒,均无交叉反应。采用该方法检测牛鼻甲骨细胞培养的BAV-3,3次传代可检出的最低病毒含量和标准差分别为0.10和0.05 CCID_(50)。结论建立的免疫荧光检测BAV-3方法具有良好的特异性和较高的灵敏度、中间精密度,可用于BAV-3的常规检测。; 贺倩刘艳郭敏张平司璐李佳林魏至栋鱼轲; 关键词：外源病毒免疫荧光试验

细胞工厂生产口服轮状病毒活疫苗的应用研究被引量：4: 2011年; 为了确定用细胞工厂生产口服轮状病毒活疫苗的工艺参数和质控点,将原代牛肾细胞按20×104个/cm2接种到细胞工厂培养,待形成良好单层后按4×104个/cm2连续传代2次后接种轮状病毒,并与转瓶作对照。结果显示,用细胞工厂生产口服轮状病毒活疫苗与转瓶培养无差异,细胞工厂可用于改进口服轮状病毒活疫苗的生产。; 刘学平魏至栋谢澎庞兴任雅萍; 关键词：细胞工厂轮状病毒疫苗

新生牛血清促牛肾细胞生长试验测定方法的建立被引量：5: 2010年; 为了建立一种测定新生牛血清促牛肾细胞生长试验的方法,采用测定新生牛血清对原代牛肾细胞培养增殖的克隆率来评价新生牛血清的质量。结果显示,用克隆率大于25%的新生牛血清培养原代牛肾细胞至7～8d时均能形成良好单层,而克隆率小于25%的新生牛血清培养原代牛肾细胞时形成良好单层的时间将延长。由此可得出:对原代牛肾细胞培养增殖的克隆率大于25%的新生牛血清符合口服轮状病毒活疫苗生产的需要,依此结果可进行新生牛血清的筛选。; 刘学平魏至栋谢澎马彦强鱼轲

牛肾细胞基质牛源病毒的控制和检测被引量：4: 2012年; 目的:检测和控制牛肾细胞基质中可能存在的外源病毒,提高细胞基质的安全性,保证轮状病毒疫苗的质量。方法:用ELISA法检测牛肾供体新生小牛血清中的病毒抗体。用细胞培养法检测供体血清和牛肾细胞中的外源病毒,免疫荧光抗体法检测供体血清和牛肾细胞中的特殊牛源病毒。结果:81份禁食禁水的新生小牛血样7种病原抗体检测均为阴性;血吸附病毒检测均为阴性,直接免疫荧光检出1例BVDV阳性。65份牛肾细胞特殊牛源病毒检测均为阴性。结论:通过对牛肾供体小牛进行病原筛选可有效降低牛肾细胞携带外源病毒的风险,也是提高疫苗安全性行之有效的策略。; 魏至栋鱼轲刘艳郭敏谢澎庞兴; 关键词：外源病毒

牛肾组织及其培养物的不同消化法效果评价被引量：4: 2010年; 为了比较不同消化液及消化方式对牛肾皮质组织和培养后形成单层细胞的消化分散效果并确定最适消化液和消化方式,分别用0.25%胰蛋白酶和0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA两种消化液,消化牛肾皮质组织及其培养形成的单层牛肾皮质细胞。牛肾皮质组织采用热(37℃)和冷(4℃)两种消化方式;经培养形成单层的牛肾皮质细胞采用室温(25℃)消化。结果显示,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液热消化牛肾组织时,分散获得牛肾皮质细胞的活细胞数、存活率、贴壁率均优于其他消化方法,差异显著(P<0.05)。培养形成的单层牛肾皮质细胞用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化液的消化速度明显快于用单一0.25%胰蛋白酶消化液的消化速度,统计学分析显示具有显著性差异(P<0.01),两种消化液消化所得细胞的存活率及贴壁率前者要更高,差异显著(P<0.05)。; 刘学平魏至栋沈劲草马彦强庞兴谢澎; 关键词：消化液

牛肾细胞传代稳定性研究被引量：2: 2010年; 为了掌握牛肾细胞在体外连续传代过程中的增殖特点,将原代牛肾细胞培养形成良好单层后,按4×104个细胞/cm2连续进行传代,测定毎代次收获的细胞数,并记录每代细胞培养时形成良好单层的时间。结果显示,原代牛肾细胞传代至24代时,培养96h仍能形成良好单层,且细胞形态基本保持一致,遗传物质稳定,为建立牛肾细胞库奠定了基础。; 刘学平魏至栋鱼轲谢澎; 关键词：传代稳定性

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国家科技支撑计划(2008BAI54B04-04)