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国家自然科学基金(81101702)

作品数:2 被引量:0H指数:0
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相关机构:徐州医学院更多>>
发文基金:江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇源性
  • 2篇人源
  • 2篇人源性
  • 2篇人源性抗体
  • 2篇抗体
  • 2篇G250
  • 1篇肾癌
  • 1篇肾癌细胞
  • 1篇肾肿瘤
  • 1篇全长
  • 1篇肿瘤
  • 1篇重组腺病毒
  • 1篇细胞
  • 1篇显像
  • 1篇腺病
  • 1篇腺病毒
  • 1篇免疫
  • 1篇免疫显像
  • 1篇放射免疫
  • 1篇放射免疫显像

机构

  • 2篇徐州医学院

作者

  • 2篇郑骏年
  • 2篇李望
  • 2篇刘俊杰
  • 2篇程乾
  • 2篇方琳

传媒

  • 2篇徐州医学院学...

年份

  • 2篇2013
2 条 记 录,以下是 1-2
排序方式:
表达抗G250人源性抗体增殖缺陷型腺病毒的构建
2013年
目的构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。方法通过重叠延伸PCR、常规PCR方法,分别获得G250重链的可变区和恒定区(GH)eDNA序列及G250轻链(GL)eDNA序列,并克隆至pCLON12-IRES载体上,构建质粒pCLON12-GL-IRES—GH。酶切质粒pCLON12-GL—IRES—GH回收GL—IRES—GH片段,克隆至腺病毒载体pDC315,构建pDC315-GL—IRES—GH(pDC315-G250)。将pDC315-G250与腺病毒包装骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,重组包装表达G250抗体的增殖缺陷型腺病毒AdDC315一G250。纯化病毒表达的G250抗体,免疫印迹实验检测该抗体能否与细胞表面抗原特异性结合。结果PCR及测序结果表明成功构建质粒pCLON12-GL—IRES—GH及腺病毒穿梭质粒pDC315-G250。PCR鉴定表明重组腺病毒AdDC315-G250含有目的基因,病毒包装成功。免疫印迹实验结果显示,纯化的抗体在G250抗原阳性的细胞中能检测到目的条带。结论成功构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。
方琳程乾李望刘俊杰郑骏年
关键词:肾肿瘤G250抗体重组腺病毒
表达抗G250人源性抗体腺病毒对肾癌细胞的影响
2013年
目的检测腺病毒Ad-G250表达的G250全长人源性抗体的生物学活性及其对肾癌细胞的影响。方法扩增纯化腺病毒Ad—G250、Ad—EGFP(对照病毒)。病毒感染LO-2细胞,ELISA法检测细胞培养液中抗体的表达量。收集病毒感染后的细胞上清液进行纯化,Westernblotting检测纯化抗体的相对分子质量及其与细胞表面G250抗原的结合能力。免疫组化法检测Ad—G250表达的抗体是否具有生物学活性。CCK-8法检测Ad—G250对肾癌Ketr-3及ACHN细胞增殖的影响。AnnexinV—PE/7-AAD法检测Ad—G250对‘肾癌Ketr-3及ACHN细胞凋亡的影响。结果病毒Ad—G250感染LO-2细胞后G250抗体的表达量随着感染天数的增加而增加。Westernblotting实验显示Ad—G250能够表达G250抗体的轻链和重链,电泳图上该抗体能使G250抗原阳性的Ketr-3和786-O细胞在相对分子质量58×10’附近出现反应条带,而G250抗原阴性的ACHN和HK-2细胞在相应位置无反应条带。细胞免疫组化实验显示Ketr-3细胞膜被染成棕黄色,而ACHN细胞未见着色。CCK-8实验结果显示,Ad—G250对Ketr-3细胞有抑制作用,而对ACHN细胞的抑制作用不明显;Ad—G250抑制Ketr-3细胞增殖存在浓度及时问依赖性。凋亡实验显示,Ad—G250诱导Ketr-3细胞凋亡作用和ACHN细胞相比差异具有统计学意义,Ad—G250诱导Kert-3凋亡作用和Ad—EGFP相比差异有统计学意义。结论腺病毒Ad—G250成功表达出具有生物学活性的人源性G250抗体,且Ad—G250可抑制表达G250抗原的肾癌细胞增殖,诱导其凋亡。
方琳程乾李望刘俊杰郑骏年
关键词:G250放射免疫显像
共1页<1>
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