北京市农林科学院青年基金(2007020122)
- 作品数：9 被引量：39H指数：4
- 相关作者：刘月焕刘永宏林健韩春华赵丽更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京市畜牧兽医总站更多>>
- 发文基金：北京市农林科学院青年基金新疆生产建设兵团博士基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%～100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET-ORF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性。
- 刘永宏刘月焕王凤龙韩春华林健王金玲杨龙峰赵丽张秋雨张永富
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因原核表达
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒BJBLZ株序列剖析被引量：2
- 2011年
- 预测与分析HP-PRRSV BJBLZ株序列特点,为进一步该毒株的研究做准备。利用分子生物学软件及服务器,对HP-PRRSV BJBLZ株全序列及各结构蛋白的生化特性、溶解性和核定位信号等进行了分析,结果显示HP-PRRSV BJBLZ株至少可划分12个非结构蛋白和6个结构蛋白;同源性比较显示GP3和GP5蛋白变异性高,M和N蛋白保守。GP3、GP5和M蛋白糖基化位点与参考株有变化,GP2、GP4和N蛋白糖基化位点与所有参考株一致。服务器预测显示,N蛋白的碱性氨基酸比例明显高于其他蛋白,总平均亲水值明显低于其他蛋白;GP2、GP3和GP4蛋白不稳定,GP5、M和N蛋白稳定。6个结构蛋白预测不溶性概率均占66%以上,GP3不溶性概率最高。可以利用以上一些不同于以往各代表株的特点,为PRRS的诊断和防治进行进一步的研究。
- 刘永宏赵丽刘俊峰王凤龙刘月焕
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在自然病例组织中的定位(英文)被引量：15
- 2009年
- 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起，以怀孕母猪发生流产、早产和死胎等严重的繁殖障碍及仔猪和育肥猪发生呼吸道疾病为主要症状的传染病，是一种免疫抑制性疾病。猪感染PRRSV后的组织学病理变化主要集中在肺脏和淋巴结等器官；急性PRRS表现为败血症，全身性巨噬细胞和血管内皮细胞肿大、活化或增生，间质性肺炎，
- 刘永宏赵丽韩春华王凤龙刘月焕林健杨汉春郭鑫李栋梁韦海涛祝俊杰赵景义赵振华马明杨龙峰王金玲
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒自然病例高致病性免疫抑制性疾病PRRSV
- 4株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离和鉴定被引量：1
- 2013年
- 为了进一步分析本次猪暴发高发病率和高死亡率疫情的病因,本研究利用病毒分离与鉴定方法,将4份RT-PCR鉴定为单纯PRRSV阳性的组织病料,接种Marc-145细胞,经RT-PCR、IFA和电镜鉴定成功的分离到4株PRRSV,TCID50为10-6.5/0.1ml,命名为BJSY-1、BJPG、BJSD和BJBLZ株。本研究建立的方法为PRRS的诊断及防制提供了技术保障。
- 刘永宏林健赵丽韩春华王凤龙刘月焕
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析(英文)被引量：14
- 2009年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为不分节段、聚腺苷酸化、有囊膜的单股正链RNA病毒。其基因组长约15kb，含有8个开放的阅读框架（ORFs）。PRRSV基因组的顺序依次为：5’-ORFla-ORFlb-ORF（2—6）．ORFT-3’。鲁韦韦等分析表明，PRRSV的ORF7基因保守性较好，变异较小。此外，ORF7编码的核衣壳蛋白（N蛋白）具有良好的免疫原性及反应原性，机体产生的PRRSV抗体主要是针对N蛋白的。因此，N蛋白常可作为诊断抗原来检测PRRSV。
- 张永富韩春华林健刘月焕韦海涛祝俊杰赵景义李栋梁马国文布日额李明刚张婷刘永宏马明张秋雨
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因活性分析免疫学正链RNA病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的诊断及其分子特点被引量：7
- 2009年
- 采用流行病学调查、临床症状观察、病理学检查、病毒分离、分离毒株测序以及遗传演化分析的方法,对北京及其周边地区4个猪场剖检的4头猪进行分析。结果:流行病学和临床症状表现为急性高热性传染病;病理学观察为非化脓性脑炎和间质性肺炎等多器官严重的病理变化;RT-PCR和病毒分离确定该疫情的主要病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。与典型PRRSV感染不同的是:成年猪感染率达50%以上,病死率达80%以上;PRRSV分离株全基因序列分析表明属于PRRSV北美洲型,特别是PRRSV NSP2不连续缺失30个氨基酸,说明此次流行的PRRSV毒株可能为高致病性毒株。
- 刘永宏林健刘月焕王凤龙韩春华赵振华王金玲杨龙峰赵丽李栋梁韦海涛祝俊杰赵景义
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析被引量：5
- 2009年
- [目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。[结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。
- 张永富韩春华林健刘月焕韦海涛祝俊杰赵景义李栋梁马国文布日额李明刚张婷刘永宏马明张秋雨
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因免疫学活性
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在自然病例组织中的定位被引量：4
- 2009年
- [目的]为高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)的预防和治疗提供理论依据。[方法]应用免疫组化与H.E.染色对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)自然感染病例进行抗原定位和病理组织学观察。[结果]病毒抗原主要存在于上皮组织细胞,也存在于巨噬细胞、淋巴细胞和脑神经细胞等组织细胞中。[结论]HP-PRRSV毒株在自然感染病例中的细胞嗜性和组织嗜性有不同于以往毒株的特点。
- 刘永宏韩春华王凤龙刘月焕林健杨汉春郭鑫李栋梁韦海涛祝俊杰赵景义赵振华马明杨龙峰王金玲赵丽
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒自然病例免疫组化抗原定位
- 猪高热症的病理学研究被引量：1
- 2009年
- 刘永宏韩春华林健刘月焕王凤龙赵丽赵振华李栋梁韦海涛祝俊杰王金玲杨龙峰
- 关键词：病理学高热症猪场病毒血症继发感染
