“十五”国家科技攻关计划(2001BA707B03)
- 作品数：17 被引量：222H指数：8
- 相关作者：王长海孙颖颖王逸云陈静彭于发更多>>
- 相关机构：大连理工大学烟台大学淮海工学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划烟台市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 杜氏盐藻无菌纯化研究被引量：6
- 2010年
- 首先通过杜氏盐藻及藻液内优势菌对抗生素的敏感性实验确定了氨苄青霉素、庆大霉素、头孢霉素和链霉素为该盐藻的除菌工具.采用联合加入的方法,即上述4种抗生素终浓度均为800μg/mL,相同浓度连续混合处理3次,每次处理间隔2d,再结合平板稀释分离法,获得无菌盐藻.带菌盐藻的生长稍快于无菌盐藻,但会较早出现老化现象;分别回加分离到带菌盐藻中的5种优势菌会促进无菌盐藻的生长.本实验为进一步的盐藻转基因以及藻菌关系等研究奠定了基础.
- 唐颖王长海李克锦黄笛
- 关键词：杜氏盐藻抗生素
- 盐藻的无菌培养及其抗生素标记的选择被引量：5
- 2009年
- 对影响盐藻生长的NaNO3、NaH2PO4、NaHCO3和VB1、VB12、VH等几种主要营养盐进行了优化,在单因素实验的基础上做了四因素三水平正交实验,实验结果得出优化配方为N/P值固定为f/2培养基,NaNO3和NaH2PO4添加量为f/2培养基的10倍、NaHCO30.4 g/L、VB1100μg/L、VB121.0μg/L,其他元素按f/2培养基添加.对盐藻的选择标记进行了研究,选择了氯霉素、G418、潮霉素3种抗生素进行实验,得出氯霉素适合作为盐藻基因工程的筛选抗生素,CAT基因为其阳性筛选标记基因,固体培养基筛选浓度为80μg/mL.为该藻的进一步高密度大规模培养和分子水平的研究提供了依据.
- 李克锦唐颖王长海
- 关键词：盐藻正交实验抗生素
- 营养盐对球等鞭金藻生长及多糖等生化成分含量的影响被引量：9
- 2005年
- 通过研究营养盐浓度对球等鞭金藻生长及其细胞生化成分含量的影响，探讨了球等鞭金藻细胞生长与其细胞内多糖、叶绿素、蛋白质营养成分的关系。结果表明，所选用的4种营养盐在一定的浓度范围内均对球等鞭金藻的生长和细胞生化成分有很大的影响，这4种营养盐的适宜浓度依次为NaNO_3-N10mg／L、FeCl_3-Fe0.10mg／L、KH_2PO_4-P0.6mg／L、Na_2SiO_3-Si0.3mg／L。
- 王长海孙颖颖
- 关键词：球等鞭金藻营养盐生化成分
- 无菌条件下的小球藻培养条件优化被引量：19
- 2006年
- 在无菌培养条件下,对影响纯化小球藻(Chlorellasp.)生长的NaHCO3,KNO3,KH2PO4,VB1,VB12等主要营养因素进行了优化.实验结果表明微量元素对纯化小球藻的生长有极显著的影响,维生素对纯化小球藻的生长亦有一定的影响.通过五因素四水平正交实验,得到了以海水为基础的优化培养基配方:KNO30.5 g/L、NaHCO30.2 g/L、VB121.0g/L、KH2PO40.02 g/L、VB10.3 mg/L,并添加f/2微量元素.该优化配方有效地提高了纯化小球藻的生长速度和生物量产量.
- 王逸云王长海
- 关键词：微藻小球藻无菌培养正交实验
- 球等鞭金藻生长抑制物的抑藻机理被引量：8
- 2009年
- 通过球等鞭金藻生长抑制物(1-羟基,丙二酸二乙酯-十二烯酸异丙酯)对6种海洋微藻(牟氏角毛藻、纤细角毛藻、三角褐指藻、新月菱形藻、扁藻和盐藻)的生长及细胞内主要生化成分的影响,对该抑藻物质的抑藻机理进行探讨.结果表明,该生长抑制物对6种微藻生长不仅具有明显的抑制作用,而且对微藻细胞内的一些主要生化成分有显著的影响.在该抑制物作用下,6种微藻细胞内的叶绿素含量显著降低,丙二醛含量以及胞外可溶性蛋白质和多糖含量明显提高,硝酸还原酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性也有不同程度的升高或降低.可见,球等鞭金藻生长抑制物是通过对微藻细胞内的某些主要生化成分的合成过程及其活性的调控,实现对微藻藻细胞的生长控制.
- 孙颖颖王长海
- 关键词：微藻球等鞭金藻生长抑制物
- 植酸酶基因在海水小球藻细胞内的表达被引量：4
- 2008年
- 为建立海水小球藻外源基因转化系统,使外源植酸酶基因在海水小球藻细胞内获得稳定表达,利用电激法将植酸酶基因与海水小球藻细胞共转化;利用含G418的抗性平板筛选抗性藻株,并对所获得的抗性藻株依次进行PCR检测、Southern杂交分析和植酸酶活性与性质的检测.经过转化处理的微藻细胞在含G418的抗性平板上培养3周后,每个平板有10-30个抗性藻株长出;在这些抗性藻株中,PCR检测的阳性率为40.16%;Southern杂交分析和植酸酶活性检测证明,植酸酶外源基因已经在小球藻细胞中获得正确表达.植酸酶外源基因在海水小球藻细胞内被成功表达.
