山西省科技攻关计划项目(051056)
- 作品数：11 被引量：23H指数：3
- 相关作者：张映聂向庭马艳琴李桂兰李丽芳更多>>
- 相关机构：山西农业大学河南科技学院江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 3种PCR引物对猪瘟活疫苗中支原体污染的检测被引量：5
- 2008年
- 本研究以GenBank中登录的几种常见支原体的16S rRNA基因序列为标准,依据其属、种特征设计了3对引物,对猪肺炎支原体DNA进行PCR扩增,建立PCR扩增体系和条件。然后以此体系和条件对从市场上随机购买的猪瘟活疫苗样品进行检测。结果显示:3对PCR引物都可以从疫苗样品中检测到支原体的污染,3对引物的检出率分别为20%、17.1%和14.3%,说明猪瘟活疫苗中的支原体污染为多种支原体的混合污染,污染源较为复杂。
- 任杰张绍芬张映
- 关键词：猪瘟活疫苗PCR
- 检测疫苗中猪肺炎支原体污染的PCR-斑点杂交法和套式PCR法比较研究被引量：1
- 2010年
- 为建立一种敏感、特异的检测疫苗中猪肺炎支原体污染的方法,设计了猪源支原体PCR通用外套引物和猪肺炎支原体种特异性内套引物及地高辛标记寡核苷酸探针,建立了PCR-斑点杂交技术,应用于猪瘟活疫苗中猪肺炎支原体污染的检测,并与套式PCR技术进行比较研究。结果显示,探针最低检出DNA量为23.4 pg,比套式PCR(最低检出量为62.5 pg)敏感性更高,且探针与鸡毒支原体和大肠杆菌DNA无交叉反应。对来自6个生产厂家共90批疫苗的检测结果显示,PCR-斑点杂交法比套式PCR法对疫苗猪肺炎支原体污染的检出率高10%。以上结果表明PCR-斑点杂交法具有更高的敏感性和特异性,在疫苗猪肺炎支原体污染的检测中具有推广应用价值。
- 马艳琴郑俊梅张映
- 关键词：猪肺炎支原体地高辛标记探针套式PCR
- 猪肺炎支原体斑点杂交检测方法的建立及应用被引量：3
- 2012年
- 为建立猪肺炎支原体斑点杂交检测方法,并用于猪肺样品的检测,根据GenBank中登录的猪肺炎支原体(Mhp)P36基因序列,设计并合成一条地高辛标记的DNA寡核苷酸探针。进行Mhp斑点杂交反应,建立最佳反应体系和反应条件,对该方法进行特异性和敏感性试验,并采用最佳反应体系和反应条件在尼龙膜上对猪肺组织样品进行检测。结果表明,该检测方法可有效从可疑病料的猪肺组织中检出Mhp感染,检出率为39.5%。本研究建立的Mhp斑点杂交检测方法快速、敏感、特异,对Mhp的临床检测具有较好的应用价值。
- 李桂兰张映邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体斑点杂交
- 猪肺炎支原体、鸡毒支原体膜蛋白免疫原性分析
- 2013年
- 通过分析猪肺炎支原体(Mhp)、鸡毒支原体(MG)膜蛋白的免疫原性及化学成分,为其致病机理的研究提供基础。分别采用SDS-PAGE、免疫印迹、高碘酸雪夫染色(PAS法)和高碘酸-硝酸银法对Mhp 232株和MG FMF4株膜蛋白的分子量范围、种类和免疫原性进行分析,鉴定膜糖蛋白的数量与种类。Mhp膜蛋白分子量在30～250ku之间,有12条带;MG膜蛋白分子量在25～200ku之间,有29条带。免疫印迹表明,Mhp中46ku膜蛋白具有免疫原性;MG中56ku膜蛋白具有免疫原性。PAGE电泳表明,Mhp有5条带,MG有12条带。PAS法鉴定膜糖蛋白,Mhp有1条带,MG有2条带;高碘酸-硝酸银法鉴定膜糖蛋白,Mhp约在相同位置出现1条带,而MG显示7条带,表明此法的灵敏度高于PAS法。
- 李桂兰郭慧张映
- 关键词：猪肺炎支原体鸡毒支原体膜蛋白膜糖蛋白
- 实时荧光定量PCR在猪肺炎支原体检测中的应用被引量：4
- 2009年
- 实时荧光定量PCR技术是一种利用荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。综述了荧光定量PCR技术的基本原理及其在猪肺炎支原体检测中的应用。
- 王建波任杰张映
