新疆维吾尔自治区科技支疆项目(201091132)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：叶凯涂振东陆亮陈高云于孟斌更多>>
- 相关机构：新疆农业科学院中国人民解放军新疆农业大学更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区科技支疆项目引进国际先进农业科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 多基因串联表达木糖发酵工程菌株的构建
- 2013年
- 通过基因工程的手段,利用木糖发酵转化乙醇是近年来研究的热点。为引入木糖向木酮糖转化的途径,采用多重拼接PCR方法将木糖向木酮糖转化有关的木糖还原酶基因(xyl1)、木糖醇脱氢酶基因(xyl2)与转醛酶基因(tal1)进行拼接后克隆到表达载体pAUR123中,获得融合表达载体pAUR123-X12A;为超表达下游代谢途径的基因,将控制木酮糖向乙醇转化的木酮糖激酶基因(xks1)与转酮酶基因(tkl1)进行拼接后克隆到表达载体pAUR123中,获得融合表达载体pAUR123-SK。通过乙酸锂电击转化的方法分别将pAUR123-X12A与pAUR123-SK转入S.cerevisiae INVSc1中,得到S.cerevisiae INVSc1-X12A与S.cerevisiae INVSc1-SK重组子。对构建的重组子进行表达后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和酶活性分析,目的基因获得表达。初步结果显示两株重组菌构建成功。
- 陆亮叶凯刘敏于孟斌陈高云涂振东
- 关键词：木糖酿酒酵母
- 拟南芥木糖异构酶在酿酒酵母的成功表达(英文)被引量：1
- 2012年
- 酿酒酵母是工业上乙醇发酵的首选目标微生物,但是不能代谢木糖等五碳糖。通过导入外源木糖异构酶基因,可以赋予酵母利用木糖的能力。但是长期的研究发现很难将细菌木糖异构酶转入酿酒酵母得到活性表达。研究成功的在酿酒酵母里表达了拟南芥木糖异构酶,其活性可达到0.51 U/(mg protein)。拟南芥木糖异构酶与成功在酵母里表达的真菌木糖异构酶相比更加耐受木糖醇抑制(Ki=13.21 mM)。本研究为改善酵母利用木糖提供了新的可用的木糖异构酶。
- 顿宝庆王智叶凯张保明李桂英路明
- 关键词：木糖异构酶拟南芥酿酒酵母木糖发酵
- 共表达xyl1、xyl2和tal1重组酿酒酵母的构建及木糖发酵研究被引量：1
- 2012年
- 将来自树干毕赤酵母的木糖还原酶基因(xyl1)、木糖醇脱氢酶基因(xyl2)和酿酒酵母自身的木糖转醛酶基因(tal1),通过串联共表达的方法构建到表达载体pAUR123上,构建了1株重组酿酒酵母。该菌在打通木糖向木酮糖转化通路基础上,超表达木糖转醛酶。该菌以木糖为唯一碳源进行限氧发酵,能初步利用木糖。结果表明,木糖的利用率为77.4%,但乙醇产率仅为0.04 mg/mL。同时探讨了3种酶共表达对酿酒酵母发酵木糖生成乙醇的影响,发现3种酶对木糖的利用起关键性的作用,其过量表达导致木糖醇大量积累,乙醇得率降低。
- 叶凯陆亮刘敏于孟斌陈高云涂振东
- 关键词：木糖还原酶木糖醇脱氢酶酿酒酵母
- 多基因串联发酵木糖产乙醇重组菌株构建初探
- 2013年
- 【目的】解决酿酒酵母不能发酵或利用木糖的问题,以期选育出高效转化秸秆生产乙醇的菌株。【方法】将来自近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)的木糖还原酶基因(xyl1),热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖醇脱氢酶基因(xyl2),树干毕赤酵母(Pichia stipitis)的木酮糖激酶基因(xks1),以及酿酒酵母内源的转醛酶基因(tal1)和转酮酶基因(tkl1),通过串联共表达的方法构建到表达载体pAUR123上,构建了一株重组酿酒酵母。【结果】经过酶活性分析和Western blot蛋白免疫实验,证明转化子pAUR123-XL成功导入酿酒酵母并得到表达。以木糖为唯一碳源进行限氧发酵,能稳定利用木糖,木糖发酵结果表明:木糖的利用率为79.5%,乙醇产率为31%。【结论】构建的重组菌株能较好的利用木糖,为进一步的乙醇发酵提供了依据。
- 陆亮刘敏叶凯茆军于孟斌陈高云涂振东
- 关键词：木糖还原酶木糖醇脱氢酶木酮糖激酶
