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烟草NtLS基因RNA干扰表达载体的构建及遗传转化被引量：7: 2011年; 腋芽的形成涉及多个调控基因,其中关键基因编码的蛋白属于植物特有的GRAS蛋白家族,它的突变或功能缺失将影响腋生分生组织的形成。笔者利用RACE技术克隆了烟草NtLS基因(GenBank登录号EU935581),NtLS与调控植物腋生分生组织形成的基因LS/LAS/MOC1序列高度相似。本研究从该基因上选取干扰片段,构建了含有反向重复序列的RNAi干扰表达载体,并通过农杆菌侵染的方法转染烟草W38,以期为NtLS基因的功能研究奠定基础。; 王卫锋太帅帅王鲁刘贯山李凤霞高晓明孙玉合; 关键词：烟草 RNA干扰

茄子microRNAs与其靶基因的生物信息学预测被引量：6: 2011年; microRNAs(miRNAs)是一类在真核生物中发现的长度为21 nt左右、非编码、内源性的单链小分子RNA,通过与靶基因的互补发挥转录后水平的负调控作用。目前,已在许多物种中报道了miRNAs的存在,然而还未见关于茄子miRNAs的报道。根据miRNAs在植物中的高度保守性及其前体的二级结构特征,文章通过同源预测的方法,将已知植物的miRNAs与茄子EST数据库比对,经过一系列的筛选,最终预测到12个家族的16条茄子miRNAs,其中包括3个miRNA家族的正义/反义miRNAs,而miR390和miR399家族的正义/反义miRNAs属于第一次发现。文章还通过在线软件psRNATarget预测到15条茄子miRNAs的71个靶基因,这些靶基因主要编码与茄子生长发育、新陈代谢以及胁迫响应等过程相关的蛋白。; 张磊晁江涛崔萌萌陈雅琼宗鹏孙玉合; 关键词：茄子靶基因生物信息学 EST

烟草CONSTANS同源基因的克隆与分析被引量：5: 2013年; 日照长度影响植物的生长发育,在拟南芥中CONSTANS是植物光周期开花途径中的关键基因。利用同源序列法结合RACE技术从短日照烟草品种Kutsaga.Mammoth10中分离出了开花时间相关的CO（CONSTANS）同源基因,并命名为NtCO1（基因登录号JN022535.1）。经序列分析,NtCO1全长1493 bp,具有完整的开放阅读框（ORF,81~1292 bp）,编码403个氨基酸;具有CO蛋白典型的结构域;氨基末端有两个B-box结构,羧基末端有CCT保守结构域。氨基酸同源性比对发现,NtCO1与茄科CO同源蛋白一致性最高,同马铃薯CO序列一致性达到86.5%;与拟南芥CO蛋白和水稻Hd1氨基酸序列一致性也分别达到50%和43.7%。基因表达分析表明,NtCO1在叶片中优势表达,茎中次之,根中最弱。; 陆莹刘艳华任民牟建民张兴伟孙玉合王志德; 关键词：烟草克隆

普通烟草鸟氨酸转氨酶基因Ntδ-OAT的克隆与表达分析被引量：3: 2011年; 鸟氨酸转氨酶是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。本研究根据其已知保守序列设计兼并引物,从普通烟草品种中烟14中克隆到一条425bp的中间片段,应用RACE方法设计特异性引物扩增得到5′末端和3′末端cDNA序列,经BLAST验证,首次从普通烟草中克隆到了鸟氨酸转氨酶基因,命名为Ntδ-OAT,其GenBank登录号为GU144571。该基因cDNA全长为1781bp,共编码477个氨基酸。系统进化树分析显示,Ntδ-OAT基因的进化符合传统的生物学分类,主要功能域在生物进化中保守性较高。Real-time PCR分析表明,Ntδ-OAT基因受干旱、高盐、低温、ABA等多种胁迫处理的诱导表达,可能参与普通烟草体内抗渗透胁迫过程。; 焦蓉刘贯山刘好宝王树林侯娜王全贞靳义荣刘朝科冯祥国胡晓明; 关键词：普通烟草克隆

烟草叶片全长cDNA文库构建及EST序列分析被引量：5: 2012年; 【目的】构建烟草叶片全长cDNA文库并测序,发掘与烟叶发育、代谢和抗逆相关的基因,为进一步研究功能基因奠定基础。【方法】以烟草苗期叶片为试验材料,利用改进的Cap-trapper法构建烟草叶片全长cDNA文库。利用测序技术获得大量的EST序列,采用生物信息分析手段,对所测EST进行拼接和功能注释。【结果】构建了烟草叶片的全长cDNA文库,该文库滴度为1.2×106pfu.mL-1,平均插入片段在1.4 kb左右。利用该文库测序了5 280个克隆,获得5 233条高质量表达序列标签(EST),序列拼接出3 922个单一基因;同源比对分析表明,89.7%的基因与已知功能基因具有较高的同源性,这些基因涉及细胞生长、信号转导、翻译合成、抗逆反应和能量代谢等功能;并详细鉴定了部分与烟碱合成和抗病相关的基因。【结论】通过Cap-trapper法成功构建了高质量的烟草幼苗叶片全长cDNA文库;大规模EST测序分析挖掘到大量与烟草幼苗叶片发育、抗逆、抗病、烟碱代谢相关的侯选基因。; 龚达平解敏敏孙玉合; 关键词：烟草全长CDNA文库表达序列标签功能注释

绒毛状烟草BAC文库的构建被引量：4: 2012年; 绒毛状烟草是重要的野生种烟草之一。本研究以CopyControlTMpCClBACTM（HindⅢCloning-Ready）Vector为载体，构建了绒毛状烟草的BAC文库。分析结果表明，BAC文库DNA插入片段为50-200kb，平均110kb，空载率〈2％。随机挑选15个克隆进行稳定性继代试验，100代后插入片段仍然稳定存在。该绒毛状烟草BAC文库的建成，为进一步克隆重要功能基因提供了必备的物质平台。; 高晓明陈艳玲刘贯山李凤霞王卫峰任媛媛孙玉合; 关键词：BAC文库烟草

烟草抗病毒相关R基因RNAi表达载体的构建被引量：1: 2012年; RNA干扰介导的基因沉默是植物抗病育种和大规模分析功能基因快速而有效的方法。构建烟草抗病毒病相关R基因的RNAi表达载体并导入烟草可获得抗病毒病烟草材料,并为大规模分析鉴定烟草功能基因提供新方法。本研究利用绒毛状烟草基因组测序获得的R基因序列设计引物,通过PCR技术扩增出带有特异性结合位点attB的R基因部分序列。采用GATEWAY方法将目的基因的干扰片段插入到表达载体pH 7 GWIWG2(I),成功构建了烟草抗病毒病相关R基因的RNAi表达载体。; 杨帆李凤霞孙玉合王鲁杨爱国苏振刚李元元赵百英刘慧王元英; 关键词：烟草病毒病 RNAI GATEWAY技术

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国家烟草专卖局基金(110200701021)