- 关键词：实时荧光定量PCR猪肺炎支原体
- 以鸡毒支原体pvpA基因序列建立的套式PCR检测方法被引量：3
- 2011年
- 本试验以GenBank中登录的鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的特异性黏附蛋白pvpA基因序列为目标,用两对引物对鸡毒支原体DNA进行套式PCR扩增,建立套式PCR扩增体系,并进行了套式PCR的敏感性和特异性试验。结果显示,应用该PCR方法对MG DNA的检出限为0.18 pg/μL;以鸡常见细菌、病毒DNA为模板进行PCR扩增,均未扩增出条带,说明该方法特异性强,适用于临床对MG早期感染的检测。
- 毛晓娜王嵩林徐丽丽周莉姚琦张映
- 关键词：鸡毒支原体套式PCR
- 猪肺炎支原体P46基因特异性噬菌体随机肽库的构建被引量：3
- 2009年
- 通过构建猪肺炎支原体膜蛋白P46的噬菌体展示肽库,以筛选其特异性抗原表位。用DNase I随机消化法获取P46基因主要抗原序列(不含信号肽的编码序列)的随机片段,片段经与pBamHI Linker连接和BamHI酶切后,克隆到pC89 pⅧ型噬菌粒载体,重组噬菌粒转化感受态细胞XL1-Blue,辅助噬菌体VCSM13超感染,从而构建了P46基因特异性噬菌体随机肽库。结果,所建肽库含有约2.3×104个不同克隆,滴度约为1.3×1014PFU/mL。说明所建肽库具有较大库容和较好的多样性,可满足P46蛋白抗原表位的筛选。
- 刘志宗葛亚明宁红梅张映聂向庭
- 关键词：猪肺炎支原体
- 猪肺炎支原体P97基因随机肽库的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:构建能用于抗原表位筛选的猪肺炎支原体(Mhp)P97基因C-端序列噬菌体随机肽库。方法:以MhpZ株(强毒)基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得MhpP97基因的C-端部分序列,扩增产物用DNaseⅠ消化并回收50bp^100bp的随机片段,将回收的随机片段插入pC89pⅧ型噬菌粒载体中,转化大肠杆菌XL1-Blue,辅助噬菌体VCSM13超感染,使P97基因随机片段以融合蛋白的形式展示于噬菌体表面,从而成功构建了P97基因特异性噬菌体随机肽库。用PCR及DNA测序法鉴定所建文库的随机性和多样性,测定肽库的滴度并计算库容量。结果:所建肽库的容量约为1.8×104,滴度约为1.3×1012TU/mL,PCR检测及DNA测序结果显示插入片段具有随机性和多样性。结论:所建随机肽库具有较好的随机性和多样性,能够满足后续的抗原表位筛选,为进一步的深入研究奠定了基础。
- 贾球锋李丽芳张映聂向庭
- 关键词：猪肺炎支原体随机肽库
- 氟与动脉硬化被引量：1
- 2011年
- 地方性氟中毒是在特定的地理环境中发生的一种地球化学性疾病,是以氟斑牙和氟骨症为主要特征的慢性全身性疾病,在全世界范围内广泛存在,我国除上海市外的30余省（市）均有发生。近年来,氟对机体非骨相组织损伤及损伤机理是氟中毒研究领域的热点,氟对心血管系统的影响也日益受到人们的关注。本文就氟致动脉硬化方面的研究进展做一综述。
- 马艳琴李海霞
- 关键词：地方性氟中毒动脉硬化慢性全身性疾病化学性疾病心血管系统地理环境
- 斑点杂交法在鸡毒支原体污染检测中的应用被引量：3
- 2010年
- 试验根据GenBank中登录的鸡毒支原体16S rRNA基因序列,用DNAStar和Primer 5.0软件自行设计探针,并进行地高辛标记。采用带正电的尼龙膜对提取的鸡毒支原体DNA进行斑点杂交反应,建立最佳的反应条件,并采用建立的条件对市场上随机购买的鸡新城疫活疫苗进行检测。结果显示,运用斑点杂交反应可以从疫苗样品中检测到支原体的污染,检出率为23.3%(7/30)。表明该方法快速、特异性、敏感性高,对生物制品中支原体污染的快速检测具有较高的应用价值。
- 马艳琴张映
- 关键词：鸡毒支原体DNA探针斑点杂交
