目的:筛选大肠埃希菌外排泵tolC蛋白的核酸适配体。方法:重组表达大肠埃希菌外排泵外膜蛋白tolC,利用指数富集的配体系统进化技术(stematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)从单链DNA文库中筛选出一组能够特异性与其结合的核酸适配体。利用FITC荧光素标记技术检测每轮单链DNA文库与靶蛋白的亲和力,直至亲和力的上升趋于饱和,将最后一轮筛选产物克隆测序,并用DNAman软件分析其二级结构。结果:经过12轮筛选,单链DNA文库与靶标蛋白的亲和力趋向稳定,将第12轮筛选产物克隆测序,对获得的23个适配体进行分析。一级结构分析显示23个适配体并无共同的保守序列,但分别有3对和2对适配体序列完全一致。二级结构预测分析表明,茎环结构为适配体主要的结构形式,提示其可能是适配体与tolC蛋白蛋白特异性结合的基础。根据二级结构特点可将23个适配体分为4个家族,其中20号适配体与靶标蛋白亲和力最高。结论:成功利用SELEX技术筛选获得了特异结合tolC的高亲和力的核酸适配体,为大肠埃希菌耐药干预及机制研究奠定了基础。
为探讨TBL(team based learning)教学模式在培养学生创新意识与能力中的作用,将任务驱动式教学模式应用于病原生物学实验教学,并采用问卷调查、理论与实验考核评价教学效果。结果显示通过TBL教学,实验组考试成绩明显优于对照组(P<0.05),学生的团队意识、动手能力、主动意识大大提高,因此,TBL教学模式是一种适合高等医学院校病原生物学实验教学、能有效培养学生的创新意识与能力的模式。
