江苏省自然科学基金(BK2004405)
- 作品数：23 被引量：80H指数：4
- 相关作者：王胜军许化溪马洁邵启祥毛朝明更多>>
- 相关机构：江苏大学江苏大学附属医院中国人民解放军更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 皮肌炎患者外周血CD4^+Th1/Th2细胞因子及转录因子的表达被引量：1
- 2008年
- 目的探讨Thl/Th2细胞分化趋势在活动性皮肌炎(DM)发病机制中的作用。方法分别采集15例活动性DM患者(DM组)和15例健康人(对照组)外周血,采用免疫磁珠分离获得CD4+T细胞(Th细胞),逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测两组Thl、Th2转录因子T-bet、GATA3及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的表达强度。分析T-bet和IFN-γ、GATA3和IL-4的相关性;IFN-γ、IL-4表达与血清肌酸激酶(CK)含量的相关性。结果DM组IFN-γ、GATA3及IL-4表达均明显高于对照组(P<0·05);DM组IL-4与GATA3、血清CK呈正相关(P<0·05)。结论DM患者Thl/Th2无明显极化现象,Thl/Th2细胞因子表达均增强。
- 吴蔚王胜军李遇梅李雅贞许化溪
- 关键词：皮肌炎THL/TH2转录因子
- 人T-bet基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2006年
- 目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆;应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。结果:扩增得到的T-bet基因cDNA全长1 670 bp,包括编码区1 607 bp,编码530个氨基酸残基,与Gen-bank中发表的序列完全一致。结论:获得了人T-bet基因的克隆,为进一步研究其生物学功能构建了基础平台,为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。
- 杨敏王锁英王胜军马洁毛朝明邱谷风许小朋邵启祥许化溪
- 关键词：T-BET基因CDNA克隆RT-PCR
- 人T-bet基因的表达、纯化及其免疫原性分析
- 2007年
- 目的:利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人T-bet基因全长序列,并对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体。方法:利用PCR技术从克隆载体pGEM-T/T-bet获得人T-bet的全长编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pT-bet;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌JM109,测序鉴定后转化M15,经IPTG 37℃诱导4 h后,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色判断以包涵体形式存在的带有6×His标签的融合蛋白(表达产物),用Ni2+-IMAC层析柱对融合蛋白进行纯化;将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备人T-bet的多克隆抗体。结果:成功表达和纯化了人T-bet,并制备了多克隆抗体,ELISA和Western blot结果显示了血清抗体的高效价(1∶100 000)和高度特异性。结论:成功构建了原核表达载体pT-bet,并在工程菌M15中获得大量表达,经纯化后获得高纯度的人T-bet蛋白,制备了效价和特异性良好的多克隆抗体,为进一步研究T-bet的生物学功能奠定了的基础。
- 杨敏王胜军王锁英许小朋邱谷风苏兆亮邵启祥黄新祥许化溪
- 关键词：原核表达蛋白纯化免疫原性
- PTD-Foxp3融合蛋白的表达、纯化及其生物学功能初步研究被引量：6
- 2007年
- 目的:构建带HIV-1 TAT转录因子的穿膜序列(Protein transduction domain,PTD)的pET28a-PTD-Foxp3原核表达载体,表达纯化PTD-Foxp3融合蛋白,并研究其生物学作用。方法:利用基因重组技术构建pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,经Ni2+分离柱纯化pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白。流式细胞术检测融合蛋白穿越细胞膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力,并通过混合淋巴细胞反应初步分析融合蛋白抑制T细胞活化增殖的生物学作用。结果:成功地构建了pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白表达载体,表达并纯化了pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白。通过流式细胞术分析证实pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白能有效地进入细胞内;同时经混合淋巴细胞反应证明该融合蛋白能明显抑制T细胞的活化增殖能力。结论:成功表达具有生物学活性的PTD-Foxp3融合蛋白,为进一步研究PTD-Foxp3融合蛋白免疫抑制功能和构建表达人PTD-Foxp3融合蛋白,最终应用于临床疾病的治疗奠定了基础。
- 黄莉莉邵启祥张慧许逊宗杨勇陈述申卫红田小雷彭鑫王胜军许化溪
- 关键词：免疫抑制
- 皮肌炎患者外周血CD4^+ T细胞中TGF-β1 mRNA表达及意义被引量：4
- 2008年
