国家自然科学基金(30671972)
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
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- RNA干扰技术在器官移植免疫中的研究进展
- 2008年
- 人们早就发现随着细胞内转入基因拷贝数目的增加，其表达水平随之降低，同时内源性同源基因也被转入的基因所抑制。目前已阐明这种抑制的主要机制就是RNA干扰（RNA interference，RNAi），现在认为RNAi是一种原始的细胞免疫机制和基因表达的调控机制，对于维持生物体基因组稳定性非常重要。RNAi是由双链RNA（double—stranded RNA，dsRNA）介导的转录后和翻译水平的基因沉默机制，这种dsRNA诱发的选择性降解靶基因tuRNA作用，抑制基因表达效应非常迅速，可在数小时内降低其表达，而在24h内完全抑制其表达。RNAi很像细胞生物基因组用于抵抗、清除“不想要的”外源遗传元件，维持基因组的稳定性保护机制。
- 薛利军尹路
- 关键词：RNA干扰技术基因组稳定性基因拷贝数细胞免疫机制RNAI
- 利用RNA干扰诱导产生的CD8^＋CD28^-抑制性T淋巴细胞的免疫学特性被引量：2
- 2009年
- 目的探讨通过RNA干扰技术诱导产生的CD8^＋CD28^-抑制性T淋巴细胞（Ts细胞）的免疫学特性。方法取SD大鼠骨髓，培养分离树突状细胞（DC），设计、合成主要组织相容性复合物（MHC）I类小片段干扰RNA（siRNA），以MHCIsiRNA转染DC。先以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液刺激转染MHCIsiRNA的IX2，然后将DC与从SD大鼠脾脏分离得到的CD8^＋T淋巴细胞共同培养，通过磁珠法分离出Ts细胞。分别在由SD大鼠脾脏淋巴细胞（反应细胞）和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞（刺激细胞）组成的混合淋巴细胞培养体系中加入数量不等的Ts细胞，检测反应细胞增殖情况；分别以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞和卵白蛋白（OVA）刺激SD大鼠脾脏淋巴细胞，然后再按不同比例加入Ts细胞，检测各组脾脏淋巴细胞的增殖情况；在由SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入可溶性重组白细胞介素2（rrIL-2），观察IL-2对Ts细胞功能的影响；采用实时定量聚合酶链反应（PCR）测定Ts细胞中转化生长因子／3（TGF-β）和7干扰素（IFN-γ）mRNA的表达，流式细胞仪和实时PCR检测Ts细胞上CD25分子的表达。结果Ts细胞对SD大鼠脾脏淋巴细胞和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞之间的混合淋巴细胞反应（MLR）具有抑制作用，但对于SD大鼠脾脏淋巴细胞和OVA之间的MLR则无抑制作用。在SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入rrIL-2后，SD大鼠脾脏细胞的增殖并无明显增加（P〉0．05）。与CD8^＋ CD28^＋T淋巴细胞和CD8^＋T淋巴细胞比较，Ts细胞的TGF-β和IFN-γmRNA的表达量明显升高（P〈0．01，P〈0．05），而CD25的表达量明显降低（P〈0．05）。结论采用经MHCIsiRNA干扰的DC能够诱导CD8^＋T淋巴细胞产生CD8^＋CD28^-Ts细胞；Ts�
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- 关键词：RNA干扰免疫抑制法
- 大鼠原位小肠移植手术技巧及常见并发症被引量：2
- 2009年
- 目的探讨大鼠原位小肠移植术的手术技巧及常见并发症的处理和预防。方法用改进的三袖套法对120只大鼠进行原位小肠移植术，总结手术技巧，分析常见并发症的发生原因及相应的处理和预防措施。结果术后有99只大鼠（82．5％）生存超过1周。死亡21只。受体术中出血平均少于1ml。导致大鼠死亡的原因为术中吻合121大出血（5只，4．2％）、门静脉血栓形成（2只，1．7％）、门静脉大量空气栓塞（1只，0．8％）、动脉血栓形成（4只，3．3％）、吸人性肺炎（2只，1．7％）、感染（4只，3．3％）、麻醉意外（2只，1．7％）和肠扭转（1只，0．8％）。结论娴熟细致的外科操作、熟悉各种并发症的原因并采取相应的措施可有效提高手术成功率。
- 薛利军尹路周慧江张贵阳林谋斌倪俊声金志明彭承宏李宏为
- 关键词：外科手术并发症
- RNAi对大鼠T淋巴细胞CD28和OX40基因表达的联合抑制作用被引量：1
- 2009年
- 目的通过RNAi技术干扰T细胞CD28、CD134基因表达后，诱导获得抑制性T细胞（Ts）；探讨Ts免疫学特性。方法设计针对目标基因的siRNA，转染大鼠T淋巴细胞，FCM检测CD28、CD134水平，混合淋巴细胞反应（MLR）检测转染后的T淋巴细胞对异体淋巴细胞的增殖能力的影响，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞因子水平。结果siRNA转染大鼠T淋巴细胞后，抑制CD28、CD134分子的表达，siRNA转染24h后，siRNA组CD28、CD134表达受到抑制[转染后及转染前表达分别为（22．35±4．37）％及（34．76±3．51）％（P〈0．05）]，T淋巴细胞分泌细胞因子IL-10水平增高，转染组及未转染组表达分别为（77．15±12．60）ng／L及（37．56±5．93）ng／L（P〈0．01）。而转染组及未转染组的IL-2表达分别为（2．79±0．51）及（4．35±1．11）ng／L（P〈0．05）；干扰素（IFN）-γ表达分别为（277．15±14．8）、（682．7±53．5）ng／L（P〈0．05）。结论siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28、CD134基因表达，抑制了IL-2、IFN-γ的表达，提高了IL-10细胞因子表达水平，从而产生了免疫耐受效应。Ts细胞具有抗原特异性，而且在外源性rrIL-2存在时，不能逆转Ts细胞的功能。
