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人类GAD67基因转染骨髓基质源性神经干细胞及初步检测被引量：1: 2007年; 目的利用转基因技术将人类谷氨酸脱羧酶（GAD）67基因转染骨髓基质源性神经干细胞仍MSCs-D-NSCs），获得GAD67修饰的成体专能干细胞。方法以PCR、双酶切及测序鉴定pEGFP-C2-GAD67和pcDNA3.1-GAD67重组子；利用密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs并促其向NSCs方向分化，将编码人类GAD67基因的真核表达质粒pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3．1-GAD67分别转染BMSCs-D-NSCs，荧光显微镜下观察并用流式细胞仪检测转染效率。结果pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3.1-GAD6，均可扩增出约1800bp目的条带，经双酶切和基因测序证实。荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光细胞，两种载体转染效率分别为39.3％和40.5％。结论pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3.1-GAD67真核表达载体重组正确，利用脂质体介导人类GAD6，基因能有效转染BMSCs-D-NSCs，为进一步观察其GAD67基因和蛋白的表达提供了前提条件。; 马宏伟徐如祥姜晓丹刘智良张雪陈镇洲郭爱林苏健王娆张冉黄伟黄永安; 关键词：转染骨髓基质细胞神经干细胞

人类GAD_(67)基因扩增及pEGFP-C2-GAD_(67)真核表达载体的构建被引量：1: 2006年; 目的扩增人类谷氨酸脱羧酶(GAD)67基因,并构建pEGFP-C2-GAD67真核表达载体。方法应用基因重组技术,采用反转录PCR方法对来自人类脑组织cDNA中编码GAD67的基因片段进行扩增,插入PUC57克隆载体,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切出GAD67基因片段,再克隆入真核表达载体pEGFP-C2后构建pEGFP-C2-GAD67重组载体,经PCR扩增、酶切后测序鉴定。结果人类GAD67基因扩增产物大小为1785bp,编码594个氨基酸残基。重组真核表达载体经酶切鉴定表明为正确重组子,PCR正确扩增出目的条带。与GenBank中人类GAD67基因序列比较,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别达99.78%和99.66%。结论人类GAD67基因克隆后,可成功构建真核表达载体pEGFP-C2-GAD67,为进一步该基因转染神经干细胞移植治疗癫痫提供了实验基础。; 刘智良马宏伟姚志彬徐如祥张世忠王娆; 关键词：克隆真核表达质粒

功能性磁共振和皮质脑电图在伴继发性癫脑肿瘤手术中的应用(附13例分析)被引量：1: 2007年; 目的探讨术前功能磁共振成像(fMRI)和术中皮质脑电图(ECoG)在伴继发性癫疒间脑肿瘤手术中的应用价值。方法回顾性分析13例脑运动皮质区附近肿瘤病人的临床资料。术前通过fMRI了解相应脑功能区皮质和白质纤维束的形态和分布;术中在切除肿瘤前后行ECoG检测,确定致疒间灶的位置,指导肿瘤及致疒间灶的切除。结果手运动功能区受肿瘤推挤而出现功能转移或重组9例,行肿瘤全切除;功能区局部重叠2例,行肿瘤次全切除;大部分重叠2例,行肿瘤部分切除。ECoG确定的致疒间灶距肿瘤2 cm以内9例,3～5 cm 2例,与肿瘤重叠2例。术后出现短暂性失语1例,一过性偏瘫2例。结论fMRI能准确显示运动皮质中枢位置,对脑肿瘤术前手术方案制定和手术时减少重要功能区损伤具有重要意义。ECoG确定致疒间灶大多距肿瘤2 cm以内。; 王国福王辉刘智良卢瑞梁; 关键词：磁共振成像脑肿瘤

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广东省自然科学基金(06301027)