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北京市农林科学院青年基金(2007020122)

作品数:9 被引量:39H指数:4
相关作者:刘月焕刘永宏林健韩春华赵丽更多>>
相关机构:内蒙古农业大学北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京市畜牧兽医总站更多>>
发文基金:北京市农林科学院青年基金新疆生产建设兵团博士基金更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 9篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 7篇病毒
  • 6篇猪繁殖
  • 6篇猪繁殖与呼吸...
  • 6篇猪繁殖与呼吸...
  • 6篇呼吸综合征
  • 6篇呼吸综合征病...
  • 6篇繁殖
  • 6篇繁殖与呼吸综...
  • 6篇繁殖与呼吸综...
  • 3篇高致病性
  • 3篇高致病性猪繁...
  • 3篇高致病性猪繁...
  • 2篇免疫
  • 1篇毒血症
  • 1篇血症
  • 1篇原核
  • 1篇原核表达
  • 1篇障碍综合征
  • 1篇热症
  • 1篇株高

机构

  • 9篇内蒙古农业大...
  • 9篇北京市农林科...
  • 6篇北京市畜牧兽...
  • 5篇北京市延庆县...
  • 4篇中国农业大学
  • 3篇内蒙古民族大...
  • 3篇北京庄笛浩禾...
  • 2篇塔里木大学

作者

  • 9篇刘永宏
  • 9篇刘月焕
  • 8篇韩春华
  • 8篇林健
  • 7篇王凤龙
  • 7篇赵丽
  • 6篇李栋梁
  • 6篇韦海涛
  • 6篇祝俊杰
  • 5篇王金玲
  • 5篇赵景义
  • 4篇马明
  • 4篇赵振华
  • 3篇张永富
  • 2篇马国文
  • 2篇张婷
  • 2篇杨汉春
  • 2篇布日额
  • 2篇郭鑫
  • 1篇刘俊峰

传媒

  • 2篇安徽农业科学
  • 2篇Agricu...
  • 1篇黑龙江畜牧兽...
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇中国动物检疫
  • 1篇畜牧与兽医
  • 1篇内蒙古农业大...