- 王长海王逸云
- 关键词：小球藻植酸酶基因表达
- 球等鞭金藻生长抑制物对藻细胞的抑制效应及抗氧化剂对抑制效应的抵制作用被引量：6
- 2007年
- 以球等鞭金藻为材料,研究生长抑制物GI对藻细胞生长、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响;同时研究4种抗氧化剂(抗坏血酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠和3-叔丁基-4-羟基-苯甲醚)对GI抑制效应的抵制作用.结果表明,0.10mg/LGI处理组藻细胞密度、SOD和POD活性明显低于对照组,而MDA含量明显高于对照组.且随着GI浓度的继续增大,细胞密度、SOD和POD活性急剧降低,而MDA含量进一步升高.GI浓度为0.30mg/L时,处理组藻细胞密度、SOD和POD活性以及MDA含量分别为对照组藻细胞密度的0.05倍、SOD活性的0.56倍、POD活性的0.59倍和MDA含量的2.2倍.4种抗氧化剂均能有效地抵制GI对藻细胞的抑制效应,使细胞密度、SOD活性和POD活性提高,MDA含量降低.添加抗氧化剂处理组的藻细胞密度为对照组细胞密度的1.38～1.90倍、SOD和POD活性分别为对照组活性的1.49～2.12倍和1.55～2.13倍,而MDA含量比对照组含量降低57.7%～87.9%.生长抑制物的胁迫使球等鞭金藻细胞体内积累了过量的活性氧,而抗氧化剂通过清除藻细胞体内积累的活性氧,减轻了膜脂过氧化伤害,从而抵制了生长抑制物对藻细胞的抑制效应.
- 孙颖颖王长海
- 关键词：球等鞭金藻生长抑制物抗氧化剂
- 球等鞭金藻生长抑制物的分离提取与抑制活性被引量：5
- 2007年
- 以含有生长抑制物的球等鞭金藻的微藻滤液为研究对象,考察pH、时间、料液体积比和溶剂等因素对生长抑制物提取效果的影响,确定了球等鞭金藻的微藻滤液中生长抑制物的适合提取工艺;通过比较两种型号的葡聚糖凝胶对生长抑制物粗提物的分离效果,确定了适合的凝胶类型;同时研究温度对生长抑制物抑制活性的影响以及生长抑制物对其他微藻生长的抑制作用。结果表明：生长抑制物的适宜提取工艺为pH 2~4、提取时间3 h、料液体积比10∶1、溶剂为乙酸乙酯;Sephadex G-15凝胶对生长抑制物的分离效果好于Sephadex G-25;生长抑制物的抑制活性具有很强的热稳定性,其对角毛藻和小球藻有明显的抑制作用。
- 孙颖颖王长海陈静
- 关键词：球等鞭金藻生长抑制物抑制活性
- pH和氮素对球等鞭金藻胞外碳酸酐酶活性的影响被引量：5
- 2008年
- 采用pH电极法研究pH和氮素对球等鞭金藻胞外碳酸酐酶活性的影响.结果表明,球等鞭金藻具有基本的胞外碳酸酐酶活性,且pH和氮素均能明显地诱导其胞外碳酸酐酶活性.pH从6.5升高到9.0时,球等鞭金藻胞外碳酸酐酶活性明显增加,pH8.5时酶活性达到最大.球等鞭金藻的pH补偿点为9.86,表明其具有利用HCO3-的能力.氮素对胞外碳酸酐酶活性诱导也具有重要的影响,3种氮素NH4Cl、NaNOM3、CO(NH2)2在2.0mmol/L时诱导的酶活性均明显高于8.5mmol/L时的诱导的酶活性,且有机氮诱导的酶活性明显大于无机氮诱导的酶活性,硝态氮诱导的酶活性大于氨态氮诱导的酶活性.
- 刘洪霞孙颖颖王长海
- 关键词：球等鞭金藻胞外碳酸酐酶PH值氮素
- 球等鞭金藻生长抑制物的产生和释放被引量：3
- 2009年
- 在含有三个生长阶段(指数生长期、静止期和衰亡期)的球等鞭金藻细胞再悬浮液、细胞破碎液、上清液、藻壳液和无细胞滤液的培养液中对牟氏角毛藻和三角褐指藻进行了培养,并通过这些培养液对两种微藻生长的影响探讨了球等鞭金藻生长抑制物的产生和释放过程。结果表明,生长抑制物的产生及释放与球等鞭金藻细胞的生长阶段密切相关;生长抑制物在细胞的对数生长初期产生并在细胞内积累,当细胞内的生长抑制物浓度超过一定范围后,细胞开始向培养物中释放生长抑制物,进而导致培养物中生长抑制物的浓度增加。
- 孙颖颖王长海阎斌伦
- 关键词：球等鞭金藻生长抑制物
