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广东省重大科技项目(2000)

作品数：10 被引量：101H指数：5
相关作者：姜晓丹徐如祥蔡颖谦邹雨汐杜谋选更多>>
相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学广州医学院第一附属医院更多>>
发文基金：广东省重大科技项目国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 9篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 8篇细胞
  • 7篇神经干
  • 7篇神经干细胞
  • 7篇干细胞
  • 6篇骨髓
  • 5篇源性
  • 5篇分化
  • 3篇营养因子
  • 3篇神经营养
  • 3篇神经营养因子
  • 3篇髓源性
  • 3篇体外
  • 3篇细胞分化
  • 3篇基因
  • 3篇胶质
  • 3篇胶质细胞
  • 3篇骨髓源性
  • 3篇骨髓源性神经...
  • 2篇诱导分化
  • 2篇帕金森

机构

  • 5篇中国人民解放...
  • 5篇南方医科大学
  • 1篇广州医学院第...

作者

  • 10篇徐如祥
  • 10篇姜晓丹
  • 6篇蔡颖谦
  • 5篇邹雨汐
  • 4篇徐强
  • 4篇杜谋选
  • 3篇张世忠
  • 3篇郭再玉
  • 3篇姚谦明
  • 1篇何启
  • 1篇程国雄
  • 1篇汤冬旋
  • 1篇张旺明
  • 1篇唐劭年
  • 1篇秦玲莎
  • 1篇王彦惠
  • 1篇柯以铨
  • 1篇肖炳祥
  • 1篇邹志浩
  • 1篇郭续文

传媒

  • 4篇中华神经医学...
  • 3篇中国临床康复
  • 1篇第一军医大学...
  • 1篇基础医学与临...
  • 1篇广州医学院学...

