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重组蓖麻毒素A链的原核表达和单克隆抗体的制备、鉴定及应用被引量：2: 2007年; 目的实现重组蓖麻毒素A链（rRTA）的高效表达,获得rRTA的单克隆抗体,建立基于单抗的蓖麻毒素检测方法.方法用计算机辅助设计的RNA二级结构预测和偏性密码子等手段设计引物用PCR将rRTA基因克隆至载体pE132a（＋）用双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定 IFTG诱导rRTA原核表达载体pET32a（＋）/rRA/BL21,用镍离子亲和层析纯化,ELISA及Western blot鉴定rRTA蛋白 rRTA免疫Balb/c小鼠,建立杂交瘤细胞株,获得抗rRTA的单克隆抗体,用Westem blot鉴定.结果构建了rRTA原核表达载体pET32a（＋）/rRA/BL21,实现了rRTA在大肠杆菌BL21中的高效可溶性表达,获得了高纯度约10～20 mg/L rRTA 获得抗rRTA的单克隆抗体建立的ricin EIJSA检测方法检出ricin的最低浓度为3.125 ng/mL,目视比色对蓖麻毒素的最低检出浓度为6.25 ng/mL.结论本研究表达的rRTA及其单克隆抗体和基于单抗的ricin检测方法,将在肿瘤生物治疗、ricin生物恐怖袭击的侦检、治疗和预防中发挥重要作用.; 郭建巍王顺涛郭黎明冯健男马骢沈倍奋; 关键词：蓖麻毒素蓖麻毒素A链融合蛋白

蓖麻毒素拮抗剂及疫苗研究概况被引量：2: 2006年; 自“911”以后,蓖麻毒素已被列为最有可能被用作恐怖袭击的生物战剂,作为目前最具危险性和威胁性的生物恐怖病原必须引起我们的高度警觉。研究其拮抗剂及疫苗具有重要的现实意义。从中和性抗体、抗RTA适配体、Ricin的小分子拮抗肽、抗独特型疫苗、重组疫苗、超级疫苗、微球疫苗等多方面对国内外的研究现状进行阐述非常必要。; 郭建巍沈倍奋; 关键词：蓖麻毒素拮抗剂疫苗生物恐怖

蓖麻毒素快速ELISA检测法的建立被引量：7: 2006年; 目的:建立蓖麻毒素快速ELISA检测方法。方法:从8株抗蓖麻毒素的杂交瘤细胞中,筛选亲和力较高的单克隆抗体,用Westernblot和ELISA鉴定、ProteinA纯化、HRP标记,经交叉配伍筛选最佳的抗体组合。结果:建立了蓖麻毒素的快速ELISA检测方法,对蓖麻毒素的最低检出浓度为175ng/L,目视检测最低浓度为625ng/L,整个实验不需仪器可在40min内完成检测。结论:蓖麻毒素快速ELISA检测法为蓖麻毒素生物战剂的快速侦检提供了有效手段。; 郭建巍沈倍奋冯健男孙瑛勋胡美茹于鸣; 关键词：蓖麻毒素单克隆抗体快速ELISA

抗蓖麻毒素A链人源化单域抗体的设计、原核表达及生物活性检测: 2008年; 目的运用计算机辅助蛋白质分子设计的方法设计针对蓖麻毒素A链（RTA）的拮抗肽，实现在大肠杆菌BL21中的可溶性表达，并对其生物学活性进行评价。方法根据RTA的晶体结构、RTA-rRNA相互作用复合物模型，在CVFF（consistent-valence force field）、Amber力场下，对RTA的空间构象进行理论模拟，初步确定其生物活性功能域；然后针对该功能域设计小分子拮抗肽，并借助人抗体重链可变区骨架，在CDR3区对拈抗肽进行展示，用重叠延伸PCR全基因合成人源化的单域抗体并克隆至载体pET-32a（＋）；双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定；IPTG诱导人源化的单域抗体表达，用镍离子亲和层析纯化，竞争ELISA和MTr法分别进行结合和中和活性检测。结果从头搭建并设计合成了人源化的单域抗体，实现了其原核表达，并进行了生物活性检测；建立了基于人源化的单域抗体的RTA和蓖麻毒素检测方法。结论研究结果为新型蓖麻毒素小分子拈抗剂的研制奠定了理论和实验基础。; 郭建巍冯健男王顺涛马骢王珍光蒋学兵沈倍奋; 关键词：蓖麻毒素

抗ricin中和性单抗4C13单链抗体的真核表达及生物活性检测: 2007年; 目的:实现基于中和性单抗4C13单链抗体的真核表达,并对其生物学活性进行评价.方法:用TRIzol提取抗ricin中和性单抗杂交瘤细胞4C13总RNA,扩增其轻、重链可变区基因,登陆GenBank;用Linker(GGGGS)3将VH和VL连接,用重叠延伸PCR克隆入真核表达载体pCDNA3.1,用脂质体转染293T细胞,对瞬时表达产物进行生物学活性检测.结果:中和性单抗杂交瘤细胞4C13轻、重链可变区基因在GenBank中的登录号为DQ389248和DQ389245,ScFv与ricin可特异性结合,培养上清原液和2倍稀释液的抑制率分别为33.7%和29%;ScFv在ricin浓度为0.01～0.005ng/mL时可中和ricin对SP2/0细胞的细胞毒,随着ricin浓度逐渐增大,细胞存活率逐渐减低.结论:研究结果为研制基于中和性单抗的其他ricin拮抗剂奠定了重要的理论和实践基础.; 郭建巍冯健男马骢扬霄鹏沈倍奋; 关键词：RICIN 基因表达单链抗体

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中国博士后科学基金(2004035289)