山西省回国留学人员科研经费资助项目(2011-3)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 发文基金：山西省回国留学人员科研经费资助项目国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
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- MAPK信号通路在铝致SH-SY5Y细胞死亡中的作用被引量：2
- 2014年
- 目的研究铝致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)死亡过程中MAPK信号通路的作用,探索铝致神经细胞死亡的机制。方法用4 mmol/L的Al Cl3·6H2O染毒SH-SY5Y细胞模拟铝致神经细胞死亡模型,用凋亡的特异性阻断剂z VAD-fmk(20μmol/L)抑制凋亡发生,用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1,60μmol/L)抑制程序性坏死发生,用CCK-8检测不同组间细胞活力的变化,用流式细胞术检测凋亡率及坏死率的差异,用蛋白印迹法检测MAPK信号通路蛋白磷酸化水平的改变。结果与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的细胞活力下降(P<0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组和凋亡抑制组的细胞活力上升(P<0.05)。与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率上升(P<0.05);与染铝组相比,凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率下降(P<0.05)。与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组p38磷酸化水平升高,ERK磷酸化水平下降(P<0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组的p38磷酸化水平下降,ERK磷酸化水平上升(P<0.05)。结论 MAPK信号通路中的p38和ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞程序性坏死,ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞凋亡,而JNK信号通路未参与铝致SH-SYSY细胞死亡。
- 贾晓芳张勤丽牛侨
- 关键词：铝MAPK信号通路凋亡程序性坏死
- Caspase-3 shRNA对染铝神经细胞凋亡的干预被引量：1
- 2012年
- 目的通过体外实验来研究铝的神经毒性,探讨慢病毒载体Caspase-3 RNA干扰对染铝神经细胞凋亡的干预效果。方法原代培养神经细胞,用AlCl3.6H2O染毒,选用病毒为载体的Caspase-3 shRNA试剂感染神经细胞,荧光标记感染成功的细胞计算神经细胞的感染效率,荧光定量PCR技术检测干预后Caspase-3基因的表达情况计算慢病毒载体的Caspase-3 shRNA的抑制率。光学显微镜、荧光染色观察神经细胞的形态学变化,并检测细胞活力;AnnexinV-PI双染法检测神经细胞感染后的凋亡坏死率。结果慢病毒载体的Caspase-3 RNA干扰试剂的感染效率大于90%,抑制率为66.47%。用慢病毒载体的Caspase-3 shRNA感染原代培养神经细胞后可见染铝神经细胞活力显著上升(P<0.01);吖啶橙(AO)-溴化乙啶(EB)双荧光染色法可以清楚地观察到染铝细胞的早期凋亡和晚期凋亡现象明显减少;Annexin V-PI双染法检测结果显示,感染后染铝神经细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论慢病毒载体的Caspase-3shRNA感染细胞后,可以显著抑制Caspase-3基因的表达,神经细胞活力明显增高,凋亡细胞的数量显著降低。
- 张勤丽教霞徐丽李娜牛侨
- 关键词：慢病毒载体CASPASE-3RNA干扰细胞凋亡
