湖北省卫生厅科研基金(JX3B09)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：胡义珍陈博邢星田博黄渝侃更多>>
- 相关机构：华中科技大学中国人民解放军第150中心医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠晶状体摘出术后LECs转分化观察被引量：1
- 2008年
- 目的观察大鼠晶状体摘出术后晶状体上皮细胞（lens epithelial cells，LECs）的形态、分布改变及其转分化的动态过程。方法对50只SD大鼠左眼行晶状体囊外摘出术（extracapsular lens extraction，ECLE）。分别于术后0h、3d、7d、14d及28d对术眼进行裂隙灯检查并处死动物各10只，摘除眼球行光镜及免疫组化检测，Western Blot法检测各时间点后囊膜仅．平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表达。结果术后0h于前囊下和赤道部的内表面观察到LECs，后囊膜无细胞分布。晶状体后囊膜混浊在术后3d出现，囊膜皱缩，整个晶状体囊袋内出现纺锤形细胞。7d时后囊膜明显混浊，囊袋内见较多纺锤形细胞分布。术后14d时出现明显后囊膜皱缩，见新生晶状体纤维，纺锤形细胞明显减少，后囊膜仍可见细胞。28d可见明显后囊膜增厚，新生晶状体纤维填充囊袋，后囊膜未见细胞。免疫组化检测见术后3d α-SMA阳性表达。Western Blot检测α-SMA于术后0h几乎检测不到，3d表达明显增强，7d达高峰，14d下降，28d明显下降。结论大鼠ECLE术后囊袋内LECs形态及分布呈动态变化，后囊膜α-SMA表达提示ECLE术后3～7d是LECs转分化的关键时期。
- 黄渝侃陈博田博王智胡义珍陈炜
- 关键词：晶状体上皮细胞转分化Α-平滑肌肌动蛋白
- 改良大鼠后囊膜混浊模型的建立及晶状体上皮细胞的变化
- 2008年
- 目的:改良法建立大鼠后发性白内障动物模型并观察LEC在PCO过程中的动态变化。方法:SD大鼠50只在连续环形撕囊、水分离后行晶状体囊外摘除术(ECLE),娩核后使用无菌空气恢复前房。分别于术后0,3,7,14及28d对术眼进行裂隙灯检查并处死动物,摘除眼球行光镜观察,免疫组化检测LEC的α-SMA表达。结果:100%术眼后囊膜存在,84%的鼠眼可用于检测。术后0h于前囊下和赤道部的内表面观察到LEC。PCO在术后3d出现,出现囊膜皱缩,整个晶体囊膜出现纺锤形细胞。术后7d时后囊膜明显混浊,见较多纺锤形细胞分布。所有动物于术后14d出现明显后囊膜皱缩,可见新生晶体纤维。术后28d见明显后囊膜增厚,新生晶体纤维填充囊袋,后囊膜未见细胞。LEC形态及分布恢复到术后0h状态。免疫组化检测见术后3d时α-SMA阳性表达。结论:改良法成功建立大鼠PCO模型,LEC在PCO形成中出现形态和分布上的动态变化。其将为在分子水平上探索PCO的发病机制及防治方法提供合适研究载体。
- 黄渝侃陈博陈炜田博王智胡义珍
- 关键词：后囊膜混浊晶状体上皮细胞
- tTG小干扰RNA对人晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质沉积的抑制作用被引量：2
- 2012年
- 目的探讨RNA干扰抑制组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,tTG)的表达对人转化生长因子β2(transforming growth factor-beta2,TGF-β2)诱导的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)转分化和细胞外基质沉积的抑制作用。方法设计并合成针对tTG的3对小干扰RNA(siRNA):tTG-siRNA-1、tTG-siRNA-2、tTG-siRNA-3,用Real-time PCR和Western blot检测转染了siR-NA后HLE-B3细胞表达tTG mRNA和tTG蛋白的变化。然后将体外培养的HLE-B3细胞分为正常对照组、TGF-β2组和TGF-β2+siRNA组。48h后,用Western blot检测各组tTG、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronec-tin,FN)和Ⅳ型胶原(collagenⅣ,Col-Ⅳ)的表达。结果转染tTG-siRNA-1、tTG-siRNA-2、tTG-siRNA-348h后,tTG mRNA的表达分别下降为空白对照组的46.60%、12.84%、66.75%(均为P<0.05);tTG蛋白的表达量分别下降为空白对照组的60.49%、27.87%、55.91%(均为P<0.01)。Real-time PCR与Western blot检测结果一致显示了tTG-siRNA-2对tTG基因的抑制效果最佳。与正常对照组相比,TGF-β2组中tTG、α-SMA、FN、Col-Ⅳ的表达量均明显增加(均为P<0.01);与TGF-β2组相比,TGF-β2+tTG-siRNA-2组中tTG、α-SMA、FN、Col-Ⅳ的表达量均明显减少(均为P<0.01)。结论靶向tTG的siRNA可以显著降低tTG的表达水平,同时可以明显抑制TGF-β2诱导的HLE-B3细胞合成α-SMA、FN、Col-Ⅳ。提示tTG是介导TGF-β2诱导人LEC转分化和细胞外基质沉积的重要分子。
- 邢星胡义珍李世洋马红利
- 关键词：组织型转谷氨酰胺酶细胞外基质平滑肌肌动蛋白后囊膜混浊
- 组织型转谷氨酰胺酶抑制剂对TGF-β_2诱导人LECs表达纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原的影响被引量：3
- 2010年
- 目的观察组织型转谷氨酰胺酶(tTG)特异性抑制剂(MDC)对TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞(LECs)表达纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的影响。方法将含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养的LECs株HLE-B3传代后分为5组:无血清培养基培养的HLE-B3为正常对照组;加入10μg/L TGF-β2处理的HLE-B3为TGF-β2组;10μg/L TGF-β2与100、200、400μmol/L MDC共同处理的HLE-B3为不同浓度MDC组。用半定量RT-PCR检测tTG、FN、Col-Ⅳ在HLE-B3中的表达,计算A(tTG/β-actin)、A(FN/β-actin)、A(Col-Ⅳ/β-actin)值。结果正常体外培养的HLE-B3中可表达一定量的tTG、FN及Col-Ⅳ。与正常对照组相比,10μg/L TGF-β2组中tTG、FN、Col-Ⅳ的表达明显增加(t=33.95,P<0.01;t=38.24,P<0.01;t=13.48,P<0.01);与TGF-β2组相比,100、200、400μmol/L MDC组中FN和Col-Ⅳ的表达明显减少(P<0.01)。100、200、400μmol/L MDC组各组间FN和Col-Ⅳ的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论MDC可剂量依赖性地抑制TGF-β2诱导的LECs中FN、Col-Ⅳ表达的增加。tTG可促进人LECs表达FN、Col-Ⅳ,并参与后囊膜混浊(PCO)的形成。
- 邢星胡义珍陈博
- 关键词：晶状体上皮细胞组织型转谷氨酰胺酶后囊膜混浊