- 薛利军尹路韩意金小顺林谋斌何永刚
- 关键词：免疫耐受T淋巴细胞基因表达
- RNA干扰抑制大鼠T淋巴细胞CD28基因表达的实验研究
- 2009年
- 目的:探讨RNA干扰(RNAi)后对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因的表达及其对细胞功能的影响。方法:设计针对目标基因的小干扰RNA(siRNA),转染大鼠T淋巴细胞。以FCAS检测CD28水平,MTT检测转染后T淋巴细胞对异体淋巴细胞增殖能力的影响,Realtime-PCR及ELISA法检测细胞因子水平。结果:siRNA转染大鼠T淋巴细胞后可抑制CD28的表达,T细胞增殖能力、IL-2、IFN-γ水平明显低于空白对照组(P<0.05)。结论:siRNA可特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28的表达,降低大鼠T细胞的增殖能力,抑制IL-2、IFN-γ细胞因子的基因水平表达和分泌水平,从而产生免疫耐受效应,为器官移植免疫研究提供实验依据。
- 薛利军尹路陈春球张贵阳万方军林谋斌倪俊声金志明施敏敏
- 关键词：免疫耐受T淋巴细胞RNA干扰基因表达
- RNA干扰树突细胞主要组织相容性复合物1表达后诱导抑制性T细胞对小肠移植耐受的影响
- 2009年
- 目的探讨RNA干扰树突细胞（Dc）组织相容性复合物1（MHC-1）表达后获得的CD8＋CD28-抑制性T细胞（Ts）对小肠移植免疫耐受的的影响。方法通过siRNA干扰DC MHC—I表达后，诱导获得CD8^＋CD28^-Ts。建立由Wistar大鼠移植到SD大鼠的小肠移植模型36例，随机分为A组（转染实验组）、B组（未转染组，注射普通T细胞）和C组（移植对照组，注射生理盐水）。术后14d，每组各随机挑选6例，取移植大鼠小肠和血液标本行移植小肠组织病理学检查．并检测移植大鼠血清TGF-β、IFN-γ水平及回肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性，观察移植大鼠的存活时间。结果术后第14天，A组移植大鼠血清中TGF—β和IFN-γ表达水平高于B、C组（P〈0．05）。A组大鼠肠黏膜Na^＋-K^＋-ATP酶活性为（6．3±1．0）kU／g，明显高于B组的（3．6±0．9）kU／g和C组的（2．9±1．3）kU／g（P〈0．05）。A组移植小肠病理Parks评分分级明显低于B组和C组（P〈0．05）。A、B和C组移植后大鼠中位生存时间分别为32．0、17．5和21．0d，A组存活时间明显优于B组和C组（P〈0．05）。结论将RNA干扰DCMHC—I表达所获得的CD8^＋CD28^-Ts过继小肠移植大鼠．可以减轻移植大鼠的损伤程度．抑制免疫排斥反应．
- 薛利军尹路陈春球张贵阳万方军金志明倪俊声
- 关键词：树突细胞RNA干扰主要组织相容性复合物小肠移植
- 硝普钠加入灌注液对移植小肠黏膜结构与功能的影响
- 2009年
- 目的探讨硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)加入灌注液对移植小肠黏膜结构和功能的早期影响。方法以单袖套法构建SD大鼠节段小肠移植模型为研究对象,将实验动物分成SNP灌注组(实验组)与普通灌注组(对照组),动态检测实验组与对照组植入肠黏膜Na+-K+-ATP酶变化情况、层粘连蛋白在cDNA、mRNA及蛋白等不同水平的表达情况,观察1周内植入肠存活情况与分泌肠液能力,初步分析SNP灌注对植入小肠黏膜的早期影响。结果实验组较对照组造口坏死及不良发生率低(P<0.05)、移植肠及受体生存率高(P<0.05)、黏膜组织Na+-K+-ATP酶含量高(P<0.05),层粘连蛋白在各个水平的表达均有提高(P<0.05)。结论利用SNP进行供肠灌注,能够保护大鼠植入肠黏膜屏障的结构和功能完整。
- 陈桂明陈春球张明军施敏敏尹路
- 关键词：小肠移植黏膜屏障硝普钠
- 硝普钠灌注对移植小肠粘膜细胞凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨外源性一氧化氮(nitric oxide,NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对移植小肠粘膜细胞凋亡的影响。方法:64只220～300g雄性SD大鼠随机分成3组:A1组(n=8),仅行剖腹关腹手术;A2组(n=12):12对大鼠随机作为供受体行同种异体节段小肠移植,无SNP干预;A3组(n=16):16对大鼠随机作为供受体行同种异体节段小肠移植,SNP加入灌注液进行供肠灌注。采用前述3组动物模型再灌注5小时肠造口标本,TUNEL法检测小肠蜡块标本的细胞凋亡情况。结果:与A1组(3.86±4.74%)相比,A2(22.44±10.94%)、A3组(17.12±8.44%)小肠粘膜的细胞凋亡指数均有显著增高(P<0.05),A3组较A2组细胞凋亡指数显著降低(P<0.05)。结论:小肠移植导致小肠粘膜细胞凋亡增加,外源性NO供体SNP灌注能够显著降低植入小肠的细胞凋亡,从而可能减弱粘膜屏障的损伤。
- 陈桂明尹路周光文施敏敏颜召文
- 关键词：小肠移植粘膜屏障细胞凋亡硝普钠
