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大鼠白细胞介素-6重组腺病毒构建及初步鉴定: 2014年; 目的构建携带大鼠白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)基因的重组腺病毒,为研究IL-6在神经损伤中的生物学作用提供技术手段。方法体外扩增大鼠IL-6基因,定向克隆到pAdTrace-TOX腺病毒穿梭质粒中,构建重组pAdTrace-IL-6过表达腺病毒质粒,并与骨架质粒pAd-Easy-1在BJ5183菌中发生同源重组,获得pAd-IL-6腺病毒载体,经PacⅠ酶切后转染HEK293细胞进行包装扩增。通过Ad-IL-6腺病毒感染PC12细胞,Real-time PCR和Western blot检测PC12细胞中IL-6及STAT3的表达。结果 PCR电泳及酶切、测序鉴定均证实目的基因IL-6正确克隆至腺病毒载体中,所构建的腺病毒Ad-IL-6可感染PC12细胞,有效增加IL-6的表达水平,促进IL-6信号通路中关键蛋白磷酸化STAT3的表达。结论成功构建携带IL-6的重组腺病毒载体,该载体可显著增高PC12细胞中IL-6基因和蛋白表达水平,并上调IL-6相关信号通路。; 刘晶晶张赟毕杨龚敏李廷玉陈洁; 关键词：白细胞介素-6 重组腺病毒 PC12细胞 STAT3

抑制骨髓间充质干细胞内源性白介素-6分泌对氧糖剥夺损伤PC12细胞的影响: 2014年; 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)来源的白介素-6(IL-6)对神经细胞损伤的作用。方法构建大鼠沉默IL-6(siIL-6)慢病毒,感染MSCs,嘌呤霉素筛选siIL-6-MSCs稳定细胞株。Real-Time PCR和Western blotting检测细胞IL-6 mRNA和蛋白表达变化,ELISA检测siIL-6-MSCs培养上清液中IL-6分泌水平。将siIL-6-MSCs细胞与氧糖剥夺(OGD)损伤的PC12细胞分离共培养,Annexin V-FITC/PI法检测损伤细胞凋亡,Western blotting检测细胞中IL-6信号通路关键蛋白STAT3以及凋亡相关因子Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果 siIL-6干扰序列正确插入慢病毒质粒中。siIL-6慢病毒感染MSCs后,IL-6 mRNA和蛋白表达及IL-6分泌水平均显著降低。与siIL-6-MSCs分离共培养后,OGD损伤的PC12细胞凋亡增加,STAT3、Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高。结论 MSCs来源的IL-6可能通过STAT3信号通路,调节OGD损伤PC12细胞的抗凋亡作用。; 何慕兰刘晶晶谷燕李廷玉陈洁; 关键词：骨髓间充质干细胞白介素-6 氧糖剥夺 STAT3 抗凋亡

人脐带间充质干细胞内源性SDF-1α促进HIBD大鼠神经功能修复的实验研究被引量：1: 2019年; 该文主要研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)促进缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)神经功能修复的作用及机制。hUC-MSCs移植后,对大鼠进行行为学观察,运用HE(hematoxylin-eosin)染色观察海马组织病理改变, Western blot检测hUC-MSCs与氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)神经干细胞分离共培养体系、HIBD大鼠海马组织中SDF-1α、CXCR4、PI3K/AKT表达;CCK-8测定干细胞增殖情况。结果显示, hUC-MSCs移植后:HIBD大鼠学习记忆功能和海马组织病变改善;海马区Nestin表达和海马齿状回区再生神经干细胞数量升高;海马组织hSDF-1α、SDF-1α、CXCR4、PI3K、AKT及p-AKT表达上调。hUC-MSCs促进OGD损伤神经干细胞增殖及hSDF-1α分泌,上调PI3K和p-AKT表达。该文结果提示, hUC-MSCs移植上调HIBD大鼠海马组织hSDF-1α分泌,激活PI3K/AKT通路,诱导内源性神经干细胞再生,改善HIBD大鼠学习记忆功能。; 杨亭古佳露周小勤谷燕何慕兰李廷玉陈洁; 关键词：人脐带间充质干细胞 SDF-1Α 缺氧缺血性脑损伤 PI3K/AKT信号通路

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国家自然科学基金(81271385)