年份

  • 3篇2006
  • 3篇2005
  • 2篇2004
  • 2篇2003
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
绿荧光蛋白标记人骨髓源性神经干细胞的体外实验研究被引量：20
2003年
目的:探讨重组腺相关病毒包装绿荧光蛋白(rAAV-GFP)标记人骨髓源性神经干细胞(BM.NSCs)的可行性,为进一步行标记细胞移植实验研究奠定基础。方法:以成人自愿者的骨髓为研究对象,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞并用“Cytokine·神经干细胞培养基”诱导分化为神经干细胞,分化的细胞以免疫细胞化学鉴定。对接种生长的BM.NSCs(1×105～6/mL)以无血清培养基冲洗并重悬细胞,依最佳病毒感染指数(MOI)为105的标准计算、加入包装了GFP的rAAV病毒颗粒,连续培养12h(37℃,50mL/LCO2)以感染细胞;补加100g/L胎牛血清后,于神经干细胞培养基中继续细胞培养24h(37℃,50mL/LCO2)以上,荧光显微镜(OlympusIX70,Japan)追踪观察rAAV-GFP标记的BM.NSCs。结果:BM.NSCs于标记后1周内见不到GFP阳性表达;在标记10d后才出现有GFP阳性表达情况(平均每个200倍镜下视野可见到5～10个GFP阳性细胞),所标记的细胞在荧光显微镜下呈亮绿色;随着培养时间延长,BM.NSCs表达GFP也逐渐增强、阳性细胞数量逐渐增多,并可于1个月时最明显(标有GFP阳性的细胞可达BM.NSCs总数的60%),追踪观察到到2.5个月时亦未见衰减。结论:rAAV-GFP在人骨髓源性神经干细胞中的表达较迟,但呈渐强趋势;rAAV-GFP标记人骨髓源性神经干细胞具有可行性。
姜晓丹徐如祥张旺明邹雨汐蔡颖谦杜谋选
关键词：骨髓源性神经干细胞体外实验
转基因治疗帕金森病的研究进展被引量：2
2006年
姚谦明徐如祥姜晓丹
关键词：转基因帕金森病
Nurr1基因在体外培养大鼠骨髓源性神经干细胞的表达被引量：2
2005年
目的获得表达孤儿核受体(Nurr1)基因的骨髓源性神经干细胞(BMSCs-NSCs)。方法构建携带Nurr1基因的重组腺相关病毒(AAV)载体AAV-pcDNA3.1-Nurr1,提取质粒,用脂质体转染法转染大鼠BMSCs-NSCs,并用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测阳性细胞。结果经酶切鉴定和DNA测序,证实得到了序列正确的重组pAAV-Nurr1,获得了Nurr1阳性的BMSCs-NSCs。结论重组AAV携带的Nurr1基因能够在BMSCs-NSCs中表达,本研究为进一步探讨将该基因工程细胞用于帕金森病基因治疗提供了可能性。
姚谦明徐如祥姜晓丹蔡颖谦
关键词：腺相关病毒骨髓源性神经干细胞
GDNF对Nurr1基因的大鼠骨髓源神经干细胞的诱导分化作用被引量：1
2006年
目的:利用胶质细胞系源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotroph ic factor,GDNF)对经过转染核相关因子1(nuc lear related factor 1,Nurr1)基因的大鼠骨髓源神经干细胞(bone m arrow strom al cells de-rived from neural stem cells,BMSCs-D-NSCs)进行培养和诱导分化,研究其能否促进Nurr1-BMSCs-D-NSCs向多巴胺能神经元转化。方法:(1)构建AAV-pcDNA3.1-Nurr1载体;(2)诱导SD大鼠BMSCs分化为成熟的神经元样细胞;(3)用脂质体法转染Nurr1基因到大鼠BMSCs-D-NSCs后用GDNF进行培养和诱导分化。结果:(1)AAV-pcDNA3.1-Nurr1载体携带预期的Nurr1遗传信息;(2)Nurr1基因成功转染到BMSCs-D-NSCs中并且持续表达;(3)Nurr1-BMSCs-D-NSCs以GDNF培养后表达TH因子。结论:GDNF能促进经过转染Nurr1基因的大鼠BMSCs-D-NSCs向多巴胺能神经元定向分化。
姚谦明徐如祥姜晓丹蔡颖谦何启程国雄汤冬旋
关键词：胶质细胞系源性神经营养因子骨髓源神经干细胞
碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子对恒河猴骨髓源性神经干细胞的体外诱导增殖作用被引量：8
2004年
目的:探索骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)体外诱导分化为神经干细胞(nervestemcells,NSCs)的增殖条件,比较碱性成纤维细胞生长因子(basefibroblastgrowthfactor,bFGF)、表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)对神经干细胞生长曲线的影响,为BMSCs在神经科学领域内的应用提供参考。方法:以恒河猴骨髓中分离出的BMSCs为实验对象,实验组利用NSC培养基和bFGF,EGF生长因子,进行体外培养、诱导、增殖。对照组用神经干细胞培养基进行培养增殖。Nestin及CD133作为免疫细胞化学鉴定NSCs的细胞标志。结果:原代培养第6天时多数细胞表现为Nestin及CD133抗原阳性,此后实验组及对照组细胞数量开始明显扩增,但实验组增殖更为明显,bFGF+EGF组从第8天时的(96.30±8.78)×104增加到第18天时的(1407.90±26.62)×104,并且增殖开始的时间较对照组提前2d。NSCs在10d后有少量细胞向神经元和神经胶质细胞分化。结论:bFGF与EGF联合应用能够促使NSCs增殖时间提前及增殖效能显著提高。另外,bFGF和EGF还具有诱导NSC向神经细胞分化的作用。
郭再玉姜晓丹徐如祥邹雨汐徐强杜谋选蔡颖谦秦玲莎
关键词：NSC碱性成纤维细胞生长因子表皮生长因子BMSC神经干细胞恒河猴
骨髓基质细胞源性神经干细胞体外分化及电生理特性的研究被引量：26
2005年