年份

  • 1篇2013
  • 1篇2011
  • 7篇2009
9 条 记 录,以下是 1-9
排序方式:
猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究被引量:1
2009年
根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%~100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET-ORF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性。
刘永宏刘月焕王凤龙韩春华林健王金玲杨龙峰赵丽张秋雨张永富
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因原核表达
高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒BJBLZ株序列剖析被引量:2
2011年
预测与分析HP-PRRSV BJBLZ株序列特点,为进一步该毒株的研究做准备。利用分子生物学软件及服务器,对HP-PRRSV BJBLZ株全序列及各结构蛋白的生化特性、溶解性和核定位信号等进行了分析,结果显示HP-PRRSV BJBLZ株至少可划分12个非结构蛋白和6个结构蛋白;同源性比较显示GP3和GP5蛋白变异性高,M和N蛋白保守。GP3、GP5和M蛋白糖基化位点与参考株有变化,GP2、GP4和N蛋白糖基化位点与所有参考株一致。服务器预测显示,N蛋白的碱性氨基酸比例明显高于其他蛋白,总平均亲水值明显低于其他蛋白;GP2、GP3和GP4蛋白不稳定,GP5、M和N蛋白稳定。6个结构蛋白预测不溶性概率均占66%以上,GP3不溶性概率最高。可以利用以上一些不同于以往各代表株的特点,为PRRS的诊断和防治进行进一步的研究。
刘永宏赵丽刘俊峰王凤龙刘月焕
关键词:高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征
Location of Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus in Tissues of Natural Cases被引量:15
2009年
[ Objective] The aim of this study was to provide a theoretical basis for the prevention and treatment of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (HP-PRRS). [Method] Antigen location and histopathological observation in natural cases infected by highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) were analyzed by immunohistochemistry and H. E. staining. [Result] The virus antigen mainly existed in epithelial calls, and also a few in mecrophages, lymphocytes and brain nerve cells. [ Conclusion] The cell and tissue tropism of HP-PRRSV strain in natural cases is different from that of previous strains.
刘永宏赵丽韩春华王凤龙刘月焕林健杨汉春郭鑫李栋梁韦海涛祝俊杰赵景义赵振华马明杨龙峰王金玲
关键词:IMMUNOHISTOCHEMISTRY
4株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离和鉴定被引量:1
2013年
为了进一步分析本次猪暴发高发病率和高死亡率疫情的病因,本研究利用病毒分离与鉴定方法,将4份RT-PCR鉴定为单纯PRRSV阳性的组织病料,接种Marc-145细胞,经RT-PCR、IFA和电镜鉴定成功的分离到4株PRRSV,TCID50为10-6.5/0.1ml,命名为BJSY-1、BJPG、BJSD和BJBLZ株。本研究建立的方法为PRRS的诊断及防制提供了技术保障。
刘永宏林健赵丽韩春华王凤龙刘月焕
关键词:高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
Expression of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus ORF7 Gene and Purification and Immunological Activity Analysis of the Recombinant Protein被引量:14
2009年
[Objective] The aim of this study was to realize efficient expression of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) ORF7 gene in genetic engineering bacteria and analYze the immunological activity of the recombinant protein after purification. [ Method] The constructed recombinant expression vector pET-ORF7 was transformed into Escherichia co1BL21 (DE3) and induced by IPTG under the optimal condition. After analysis of SDS-PAGE and Western Blot, the expression products were purified by Ni-NTA His · Bind Resin chrom- atographic column under denaturing condition and renatured by gradient dialysis. Subsequently, the immunological activity of the renatured recombinant protein was detected by Westem Blot and indirect ELISA. [ Result] The recombinant plasmid pET-ORF7 expressed in E. coli successfully, and the fusion protein was in the form of inclusion body. By SDS-PAGE detection, the molecular weight of the expression protein was approximate 33 kD, according with the expectation. Analysis by Bandscan software showed that the expressed fusion protein was about 50% of total bacterial protein of BL21 (DE3). Wastem Blot and indirect ELISA detection showed that the renatured protein could react with PRRSV positive serum specifically, indicating its good immunological activity. [ Conclusion] This study lays a foundation for the preparation of PRRSV monoclonal antibody and diagnostic kit.
张永富韩春华林健刘月焕韦海涛祝俊杰赵景义李栋梁马国文布日额李明刚张婷刘永宏马明张秋雨
关键词:EXPRESSIONPURIFICATION
猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的诊断及其分子特点被引量:7
2009年
采用流行病学调查、临床症状观察、病理学检查、病毒分离、分离毒株测序以及遗传演化分析的方法,对北京及其周边地区4个猪场剖检的4头猪进行分析。结果:流行病学和临床症状表现为急性高热性传染病;病理学观察为非化脓性脑炎和间质性肺炎等多器官严重的病理变化;RT-PCR和病毒分离确定该疫情的主要病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。与典型PRRSV感染不同的是:成年猪感染率达50%以上,病死率达80%以上;PRRSV分离株全基因序列分析表明属于PRRSV北美洲型,特别是PRRSV NSP2不连续缺失30个氨基酸,说明此次流行的PRRSV毒株可能为高致病性毒株。
刘永宏林健刘月焕王凤龙韩春华赵振华王金玲杨龙峰赵丽李栋梁韦海涛祝俊杰赵景义
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒
猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析被引量:5
2009年
[目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。[结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。
张永富韩春华林健刘月焕韦海涛祝俊杰赵景义李栋梁马国文布日额李明刚张婷刘永宏马明张秋雨
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因免疫学活性
高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在自然病例组织中的定位被引量:4
2009年
[目的]为高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)的预防和治疗提供理论依据。[方法]应用免疫组化与H.E.染色对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)自然感染病例进行抗原定位和病理组织学观察。[结果]病毒抗原主要存在于上皮组织细胞,也存在于巨噬细胞、淋巴细胞和脑神经细胞等组织细胞中。[结论]HP-PRRSV毒株在自然感染病例中的细胞嗜性和组织嗜性有不同于以往毒株的特点。
刘永宏韩春华王凤龙刘月焕林健杨汉春郭鑫李栋梁韦海涛祝俊杰赵景义赵振华马明杨龙峰王金玲赵丽
关键词:高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒自然病例免疫组化抗原定位
猪高热症的病理学研究被引量:1
2009年
刘永宏韩春华林健刘月焕王凤龙赵丽赵振华李栋梁韦海涛祝俊杰王金玲杨龙峰
关键词:病理学高热症猪场病毒血症继发感染
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