广东省科技厅科技计划项目(2009A020101004)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关作者：黄佳佳沈玉栋刘细霞王弘罗翠红更多>>
- 相关机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：广东省科技厅科技计划项目广东省教育部产学研结合项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库的构建
- 2010年
- 目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(G1y4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对。结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,VH序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上。结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考。
- 罗翠红王弘刘细霞沈玉栋孙远明黄佳佳张宏斌
- 关键词：单链抗体噬菌体展示