目的探索骨髓基质细胞(BMSCs)诱导分化为神经干细胞(NSCs),比较血清、维甲酸(RA)、胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及2-巯基乙醇(2-ME)等不同浓度诱导条件下BMSCs分化情况,以及分化细胞的电生理特性。方法以恒河猴骨髓中分离出的BMSCs为实验对象,利用神经干细胞培养基和RA、GDNF、BDNF、2-ME等生长因子在不同血清浓度下进行培养增殖和诱导分化。Nestin、CD133抗体免疫细胞化学染色鉴定NSCs,NSE、β-tublin鉴定神经元、GFAP鉴定神经胶质细胞。膜片钳检测细胞的电生理特性。结果低浓度血清(2.5%)+RA(0.3mg/L)+GDNF(20μg/L)诱导分化效果较好,且分化的神经元样细胞较未分化细胞的膜特性[静息膜电位(RMP)、膜电容(Cm)、串联电阻值(Rs)]有了显著改变(P﹤0.01)。部分形态成熟的神经元样细胞表现出TTX敏感的快速激活、快速失活的电压依赖性的Na+通道,而未分化细胞却未记录到内向电流;两类细胞均可记录到外向的K+电流,但神经元样细胞的电流峰值强度要显著高于未分化细胞,并且包括两种电流成分:瞬时外向K+电流和延迟整流型的K+电流。结论RA+GDNF及配合使用低浓度血清能够有效诱导骨髓源神经干细胞向成熟神经系细胞分化,且分化的神经元样细胞具有快速激活、快速失活的电压依赖性Na+通道,类似神经细胞的电生理特性。
郭再玉姜晓丹徐如祥张世忠徐强邹雨汐杜谋选蔡颖谦
关键词：电生理特性细胞源性胶质细胞源神经营养因子骨髓源神经干细胞未分化细胞电压依赖性
源于成人骨髓神经干细胞诱导分化的实验研究(英文)被引量：21
2003年
目的研究成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性,为进一步自体移植治疗脑退行病变的临床应用奠定基础。方法以20例成年男/女性(28～48岁)骨髓自愿捐献者为取材对象,骨穿术后经梯度密度离心分离获取的成人骨髓基质细胞用“Cytokine·神经干细胞培养液”培养,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖;以巢蛋白(Nestin),神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质原性纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学方法分别鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。所涉及的细胞因子主要有脑源性神经营养因子(BDNF)、白血病抑止因子(LIF)(10μg/L)和维A酸(RA)(0.5mg/L)等。结果成人骨髓基质细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为神经干细胞,并由含粗大胞质颗粒的多个神经干细胞组成岛屿状细胞球(神经球),该细胞球表达特殊的神经干细胞Nestin抗原;进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度培养,单个的细胞又很快变成岛屿状神经球。神经干细胞球进一步分化,则可见到有的细胞胞体增大并出芽、逐渐发育成为较成熟的长突起细胞,长突起相互连接、交织成网,分化的长突起细胞表达NSE或GFAP。结论成年人骨髓在一定条件诱导下可以生成神经干细胞;用人骨髓组织诱导神经干细胞作为种子细胞具有可行性。
姜晓丹徐如祥张世忠柯以铨
关键词：成人骨髓移植神经干细胞细胞分化
成年大鼠纹状体神经干细胞的体外培养及分化被引量：5
2004年
目的探讨成年大鼠纹状体神经干细胞多向分化的可能性。方法分离成年大鼠纹状体神经干细胞,单克隆连续传代培养并诱导分化,将分化产物进行免疫细胞化学染色及RT-PCR检测分析。结果无血清单克隆培养时期可见大量的细胞团出现,以血清诱导分化后出现多种细胞类型,免疫细胞染色发现分化细胞中有Nestin阳性、NSE阳性、GFAP阳性细胞,RT-PCR法分析mRNA水平有脑因子-1、γ-氨基丁酸α-受体γ-亚单位、酪氨酸羟化酶及色氨酸羟化酶等基因的表达。结论成年大鼠纹状体内分离出的干细胞样细胞具有自我增殖和多向分化潜能。
王彦惠刘亚杰卢洪流刘振华姜晓丹徐如祥周振军邹雨汐陈一招
关键词：成年大鼠纹状体神经干细胞体外培养细胞分化逆转录聚合酶链反应
6-羟基多巴定向注射建立帕金森病大鼠模型的实验研究被引量：25
2006年
目的探讨立体定向间隔注射6-羟基多巴(6-OHDA)毁损黑质致密部(SNc)和中脑腹侧被盖(VTA)建立类似于人类帕金森病(PD)中晚期的PD大鼠模型方法。方法近交系Wistar大鼠50只,脑立体定向将6-OHDA注入大鼠右侧VTA及SNc,间隔两周,对阿朴吗啡(Apo)诱发旋转后旋转不明显或无稳定左侧旋转模型再次制模,并观察大鼠行为学改变,免疫组化检测黑质多巴胺(DA)能神经元的数量以及高效液相-荧光法检测黑质纹状体中DA含量的变化。结果(1)50只大鼠中有41只经APO诱导表现为恒定左侧旋转且结果稳定,旋转圈数>210r/30min,视为成功PD大鼠模型,部分大鼠伴有震颤、活动迟缓、嗅探、觅食、竖尾等异常行为改变,并且可持续存在16周;(2)免疫组化结果:PD大鼠模型毁损侧黑质区多巴胺能神经元较对侧及对照组减少大于90%;(3)PD大鼠右侧黑质纹状体中DA含量较左侧及对照组减少90%以上。结论6-OHDA毁损SNc及VTA间隔注射法可有效建立模拟人类PD中晚期的大鼠PD模型。
邹志浩张世忠姜晓丹徐如祥肖炳祥唐劭年郭续文徐强杜谋选蔡颖谦
关键词：帕金森病6-羟基多巴高效液相色谱法免疫组化
体外诱导恒河猴骨髓基质细胞分化为神经细胞的分化条件被引量：5
2005年
目的比较血清维甲酸(retinoicacid,RA)、胶质细胞源神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)及脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)等在不同浓度诱导条件下使恒河猴骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells)诱导分化为神经干细胞(NSCs)及成熟神经细胞的分化条件。方法用Nestin、CD133抗体免疫细胞化学染色,鉴定NSCs;用NSE、-βtublin鉴定神经元;用GFAP鉴定神经胶质细胞,膜片钳检测分化成熟细胞的电生理特性。结果培养第8天多数细胞表现出Nestin及CD133抗原阳性,即为NSCs细胞;诱导后3天即有神经元样细胞出现,此后神经元样细胞逐渐增多,膜片钳检测发现这些细胞具有类似神经细胞的电生理特性。同时,与其他培养条件相比较,低浓度血清(2.5%)+RA+GDNF组诱导分化效能最高。结论应用RA+GDNF及配合使用低浓度血清能够高效诱导骨髓源NSCs向成熟神经细胞分化。
郭再玉姜晓丹徐如祥徐强邹雨汐肖炳祥
关键词：恒河猴体外诱导胶质细胞源神经营养因子免疫细胞化学染色骨髓基质细胞NSCS
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