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鸡柔嫩艾美耳球虫对宿主细胞凋亡的影响被引量：5: 2011年; 为了研究柔嫩艾美耳球虫入侵与宿主细胞之间的相互关系,用纯化的柔嫩艾美耳球虫子孢子与MDBK细胞共培养,使球虫子孢子入侵MDBK(Madin-Darby bovine kidney)细胞,用终浓度6%乙醇进行凋亡诱导,通过Annex-in V/PI双荧光染色法和流式细胞术(FCM)对MDBK细胞凋亡水平进行检测。试验结果证明子孢子入侵细胞后,有子孢子入侵的细胞凋亡诱导显著被抑制(P<0.05),而未有子孢子入侵的细胞相继被凋亡诱导剂诱导凋亡。进一步揭示柔嫩艾美耳球虫子孢子具有独特的机制来延长宿主细胞的存活时间来确保它们能在细胞中存活并发育。; 邓家俭王黎霞安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫细胞凋亡 ANNEXIN FCM

柔嫩艾美耳球虫MIC4-N的真核表达被引量：4: 2011年; 应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫的MIC4-N端基因并去掉信号肽,为了表达检测和纯化的方便,设计引物时改变了3'端的终止密码子,使MIC4-N的C末端带有c-myc和6His抗原标签。通过双酶切,使加工好的MIC4-N基因连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,转化JM109感受态细胞。再经EcoRⅠ与NotⅠ双酶切、菌落PCR及测序鉴定,证明目的基因与真核表达载体pPICZαA构建成功,单酶切重组表达载体、电转转入GS115酵母感受态细胞中。用含高浓度Zeocin的YPD平板筛选酵母菌落,菌落PCR法鉴定转化成功的阳性菌,在BMMY培养基中摇瓶培养,并用甲醇诱导,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定,蛋白分泌表达成功。; 王卫婷姚鹏周赛王黎霞安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫

低温诱导堆型艾美耳球虫3-1E基因的可溶性表达被引量：2: 2012年; 设计合成特异引物应用RT-PCR技术扩增堆型艾美耳球虫的3-1E基因。通过EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,基因连接到表达载体PET28a上,转化入Escherichia coli BL21(DE3)感受态细菌,挑取阳性菌落。经过双酶切和测序鉴定,证明含目的基因的表达载体PET28a构建成功。低温(16℃)诱导表达,经过SDS-PAGE和We-stren Bolt鉴定,表明此蛋白以可溶蛋白在细菌内表达。在诱导50h,IPTG浓度为0.4mmol/L时目的蛋白表达量最大。; 姚鹏张建军王黎霞安健; 关键词：堆型艾美耳球虫

鸡球虫EtMIC4-N重组蛋白AbISCO^(■)-100疫苗免疫效果被引量：2: 2013年; 为了研究鸡球虫EtMIC4-N重组蛋白AbISCO-100疫苗免疫效果,将320只鸡分为8组,用真核表达的EtMIC4-N融合蛋白以1,5,10μg三种剂量单独免疫以及该三种剂量蛋白分别与50μg AbISCO-100佐剂结合后进行免疫,设非感染非免疫组和感染非免疫组作为对照。鸡只7日龄时腿部肌肉注射进行首次免疫,14日龄时每组随机取12只,分离盲肠淋巴细胞,标记特异性抗体,用流式细胞术检测CD4+T,CD8+T细胞分别占盲肠淋巴细胞的百分比,剩余鸡按一免相同的量进行二免。21日龄时每组随机取12只,分离盲肠淋巴细胞,剩余鸡经口感染Eimeria tenella河北野毒株8×104个卵囊(非感染非免疫组除外),称重。攻虫后7d,称重,盲肠病变计分,并计算卵囊下降率。结果表明:与其余各组相比,10μg蛋白+佐剂组CD4+T、CD8+T淋巴细胞百分率显著升高(P<0.05);与感染非免疫组相比,10μg蛋白+50μg佐剂组增重显著升高(P<0.05),病变计分、OPG值显著降低(P<0.05)。说明10μg蛋白+50μg AbISCO-100组抵抗球虫感染的效果最好。; 周赛王黎霞张莹刘新月张成坤张建军安健; 关键词：柔嫩艾美耳球虫免疫保护

鸡肿瘤坏死因子-α原核表达及生物活性鉴定: 2011年; 为研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)免疫功能,从鸡盲肠扁桃体克隆TNF-α的CDs保守区全序列,与pGEX-6p-1载体连接构建原核表达质粒,转化大肠杆菌M109,IPTG诱导蛋白表达,经包涵体洗涤、溶解、复性、亲和柱层析获得纯化的融合蛋白,经Western-blot鉴定为鸡TNF-α融合蛋白;用CEF/VSV法和MTT法检测表明,该融合蛋白的抗病毒活性为1.2×26 U/mg,在5-6稀释度下能显著促进淋巴细胞增殖。; 王黎霞王彩霞张建军阮文科徐赓安健; 关键词：肿瘤坏死因子-Α 原核表达生物活性

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国家自然科学基金(31072128)