江苏省科技支撑计划项目(BE2012366)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
- 相关作者：吴双朱善元洪伟鸣左伟勇王永娟更多>>
- 相关机构：江苏农牧科技职业学院甘肃农业大学扬州大学更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目国家自然科学基金江苏省“青蓝工程”基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭瘟病毒UL6基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2016年
- 为制备鼠抗鸭瘟病毒(DPV)UL6基因的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出UL6基因,连接原核表达载体p ET-32a(+),构建表达质粒p ET-UL6,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃经1.0 mmol/L的IPTG诱导4 h,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达情况,将目的蛋白免疫Balb/c小鼠,利用ELISA方法检测特异性抗体效价。结果显示,构建的原核表达质粒经IPTG诱导能正确表达,且表达的重组蛋白能与DPV阳性血清反应,制备的多克隆抗体效价可达1∶16 000。表明,制备的多克隆抗体具有良好的免疫原性,可以用于UL6基因的表达检测。
- 吴双马丽丽朱善元陆辉
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达多克隆抗体
- 鸡源和鸽源基因Ⅵ型新城疫病毒对鸽的致病性比较被引量：1
- 2015年
- 为了比较鸡源、鸽源VIb亚型新城疫病毒(NDV)对鸽的致病性差异,选取鸡源毒株ZJ3和鸽源毒株WX-10-07-Pi,分别人工感染2月龄试验鸽。接种后,观察试验鸽的临床症状、病理剖解变化、喉气管和泄殖腔排毒以及组织学病变情况,结果发现,2株NDV均能导致接种鸽发病,发病率为100%,死亡率为0;WX-10-07-Pi感染组鸽泄殖腔排毒时间长,而且病毒检出率比其他组高;此外,在接种组鸽的多种组织器官中均可检测出病毒。试验结果表明,不同基因型NDV对鸽均有致病性,但致病力强弱与NDV毒株特性有关;鸽源基因Ⅵb亚型NDV在鸽体内可长期带毒与排毒,且更易在鸽群中传播。
- 胡新岗吴双黄银云郭广富
- 关键词：新城疫病毒鸡源
- 4株鸽源新城疫病毒的分离鉴定及其全基因组序列分析被引量：1
- 2015年
- 为探讨4株鸽源Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type1,PPMV-1)分离株的遗传起源和基因Ⅵ型PPMV-1全基因组氨基酸序列特征性的变化,对江苏省2007—2008年临床发病鸽中分离鉴定出的4株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行全基因组序列分析比对。结果表明,分离的4株PPMV-1分离株均属于Ⅵb型,且与欧洲流行株EU/re亚型遗传距离最近,而与中国流行株遗传距离较远;氨基酸序列分析发现,在核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)、大分子蛋白(L)中分别有1个基因Ⅵ型PPMV-1序列特征的氨基酸突变。
- 胡新岗王伟伟黄银云吴双
- 关键词：新城疫病毒全基因序列GENOTYPE
- 鸡Toll样受体2的克隆表达及多克隆抗体的制备被引量：5
- 2014年
- 试验旨在制备鼠抗鸡Toll样受体2(chTLR2)的多克隆抗体。采用RT-PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外区片段chTLR2(chTLR2t1和chTLR2t2),并构建这两个片段的原核表达重组质粒,优化蛋白质的表达条件,SDS-PAGE和Western-blot法检测融合蛋白,将融合蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用相应的原核表达的全长蛋白检测特异性抗体滴度。结果显示,成功获得chTLR2的胞外区片段,构建的原核表达重组质粒经IPTG诱导能成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价分别为1∶16 000和1∶10 000。表明制备的鼠抗chTLR2多抗具有良好的特异性,为进一步研究chTLR2的功能提供了重要材料。
- 吴双朱善元王永娟王安平左伟勇洪伟鸣
- 关键词：原核表达多克隆抗体CHICKENTOLL-LIKE
- 新城疫病毒LaSota疫苗株的准种遗传变异分析被引量：2
- 2014年
- 为开展新城疫病毒(NDV)LaSota疫苗株的反向遗传操作技术研究,了解该病毒的准种分化情况,运用鸡胚极限稀释法对NDV LaSota疫苗株进行传代纯化,选择病毒稀释度最高、血凝价较高的鸡胚尿囊液作为传代接种物,传至第5代,RT-PCR扩增序列,测定并分析其全基因组序列,阐述LaSota疫苗株准种分化情况,为基因工程疫苗的研制奠定了一定基础。
- 吴双王永娟左伟勇王安平洪伟鸣秦枫朱善元
- 关键词：新城疫病毒准种
- 鸭瘟病毒环介导等温扩增检测方法的建立及应用被引量：5
- 2015年
- 为建立一种简便、快速、灵敏度高、特异性好的鸭瘟病毒(DPV)检测方法,根据GenBank中公布的DPV UL6基因组序列,设计了3对特异性引物,建立了LAMP快速检测方法。该方法的灵敏度可达0.1fg,对其他鸭常见病原体检测结果均为阴性,扩增反应只需在水浴锅中60min内即可完成,可通过肉眼观察颜色变化直接判定结果。结果表明,所建立的LAMP方法简便快捷,省时省力,是适用于现场和基层实验室快速、准确检测DPV的分子生物学方法。
- 马丽丽吴双胡成左伟勇洪伟鸣王永娟贾宁朱善元
- 关键词：鸭瘟病毒环介导等温扩增技术
- 线粒体蛋白质翻译延伸因子(TUFM)在不同毒力新城疫病毒感染的鸡胚成纤维细胞中的表达水平
- 2016年
- 为研究线粒体蛋白质翻译延伸因子Tu(TUFM)在不同毒力新城疫病毒(NDV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中表达水平的变化,运用比较蛋白质组技术分析感染了NDV的CEF差异表达的蛋白点。与24 h的阴性对照组相比,感染NDV后24 h时TUFM表达量在毒力最弱的WX-10-07-Pi感染组中显著升高;毒力最强的JS-5-05-Go引起宿主表达TUFM量随感染时间增加逐渐增强。推测TUFM的表达水平与NDV毒力强弱具有一定相关性。
- 吴双朱善元王晓泉左伟勇王安平王永娟秦枫洪伟鸣刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒毒力
- 鸽常规石蜡切片制作技术的体会及改良被引量：2
- 2015年
- 为了使传统的石蜡切片技术满足病理研究与诊断的需要,针对鸽的石蜡切片制作过程中易出错的环节,探讨制作优良鸽石蜡切片的具体方法,对制作过程中取材、固定、修整、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色及封固等步骤进行改良,镜检结果表明获得了高质量的石蜡切片。
- 吴双朱善元王安平王永娟左伟勇洪伟鸣秦枫
- 关键词：常规石蜡切片切片质量
