武汉市科技攻关计划项目(200720422138)
- 作品数：12 被引量：127H指数：7
- 相关作者：闫云君杨江科汪小锋黄瑛徐莉更多>>
- 相关机构：华中科技大学湖北生物科技职业学院教育部更多>>
- 发文基金：武汉市科技攻关计划项目国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程石油与天然气工程更多>>
- 基于BP神经网络的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶发酵软测量建模被引量：2
- 2010年
- 为建立洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)脂肪酶发酵过程的软测量模型,运用BP神经网络对洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的发酵过程进行软测量建模,并利用遗传算法对神经网络的初始权值和阈值进行优化,实现模型加快收敛速度,达到全局最优解效果。该模型能够比较精确地模拟菌体生长、底物消耗以及发酵产酶的过程动态,具有良好的泛化能力,说明BP神经网络结合遗传算法在洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶发酵过程的模拟与预测中是一种高效快速的方法。
- 汪小锋付强申旭光杨江科闫云君
- 关键词：BP神经网络遗传算法发酵
- 洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)PCL-3产脂肪酶发酵条件研究被引量：10
- 2008年
- 研究了洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)PCL-3发酵产碱性脂肪酶培养条件的优化。采用单因子试验筛选出糊精为最适碳源,蛋白胨和尿素为复合氮源。通过Plackett-Burman设计试验,对影响产酶条件的8个相关因子进行评估并筛选出具有显著效应的3个因子:尿素、接种量以及初始pH值。用最陡爬坡实验逼近显著因子的最大响应区域后,采用响应面分析法,确定尿素、接种量以及初始pH值最优值分别为0.15%,3.05%和8.59。优化后液体发酵培养基中脂肪酶活力提高到48.88U/ml,比初始酶活25.37U/ml提高了1.93倍。10L的发酵罐中,脂肪酶活力在52h达到最大,为47.69U/ml。
- 汪小锋杨江科闫云君
- 关键词：响应面法
- 双水相萃取法分离纯化洋葱假单胞菌G-63脂肪酶被引量：14
- 2007年
- 采用PEG/磷酸盐双水相系统从洋葱假单胞菌G-63发酵粗酶液中提取脂肪酶,研究了体系中PEG平均分子量、PEG、磷酸盐、NaCl溶液浓度以及pH对脂肪酶分配系数、回收率、纯化效率及分相时间的影响。结果表明:在PEG2000、磷酸盐、NaCl质量分数分别为10%、15%、1%,pH为8.0时,室温下的双水相体系分配系数为4.36,纯化因子为3.98,脂肪酶的最高回收率达到87.25%。
- 黄瑛尹利闫云君
- 关键词：脂肪酶双水相
- 利用a凝集素在酿酒酵母表面展示解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2被引量：11
- 2008年
- 【目的】将解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2展示在酿酒酵母表面,构建全细胞催化剂。【方法】采用PCR方法扩增得到解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2成熟肽编码基因LIP2,将其连接到AGA2基因的下游构建表面展示载体pCTLIP2。分别以橄榄油、三丁酸甘油酯和对硝基苯酚棕榈酸酯(pNPP)为底物检测展示的脂肪酶酶活。在此基础上,对野生菌及工程菌的酶学性质进行比较。【结果】展示Lip2的酿酒酵母重组菌株在半乳糖的诱导下,表现出水解橄榄油、三丁酸甘油脂以及pNPP的活性,20℃诱导72h时酶活达到最高,为182U/g干细胞。对展示的Lip2的酶学性质研究表明,其最适温度为40℃,最适pH为8.0,温度稳定性比自由酶有所提高,50℃温浴4h后残余酶活为其最大酶活的23.2%。以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物检测其底物特异性,结果显示其水解C8,C12,C16对硝基苯酚酯活性相近,均远高于对硝基苯酚丁酸酯(C4)的水解酶活。【结论】对于Lip2,a凝集素系统是一个有效的展示系统,利用该系统成功将Lip2展示在酿酒酵母表面,从而构建了酿酒酵母全细胞催化剂,该全细胞催化剂具有良好的潜在应用前景。
- 刘文山徐莉赵鹤云杨江科闫云君
- 关键词：脂肪酶解脂耶氏酵母酿酒酵母
- 荧光假单胞菌脂肪酶固定化及催化制备生物柴油的工艺研究被引量：4
- 2007年