- 目的:检测活动期皮肌炎(dermatomyositis,DM)患者外周血CD4+T细胞中转化生长因子β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)以及血清磷酸肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1在皮肌炎发病机制中的作用。方法:收集12例活动期皮肌炎患者和12例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离法获得CD4+T细胞,通过RT-PCR方法检测出各组TGF-β1表达水平。观察CD4+T细胞中TGF-β1表达与CK含量的相关性。结果:活动期皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1相对表达量为0.751±0.107,显著高于健康对照0.438±0.170?P<0.05?。CD4+T细胞TGF-β1表达量与CK含量呈中度正相关?r=0.67,P<0.05?。结论:活动性皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1 mRNA表达显著升高,可能与皮肌炎疾病发生有关。
- 吴蔚王胜军李遇梅李雅贞许化溪
- 关键词：皮肌炎CD4^+T细胞TGF-Β1
- CD4^+CD25^+调节性T细胞抑制小鼠自身免疫性甲状腺炎的发生被引量：9
- 2005年
- 目的 :研究CD4 + CD2 5 + Treg细胞对诱导小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎 (EAT)的影响。方法 :磁性细胞分离器 (MACS)分离CD4 + CD2 5 + T细胞 ,通过体外细胞增殖试验和IFN γ的测定研究CD4 + CD2 5 + T细胞对CD4 + CD2 5 - T细胞的免疫抑制作用 ,同时通过过继转移试验研究CD4 + CD2 5 + T细胞抑制小鼠EAT的发生。结果 :MACS分离的CD4 + CD2 5 + T细胞纯度可达到 85 %～ 94 % ,特异性表达FoxP3基因 ,体外能明显抑制效应性T细胞的增殖和IFN γ的产生 ;将CD4 + CD2 5 + T细胞与病理性CD2 5 - T细胞共同注射正常小鼠 ,可抑制病理性T细胞诱导EAT的发生。结论 :CD4 + CD2 5 +
- 王胜军许化溪王永忠胡嘉波马斌
- 关键词：CD4^+CD25^+T细胞实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠
- 重组FoxP3腺相关病毒转染小鼠CD4^+CD25^-T细胞的实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的:研究FoxP3(ForkheadBoxP3)基因在小鼠T细胞的表达情况,以及重组FoxP3腺相关病毒(adenoassociatedvirus,AAV)对小鼠CD4+CD25-T细胞功能的影响。方法:采用实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞FoxP3mRNA表达情况,利用基因重组技术构建FoxP3腺相关病毒载体,体外转染CD4+CD25-T细胞,通过细胞增殖试验观察转染CD4+CD25-T细胞功能变化。结果:CD4+CD25+T细胞较CD4+CD25-T相比高水平表达FoxP3基因mRNA,重组FoxP3腺相关病毒转染后的CD4+CD25-T细胞对CD3单抗的刺激呈低反应性,并且能抑制新鲜分离CD4+CD25-T细胞的增殖。结论:FoxP3基因转染的CD4+CD25-T细胞在体外具有抑制T细胞活化增殖的功能。
- 王胜军许化溪钱晖邵启祥马斌杨胜利
- 关键词：FOXP3T细胞腺相关病毒免疫调节
- 人AITRL基因克隆和序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆人AITRL基因cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从人脐静脉内皮细胞株中获得AITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定。结果:扩增得到的AITRL基因cDNA为534 bp,编码177个氨基酸残基,与GenBank中公布的序列完全一致。结论:获得人AITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了良好基础。
- 毛朝明王胜军蒋茜马洁杨敏仝佳许小朋邱谷风唐莉邵启祥许化溪
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR人脐静脉内皮细胞
- mGITRL真核表达质粒的构建及其在Lewis细胞中的表达被引量：3
- 2008年
- 目的:构建含小鼠GITRL基因的真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,体外转染小鼠肺癌细胞株Lewis细胞。方法:利用PCR方法扩增mGITRL基因,克隆至pIRES2-eGFP载体,选择阳性克隆并进行序列测定。以电穿孔法转染Lewis细胞,通过G418筛选,获得稳定表达细胞株。结果:构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,基因测序与GenBank中发表的序列完全一致,体外转染Lewis细胞,经G418筛选,体外传代30代以上,RT-PCR及流式细胞仪检测该细胞株稳定表达mGITRL。结论:成功构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,并在小鼠Lewis细胞中稳定表达,为进一步研究GITRL的生物学功能提供研究基础。
- 胡正军王胜军朱燕萍鲍俊峰仝佳马洁成军孙长贵许化溪
- 关键词：细胞转染肿瘤
- 皮肌炎患者外周血CD4^+ T细胞中TGF-β_1、IL-10 mRNA的表达及临床意义被引量：4
- 2009年
- 目的:检测活动期皮肌炎(DM)患者外周血CD4+T细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)的表达以及血清肌酸激酶(CK)含量。初步探讨CD4+T细胞TGF-β1、IL-10在DM发病机制中的作用。方法:收集15例活动期DM患者和15例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离获得CD4+T细胞,通过逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测出各组TGF-β1、IL-10表达水平。观察CD4+T细胞中TGF-β1、IL-10表达与血清CK含量的相关性。结果:活动期DM患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1和IL-10表达量显著高于健康对照,血清CK含量与CD4+T细胞TGF-β1表达量呈中度正相关。结论:活动期DM患者外周血CD4+T细胞中TGF-β1和IL-10 mRNA表达显著升高,可能与DM疾病发生有关。
- 吴蔚王胜军李遇梅李雅贞
