北京市自然科学基金(6082008)
- 作品数：10 被引量：28H指数：4
- 相关作者：周双海谢俊岭高峰邵小雪王霞泰更多>>
- 相关机构：北京农学院青岛农业大学天津市宁河原种猪场更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市教委科技计划面上项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- PCV2和猪伪狂犬病弱毒疫苗体外共接种对猪PBMC中IL-2及IL-6 mRNA表达的影响被引量：3
- 2011年
- 将猪圆环病毒2型(PCV2)与猪伪狂犬病弱毒疫苗(PRV)体外单接种和共接种仔猪外周血单个核细胞(PB-MC),采用real-time PCR技术定量检测接种后不同时间PBMC细胞因子IL-2和IL-6的mRNA表达水平,以分析PCV2对PRV免疫反应的影响。结果显示,PRV接种组PBMC中IL-2与IL-6的mRNA表达均出现显著上调(P<0.05),PCV2接种组IL-2与IL-6的mRNA表达在接种后的部分时间也出现显著上调,但PCV2与PRV共接种组的IL-2与IL-6的mRNA表达较PRV组均出现显著下调,表明PCV2能够抑制PRV促进猪PBMC中IL-2与IL-6的mRNA表达上调作用,提示PCV2可能会对PRV的免疫反应产生不利影响。
- 高峰贾磊贾超伟任慧英周双海
- 关键词：PCV2外周血单个核细胞IL-2IL-6
- 猪圆环病毒II型感染抑制伪狂犬病病毒疫苗的体液免疫反应被引量：8
- 2013年
- 为了探讨猪圆环病毒II型(PCV2)感染对伪狂犬病病毒(PRV)疫苗体液免疫反应的影响,检测了PCV2实验感染仔猪血清中PRV疫苗抗体含量的动态变化。将仔猪随机分成二组,一组仔猪进行PCV2接种和PRV疫苗免疫而作为PCV2组;另一组仔猪不予PCV2接种但进行PRV疫苗免疫而作为对照组。所有仔猪在PCV2接种后14天均进行PRV弱毒疫苗免疫,用间接ELISA检测仔猪血清中病毒特异性抗体;到PCV2接种后14天,PCV2组仔猪全部出现PCV2病毒血症。在PRV疫苗免疫后7天,多数仔猪血清中可检测到疫苗抗体之后疫苗抗体含量逐渐上升,在免疫后14天时对照组疫苗抗体水平显著(P<0.05)高于PCV2组,但在免疫后21天时两组之间抗体水平没有差异。研究结果显示:PCV2实验感染仔猪的PRV疫苗抗体产生出现延迟,表明PCV2感染可抑制PRV疫苗诱导的体液免疫反应。
- 高峰孟凡伟单晶晶周双海王志军段佳强张军
- 关键词：猪圆环病毒II型仔猪抗体体液免疫反应
- 猪圆环病毒2型感染抑制仔猪伪狂犬病疫苗抗体的产生
- 为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染对仔猪伪狂犬病疫苗抗体产生的影响,将12头35日龄健康普通仔猪随机平均分成2组,一组滴鼻口服106,05TCID50 PCV2作为感染组,另一组不予接种作为对照。到接种后14天,感染仔...
- 孟凡伟高峰单晶晶周双海
- 关键词：猪圆环病毒2型伪狂犬病疫苗仔猪抗体
- 文献传递
- 猪圆环病毒Ⅱ型和伪狂犬病弱毒疫苗体外共接种对猪外周血单个核细胞调节性细胞因子mRNA表达的影响被引量：4
- 2012年
- 为分析猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)对伪狂犬病弱毒苗(PRV)免疫反应的影响。用Real-time PCR技术检测了仔猪外周血单个核细胞(PBMC)体外单接种和共接种PCV2与PRV后调节性细胞因子IL-4、IL-10、IL-12p40及IFN-γ的mRNA表达水平。结果表明:PRV能引起IL-4、IL-12p40与IFN-γ的mRNA表达上调,PCV2能引起IL-4、IL-10与IL-12p40的mRNA表达上调;而且,PCV2能抑制PRV诱导IL-4、IL-12p40及IFN-γ的mRNA表达上调,其中对IFN-γmRNA表达的抑制效果最为显著(P<0.05),提示PCV2可能会对PRV的细胞免疫反应产生不利影响。
- 高峰谢俊岭贾超伟周双海任慧英
- 关键词：细胞因子免疫反应
- DNA免疫法制备猪圆环病毒Ⅱ型ORF3抗体被引量：1
- 2012年
- 为了制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)开放阅读框3(ORF3)蛋白的抗体,并为ORF3功能研究奠定基础,用PCR方法扩增PCV2ORF3基因,对其PCR产物用EcoRI与XhoI进行酶切,并对真核表达载体pCDNA3.1(+)进行同样酶切,连接2种目的酶切产物后转化E.coliDH5a感受态,菌落PCR和序列测定结果显示成功构建出重组质粒pCDNA3.1-PCV2ORF3。将该重组质粒接种BALB/c小鼠,用间接免疫荧光(IFA)检测小鼠血清PCV2ORF3抗体的特异性及其效价。IFA结果证实经PCV2ORF3重组质粒接种所制备的小鼠血清是PCV2ORF3的特异性抗体,小鼠血清PCV2ORF3抗体效价在经过4次接种后均达到1:25以上,抗体检测结果表明成功制备了具有较高效价的PCV2ORF3抗体。研究结果提示:可以通过质粒DNA免疫方法来快速、简便地制备PCV2ORF3抗体,为PCV2ORF3抗体制备提供了一种新的有效途径。
