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黄连N-甲基乌药碱-3′-羟化酶基因的克隆及序列分析被引量：1: 2008年; 目的克隆黄连Coptischinensis N-甲基乌药碱-3′-羟化酶[(S)-N-methylcoclaurine-3′-hydroxylase]基因并做序列分析。方法采用RT-PCR方法,以新鲜的黄连嫩叶cDNA为模板,克隆出黄连N-甲基乌药碱-3′-羟化酶基因的全部序列。结果克隆到的基因(命名为CYP80B3)全长为1680bp,编码一个488个氨基酸残基组成的多肽。其氨基酸序列与日本黄连、唐松草、罂粟和花菱草的N-甲基乌药碱-3′-羟化酶的氨基酸序列同源性分别达95%、82%、70%、68%。将得到的序列提交Genbank,序列号为EF492879。通过与日本黄连的氨基酸序列比对,具有相同功能区域,因而可以参与N-甲基乌药碱的3′位羟基化反应。结论黄连N-甲基乌药碱-3′-羟化酶基因的成功克隆为黄连植物中原小檗碱型苄基异喹啉类生物碱的基因工程等研究打下了良好的基础。; 周嘉裕彭书明雷泞菲廖海陈放; 关键词：黄连克隆

麻疯树两种核糖体失活蛋白的表达模式分析被引量：2: 2008年; 目前,麻疯树核糖体失活蛋白已发现2种:种子中的毒蛋白curcin和叶片中的逆境诱导蛋白curcin-L,其基因的表达模式均呈现出器官特异性。mRNA和蛋白质水平分析显示,curcin只在种子的胚乳中积累,且表达开始于心型胚时期,成熟时达到最高;而curcin-L在正常生理条件下并不表达,但受脱落酸、水杨酸、干旱、高低温等胁迫诱导时仅在叶片中表达。; 秦小波邵彩霞徐莺陈放; 关键词：麻疯树核糖体失活蛋白胁迫

麻疯树种质资源遗传多样性的ISSR分析被引量：24: 2007年; 采用ISSR分子标记技术对大戟科属麻疯树9个自然居群的遗传多样性水平和遗传结构进行了研究.用10个引物对9个居群共135个样品进行了扩增,共获得169条清晰的扩增位点,其中多态性位点164个.POPGENE分析结果表明,麻疯树居群具有丰富的遗传多样水平(多态百分率PPB=97.04%,Neis遗传多样性H=0.2357,Shannon信息指数I=0.3760).AMOVA分析表明,9个自然居群间遗传多样性出现了较大的遗传分化(Gst=0.5398)可能与其有限的基因流(Nm=0.4667)和遗传漂变有关;而居群内有限的遗传分化可能是由于麻疯树自交、近交占主导方式的繁育方式有关.并进行了麻疯树居群的聚类分析.; 何玮郭亮王岚杨威唐琳陈放; 关键词：麻疯树 ISSR 育种

山合欢种子胰蛋白酶抑制剂纯化及部分性质研究被引量：1: 2009年; 采用去离子水抽提、硫酸铵分步盐析、亲和层析和分子筛层析等方法,从山合欢种子中得到一种胰蛋白酶抑制剂。SDS-PAGE结果表明,该抑制剂由2条多肽链构成,分子量分别为14.5和5.5 kDa。MALDI-TOF测定该抑制剂的精确分子量为19 768.23 Da。该抑制剂能与胰蛋白酶形成1∶1的复合物,并且它们的结合不受SDS的影响。该抑制剂的肽指纹图谱中有7个主要的信号簇。通过串联质谱测定该抑制剂的部分氨基酸序列,比对发现与其他Kunitz蛋白酶抑制剂有较高的同源性。; 周嘉裕廖海唐琳徐莺陈放; 关键词：分离纯化山合欢胰蛋白酶抑制剂

麻疯树curcin启动子的分离及其在转基因烟草中的功能分析被引量：6: 2008年; 核糖体失活蛋白是一类可以使核糖体28S rRNA的保守α茎环结构域脱嘌呤的蛋白质。麻疯树毒蛋白(curcin)前体基因编码麻疯树胚乳I型核糖体失活蛋白。从麻疯树基因组中克隆得到其5'侧翼区0.6 kb长的片段,将该片段插入pBI121载体置换其中的CaMV 35S启动子并在相应的转基因烟草中检测报告基因GUS的表达情况。经过GUS活性检测分析发现,该0.6 kb长的片段能够启动报告基因在种子中的表达,并且其在种子不同发育阶段的表达活性存在差异。同时,GUS组织化学染色定位分析表明,在双子叶植物中该启动子片段是胚乳特异性表达的,它从心形胚时期开始持续地在烟草的胚乳中发挥启动活性。; 秦小波高继海徐莺张金平邵彩霞林莎张淑文江璐玎李月琴陈放; 关键词：CURCIN 麻疯树启动子核糖体失活蛋白

麻疯树逆境蛋白(curcin 2)基因在烟草中的表达被引量：2: 2007年; 麻疯树(Jatropha curcas)幼苗在干旱、高低温胁迫和真菌浸染下,其叶片中诱导产生了一种新的毒蛋白curcin2。这意味着curcin2在其它植物中的异源表达可能会增强植物对外界胁迫的抵抗。curcin2 cDNA的两个片段cur2p片段(编码前成熟蛋白)和cur2m片段(编码成熟蛋白),通过农杆菌的介导分别转化烟草并获得转基因植株。但是,只有在插入了cur2p片段的烟草中检测到了curcin2蛋白的表达。同时,curcin2在烟草中的表达增强了植株对烟草花叶病毒(TMV)的抗性。; 黄明星魏琴徐莺陈放; 关键词：麻疯树转基因烟草烟草花叶病毒

麻疯树毒蛋白对小鼠器官的急性毒性研究被引量：5: 2008年; 研究麻疯树毒蛋白（curcin）对小鼠器官的急性毒性作用．用一定浓度梯度20、25、31、38．4、48、60×10^-3g／kg的蛋白溶液腹腔注射小鼠，并用Bliss方法计算出其腹腔给药的半数致死量（LD50）为37．709×10^-3g／kg，95％可信限为（33．228-43．151）×10^-3g／kg．对用药小鼠器官进行病理切片研究，结果显示20×1013g／kg的用量几乎未见对器官的异常影响，在（25～48）×10^-3g／kg范围内对小鼠的重要器官损伤较小，部分器官如肝、肾、肺见灶性水肿充血；当给药剂量达到60×10^-3g／kg时观察到肝脏细胞肿胀、出血明显，肺部充血出血、灶性区域纤维素渗出，胰腺明显充血、有部分个体出现胰腺脂肪变，部分个体的肾出现弥漫性充血．这为麻疯树毒蛋白制备免疫毒素的应用提供了参考．; 刁明苏徐莺陈放; 关键词：急性毒性病理切片

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教育部科学技术研究重点项目(104151)