中国博士后科学基金(2004035160) 作品数:12 被引量:32 H指数:4 相关作者: 宋铭忻 路义鑫 李冬梅 董晓波 花丽茹 更多>> 相关机构: 东北农业大学 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 更多>> 发文基金: 中国博士后科学基金 霍英东青年教师基金 哈尔滨市学科后备带头人基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
旋毛虫不同隔离种成囊前期幼虫49ku ES抗原基因的克隆与序列分析 被引量:2 2007年 根据Gen Bank中已发表的序列(M64242)为参考设计引物,用RT-PCR方法从6个旋毛虫隔离种的成囊前期幼虫中扩增出了49 ku ES抗原基因,将目的基因定向克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌TG1。用PCR、限制性内切酶EcoR I和BamHI进行单、双酶切鉴定,阳性质粒测序。成功克隆了6个旋毛虫隔离种成囊前期幼虫49 ku ES抗原基因,序列分析结果显示:49 kuES抗原基因的大小为948 bp,基因的保守性很强,序列同源性比较高,不同隔离种之间的差异很小。 路义鑫 宋铭忻 王洪斌关键词:旋毛虫 成囊前期幼虫 克隆 猪旋毛虫不同发育时期虫体49ku ES抗原基因的克隆与序列分析 被引量:4 2006年 根据GenBank中已登录的猪旋毛虫49 ku ES抗原基因序列设计了1对引物,用SDS裂解液配合蛋白酶K方法从猪旋毛虫不同发育时期(成囊前期幼虫、肌幼虫、成虫)虫体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增49 ku ES抗原基因,将目的基因定向克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希氏菌TG1。用PCR、限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ进行单、双酶切鉴定,阳性质粒的测序结果表明,成功克隆了猪旋毛虫不同发育时期虫体49 ku ES抗原基因。序列分析结果显示:49 kuES抗原基因大小为948 bp,基因的保守性很强,序列同源性比较高,不同发育时期之间的差异很小。 路义鑫 宋铭忻 王洪斌关键词:旋毛虫 KU 黑龙江省旋毛虫分类研究进展 2007年 近年来,随着遗传学、生物学和分子生物技术的发展及其在寄生虫学方面的应用,国内学者认为黑龙江省旋毛虫有2个种和1个分类地位尚未定的基因型。文章根据黑龙江省旋毛虫形态学、生物学、遗传学、分子生物学等方面表现的不同特性,对其分类学方面的研究加以综述。 姜曰晓 宋铭忻 路义鑫关键词:旋毛虫 人兽共患病 旋毛虫Ts43基因真核表达载体的构建及其在Vero E6细胞中的表达 2007年 利用RT-PCR技术从黑龙江省猪源旋毛虫获得了Ts43基因,并克隆入pcDNA3.1-CT-GFP真核表达载体中构建重组质粒,用该重组质粒在脂质体介导下转染Vero E6细胞,GFP标签证明质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达,通过Western-blot分析,细胞裂解液样品中有1条约66 ku的条带,可被小鼠旋毛虫阳性血清所识别,与预计大小一致,说明,真核表达载体pcDNA3.1-CT-GFP中的Ts43基因在VeroE6细胞中获得了表达,表达产物具有抗原性。 王君 路义鑫 姜曰晓 朱江威 朱艳梅 袁金钱 宋铭忻关键词:旋毛虫 克隆 真核表达 旋毛虫排泄/分泌(ES)抗原致鼠胸腺淋巴细胞凋亡的研究 2007年 本试验首次以体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞为实验对象,加入旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫ES抗原做刺激物,通过对鼠胸腺淋巴细胞DNA损伤、凋亡水平的检测,进而证明旋毛虫肌幼虫ES抗原能够诱导鼠胸腺淋巴细胞发生调亡。掌握这种免疫细胞凋亡(apoptosis)发生的过程,对分析免疫应答的特点和调控,以及探索旋毛虫病(Trichinosis)的发病机制和提供防治对策都具有重要意义。 花丽茹 董晓波 李冬梅 韩周 宋铭忻关键词:寄生虫感染 旋毛虫感染 猪犬旋毛虫在豚鼠体内的低温耐受性试验 被引量:6 2007年 路义鑫 韩彩霞 马广鹏 宋铭忻 邹丽关键词:犬旋毛虫 猪肉 旋毛虫病 旋毛虫ITSⅡ区基因的克隆及其在分类学上的应用 被引量:10 2006年 克隆了6个不同旋毛虫隔离种的核糖体RNA ITSⅡ区的基因片段,序列分析结果表明,黑龙江省猪旋毛虫和猫旋毛虫为旋毛形线虫(Trichinella spiralis);犬旋毛虫为本地毛形线虫(Trichinella nativa),与传统的分类结果基本一致,为传统的分类学方法提供了基础依据。 董晓波 李冬梅 花丽茹 路义鑫 宋铭忻关键词:旋毛虫 隔离种 黑龙江省猫旋毛虫18S rRNA基因分子克隆及序列分析 被引量:3 2007年 本文利用GenBank中发表的(Trichinella spiralis)18S rRNA序列为参考设计引物,对分离自黑龙江省猫体内的旋毛虫及本地毛形线虫(Trichinella nativa)的18S rRNA基因进行扩增,克隆后测序,序列分析结果表明:猫旋毛虫与旋毛形线虫基因同源性更高。 李冬梅 王秀荣 董小波 路义鑫 宋铭忻关键词:隔离种 RRNA 本地毛形线虫49 Ku ES重组蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 2007年 采用纯化的本地毛形线虫49KuES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株制备腹水。获得两株稳定分泌抗重组蛋白McAb的杂交瘤细胞株D5和C1。试剂盒鉴定两株McAb均属IgM亚类,其轻链均为K链;间接ELISA检测细胞培养液上清和腹水效价,结果显示,两株细胞培养液上清均达到1:1.28X10^3,腹水效价均达到1:1.28X10^4;Western blot结果表明,获得的两株McAb均能特异性的识别约49Ku处的ES抗原;间接ELISA结果显示两株McAb与日本血吸虫成虫、猪囊尾蚴囊液、猪蛔虫、猪鞭虫抗原均无交叉反应,表明两株McAb特异性良好。 姜曰晓 路义鑫 王君 宋铭忻关键词:本地毛形线虫 重组蛋白 杂交瘤 单克隆抗体 旋毛虫各隔离种ITSⅡ区基因克隆和序列分析 被引量:2 2006年 克隆了6个不同旋毛虫隔离种的核糖体RNAITSⅡ区的基因片段,序列分析结果表明,黑龙江省猪旋毛虫和猫旋毛虫为旋毛形线虫(Trichinellaspiralis);犬旋毛虫为本地毛形线虫(Trichinellanativa)。结果与传统的分类结果基本一致,为传统的分类学方法提供了基础依据。 董晓波 李冬梅 花丽茹 路义鑫 宋铭忻关键词:旋毛虫 隔离种 ITS