- 谢俊岭耿美鸽吴迪卻小宁周双海
- 关键词：DNA免疫小鼠效价
- 嵌合猪圆环病毒对仔猪的致病性与免疫原性研究被引量：2
- 2012年
- 为分析嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)对仔猪的致病性与免疫原性,检测了健康普通仔猪接种PCV1-2后的临床症状、病理变化、血清与组织中的病毒含量及血清学变化。结果显示:仔猪接种PCV1-2后增重和饲料转化效率未受影响,未出现可见的临床症状和大体病理变化,仅部分出现轻微的组织病理变化。血清中猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2蛋白抗体在接种后第14天出现阳转,第28天时抗体阳性率达到100%,表明PCV1-2诱发仔猪快速产生了针对PCV2ORF2蛋白抗原的特异性抗体反应。荧光定量PCR结果显示,血清中PCV1-2DNA含量在接种后逐渐上升,第28天时达到最高,之后迅速下降;第35天宰杀时组织中病毒含量以肺门淋巴结中最高,心脏中最低;而常规PCR难以检出血清和组织中的PCV1-2DNA,表明PCV1-2接种后只引起仔猪的轻微感染。研究数据表明,PCV1-2对仔猪具有良好的免疫原性,其致病性明显减弱。
- 邵小雪高峰谢俊岭周双海
- 关键词：猪圆环病毒2型免疫原性
- 猪圆环病毒Ⅱ型感染性DNA克隆的构建被引量：2
- 2012年
- 为了构建猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染性DNA克隆,并为PCV2的突变体构建及其致病机理研究建立基础。用PCR方法从PCV2 DNA质粒中扩增出PCV2全基因组片段,将其插入到pBluescript-SK载体中,构建出单拷贝PCV2 DNA克隆,并进一步构建了双拷贝PCV2 DNA克隆,将PCV2 DNA克隆转染PK-15细胞,以获得PCV2拯救病毒,并初步测定了拯救病毒的体外增殖能力。结果显示:成功获得了PCV2拯救病毒,并能够在PK-15细胞中进行稳定传代,其TCID50在连传5代后达到10-6.05/mL,与其亲本病毒相近,显示出较高的感染滴度。研究结果表明,成功构建了具有较高感染性的PCV2感染性克隆,为PCV2的生物学特性及致病机理研究奠定了基础。
- 谢俊岭邵小雪孟凡伟周双海
- 关键词：增殖能力
- 猪圆环病毒1型感染性克隆的构建被引量：6
- 2011年
- 为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)感染性DNA克隆,并为PCV1基因突变体的构建及PCV2的相关研究奠定基础,采用PCR方法从PCV1质粒中扩增出了PCV1全基因组片段,将其插入到pBluescriptⅡSK(+)载体中,构建了单拷贝PCV1DNA克隆,并进一步构建了双拷贝PCV1DNA克隆;将双拷贝PCV1DNA克隆转染入PK-15细胞以获得拯救病毒,并初步测定了拯救病毒在体外细胞培养的增殖能力和遗传稳定性。结果表明,成功获得了PCV1拯救病毒,并能够在PK-15细胞中进行稳定传代,其TCID50在连传5代后达到106.55/mL,与其亲本病毒相近,显示出较高的增殖能力。
- 邵小雪周双海谢俊岭冉多良
- 关键词：猪圆环病毒1型
- 猪圆环病毒2型感染性克隆构建的比较分析
- 危害养猪业的猪圆环病毒2型(PCV2)的致病机制仍不太清楚,而感染性克隆是研究病毒致病机制的有效工具。本研究用基因重组技术构建了pMD-PCV2、pSK-PCV2和pSK-2PCV2三种DNA分子克隆,并比较了其在PK-...
- 周双海谢俊岭
- 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆转染效率
- 文献传递
- 猪IL-18 mRNA定量RT-PCR检测方法的建立
- 2008年
- 根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后用反向PCR技术构建出与扩增411 bp片段共用同1对引物,但缺失174 bp的竞争重组质粒。通过上述2种质粒的竞争PCR方法,建立了猪IL-18 mRNA的标准竞争曲线,得到其直线回归方程^y=0.583 2x-2.903 4(R2=0.9898)。
- 王霞泰汤世坤周双海刘凤华
- 关键词：IL-18