- 研究了不同因素对制备固定化荧光假单胞菌脂肪酶的影响及固定化酶的酶学性质,并初步探讨了利用该固定化酶制备生物柴油的工艺。以海藻酸钠明胶为复合载体,采用包埋法制备固定化荧光假单胞菌脂肪酶,考察了载酶量、颗粒直径等因子对固定化效果的影响,并用制备的固定化酶进行了酶促酯交换合成生物柴油的工艺研究,考察了反应条件如酶量、反应温度、甲醇流加方式、醇油比等因素对甲酯得率的影响。试验结果表明,制备固定化荧光假单胞菌脂肪酶的最优条件为:每克载体给酶量为300 IU,选用6号注射器针头(内径为0.5 mm);通过酯交换,催化大豆油合成生物柴油的最佳反应工艺参数为:固定化酶25%,醇油比4:1,含水量6%,反应温度40℃;此条件下反应35 h后,甲酯的最高得率可达82%。
- 王爱玲黄瑛周位闫云君
- 关键词：海藻酸钠明胶荧光假单胞菌脂肪酶酯交换生物柴油
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶:一种应用前景广阔的生物催化剂被引量：7
- 2009年
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶对有机溶剂(醇)、热、氧化剂、表面活性剂、去污剂、蛋白酶等具有良好的抗性,在有机合成、对映体拆分、非水相催化等领域应用十分广泛。综述了洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的发酵生产、分离纯化、基因克隆与表达、固定化与生物印迹、蛋白质结构解析及应用研究等,并展望了其未来发展方向,以期为该工业酶的研发与广泛应用提供参考。
- 汪小锋贾彬刘涛杨江科闫云君
- 关键词：分离纯化固定化蛋白质结构
- 微生物发酵生产脂肪酶的研究进展被引量：45
- 2008年
- 脂肪酶是一种重要的工业用酶,广泛应用于食品、精细化工、医药和能源等领域。脂肪酶最主要的来源是通过微生物发酵生产。综述了脂肪酶种类、高产脂肪酶菌种选育、发酵工艺优化与调控、高密度发酵和发酵工艺放大等方面的研究进展,并展望了脂肪酶发酵生产的研究方向及前景。
- 汪小锋王俊杨江科闫云君
- 关键词：发酵脂肪酶基因工程菌高密度发酵
- 提高有机催化脂肪酶活性和稳定性的途径研究被引量：3
- 2008年
- 随着非水酶学的发展,脂肪酶在有机催化反应中得到广泛应用,探寻提高有机催化脂肪酶的催化活性和操作稳定性的途径也随之成为研究热点。综述了近年来这一研究方向的成果及最新进展,着重阐述表面活性剂包衣、固定化以及二者结合的手段对脂肪酶在有机介质中的催化活性及操作稳定性的影响。
- 刘涛闫云君
- 关键词：脂肪酶表面活性剂固定化
- 固定化脂肪酶催化棉籽油酯交换制备生物柴油新工艺被引量：13
- 2008年
- 探索了以乙酸甲酯作为酰基受体,固定化脂肪酶催化棉籽油酯交换制备生物柴油的新工艺。研究结果表明,最佳酯交换条件为:脂肪酶Novozym 435加入量为棉籽油质量的30%,乙酸甲酯和棉籽油的摩尔比14∶1,反应温度40℃,反应时间14 h。在此条件下,精制棉籽油和粗制棉籽油的最高甲酯得率均可达到97%,且反应物乙酸甲酯和副产物三乙酸甘油酯均对脂肪酶无失活作用。该工艺有利于连续操作,脂肪酶反应40批次后的酶活没有显著变化,保持了良好的稳定性。
- 黄瑛黎洁闫云君
- 关键词：生物柴油棉籽油乙酸甲酯酯交换
- 扩展青霉脂肪酶基因克隆、密码子优化及表达被引量：11
- 2010年
- 【目的】克隆扩展青霉脂肪酶基因,实现具强催化活性的脂肪酶的异源高效表达。【方法】利用RT-PCR扩增扩展青霉CICC 40356脂肪酶(PEL)cDNA序列,利用重叠延伸PCR(Over-lap extension PCR)技术对PEL的10个稀有氨基酸密码子和表达载体pPIC9Kα信号肽的9个氨基酸密码子进行了优化,获得了改造过的脂肪酶基因PELM和表达载体pPIC9KM。并构建了带有脂肪酶自身信号肽的pPIC9K-PEL1、pPIC9KM-PELM1、pPIC3.5K-PEL1、pPIC3.5K-PELM1和不带有脂肪酶自身信号肽的pPIC9K-PEL2、pPIC9KM-PELM2六个重组质粒。利用对硝基苯酚棕榈酸酯(pNPP)为底物检测工程菌脂肪酶的酶活。在此基础上,对工程菌的酶学性质进行了研究。【结果】扩展青霉脂肪酶基因cDNA序列分析结果表明该序列与已报道PEL cDNA序列仅相差3个碱基,同源性高达99%。6个重组工程菌在甲醇诱导下,均表现出pNPP水解活性,28℃诱导100h时酶活达到最高,发酵上清的酶活分别为3.65 U/mL、30.49 U/mL、90.85 U/mL、212.05 U/mL、15.29 U/mL、76.32 U/mL。SDS-PAGE结果表明重组脂肪酶分子量均约28 kDa。酶学性质研究表明,重组脂肪酶PELM最适温度为35℃,最适pH为9.5,在pH7.0-10.0范围内该脂肪酶均较稳定,Ca2+和Mg2+对其有激活作用,Fe2+、Zn2+、Cu2+则有抑制作用,EDTA能使之快速失活。以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物检测其底物特异性,结果显示其对中链酯(C8-C12)有较强的水解能力,最适底物为为C8的pNP酯。【结论】密码子优化后的扩展青霉脂肪酶基因在毕赤酵母中获得理想的表达,其酶活力比未优化的野生脂肪酶的提高了2.3-2.5倍,表明定点突变对其基因本身更改特有稀有密码子是实现PEL功能蛋白的异源高效表达的有效策略之一。
- 张正平杨江科徐莉刘云闫云君
- 关键词：扩展青霉脂肪酶基因克隆密码子优化
