国家自然科学基金(30770283)
- 作品数：9 被引量：34H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划海南省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 基于Cyt b基因序列研究6种裸胸鳝属鱼类的进化关系被引量：9
- 2009年
- 为探讨中国南海裸胸鳝属(Gymnothorax)鱼类系统发育关系,采用PCR扩增产物克隆到T载体后进行序列测定,获得黄边裸胸鳝(Gymnothorax flavimarginatus)、斑点裸胸鳝(G.meleagris)、波纹裸胸鳝(G.undulatus)、云纹裸胸鳝(G.chilospilus)、匀斑裸胸鳝(G.reevesi)5种裸胸鳝的线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cyt b)基因全序列1140bp。结合GenBank中的蠕纹裸胸鳝(G.kidako)Cyt b同源序列进行比较分析,结果表明:(1)1140个位点中共有367个核苷酸位点存在变异(32.2%);(2)序列变异的转换/颠换比值平均为3.223;云纹裸胸鳝和斑点裸胸鳝遗传距离差异最大,为0.226;(3)以花鳗鲡(Anguilla marmorata)为外群,采用NJ法和MP法构建系统发育树,在所分析的6种裸胸鳝属鱼类中,斑点裸胸鳝和波纹裸胸鳝聚为一支,位于系统树的基部位置,其余4种聚为另外一支。蠕纹裸胸鳝样本来源于日本海,其余5种裸胸鳝来源于中国南海,从系统树上来看,它们之间并没有明显的地域差异。
- 杜民齐兴柱尹绍武霍蕊张本陈国华
- 关键词：细胞色素B基因
- 人工诱导花鳗鲡卵巢发育成熟及相关激素和组织的作用被引量：5
- 2010年
- 采用多次肌肉注射黄体生成素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH-A2)和鲤脑垂体匀浆(carp pituitary extract,CPE)的方法诱导花鳗鲡卵巢发育成熟。在任意挑选的15尾实验组鱼中,5尾卵巢发育完全成熟,平均性腺系数(gonadosomatic index,GSI)为(20.9±5.04)%(最大达到27.3%);5尾卵巢发育至成熟期,平均GSI为(7.2±2.86)%;5尾卵巢发育至卵黄生成期,平均GSI为(2.32±1.5)%;而对照组的性腺停留在未发育的Ⅱ期[GSI为(1.18±0.39)%],这表明注射的激素能诱导雌性花鳗鲡性腺发育直到完全成熟。检测卵巢发育过程中脑垂体GtH的mRNA水平,血清中类固醇激素水平以及肝脏和消化道组织学变化。结果表明,脑垂体中GtHα、LHβ和FSHβ的mRNA水平随着卵巢的发育而逐渐增加,在卵巢发育成熟后下降,其中GtHα和LHβ的含量在卵巢发育成熟时虽比发育时期略有下降,但仍然呈现高表达量,而FSHβ在卵巢发育成熟时的表达量极低,几乎检测不到。血清雌二醇的含量在卵巢开始发育和卵黄生成期时的含量较高,随着卵巢的发育成熟而下降;睾酮的含量在卵巢发育成熟过程中有所增加,在卵巢发育成熟时明显升高。肝糖原过碘酸希夫反应染色(periodic acid shiff,PAS)染色结果显示随着卵巢的发育成熟,肝细胞中糖原颗粒逐渐减少,脂肪含量有所增加,肝糖原参与卵巢生成过程中的物质与能量代谢活动。胃壁和肠壁的组织学显示,随着卵巢发育成熟而出现不同程度的退化。
- 林浩然齐鑫周雯伊尹绍武黄海张勇刘晓春陈国华
- 关键词：花鳗鲡卵巢促性腺激素类固醇激素
- 海南产花鳗鲡细胞色素b基因的克隆及序列分析被引量：7
- 2007年
- 线粒体细胞色素b基因是目前研究鱼类分子系统进化的重要分子标记.笔者以日本鳗鲡线粒体基因组序列为模板设计并合成引物进行PCR扩增,并将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和纯化后,克隆到pMD18-T载体、测序,成功得到全长为1 140 bp的海南产花鳗鲡细胞色素b(Cyt b)基因序列.将该基因全长序列递交到Genebank数据库,获得序列登录号为EF690363.用DNA分析软件MEGA2比较了海南产花鳗鲡与递交到GenBank中的8种分布在中国东南沿海、日本海域及南太平洋海域的鳗鲡属(Anguillia)细胞色素b基因的地理差异,并构建了系统进化树.结果显示:日本产和夏威夷产花鳗的地理差异小于海南产花鳗与它们之间的地理差异.
- 齐兴柱尹绍武娄甜甜廖经球陈国华张本
- 关键词：花鳗鲡线粒体DNA细胞色素B基因
- 激素诱导花鳗鲡精巢发育成熟期间性激素水平及相关细胞的超显微结构被引量：2
- 2010年
- 通过注射人类绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,每7d注射一次(剂量为500U.(体重)kg-1),共注射6次。检测此期间血清中促性腺激素(GtH)和性类固醇激素(T、11-KT、E2)的水平,以及相关细胞超显微结构的变化。结果表明,对照组雄性花鳗鲡性腺发育处于Ⅰ―Ⅱ期,GS(IGonadosome Index)为0.17±0.06%,血清中GtH、T、11-KT水平较低,并且T浓度低于0.1ng(试剂盒测定范围为0.1―20ng.mL-1);注射第3次后,实验组鱼性腺发育处于Ⅲ期,GSI为7.0±0.03%,血清中GtH、T、11-KT的水平均明显上升;排精后的实验组鱼GSI为9.57±2.1%,GtH、T、11-KT的水平比注射第3次的实验组鱼有所下降,但仍然高于对照组;在整个催熟过程中,血清中E2水平持续降低,从对照组的2.36ng.mL-1下降到排精后的0.83ng.mL-1。超显微结构的观察证明,与对照组相比排精后的实验组鱼脑垂体中GtH细胞的小颗粒减少,内质网池扩大,出现分泌并释放促性腺激素后留下的空泡。对照组鱼肝细胞富含糖原,几乎没有脂肪泡的存在,细胞核位于细胞中间,排精后的实验组鱼肝细胞脂肪泡增多变大,脂肪泡的形成导致细胞核偏位。
- 齐鑫黄海周雯伊尹绍武张勇刘晓春陈国华林浩然
- 关键词：性类固醇激素
- 裸胸鳝属鱼类的研究现状与开发利用被引量：2
- 2009年
- 裸胸鳝属(Gymnothorax Bloch,1795)鱼类是我国珊瑚礁鱼类资源的重要组成部分。本文对裸胸鳝属鱼类的种类、形态学特征、生活习性、个体发育、繁殖生物学等一些重要的生物学知识和经济价值等进行阐述,并对今后开展裸胸鳝鱼类的研究与开发利用做了展望,为合理、科学地保护与开发利用裸胸鳝鱼类资源提供参考。
- 申屠垠黄海尹绍武陈国华张本
- 花鳗鲡的核型研究被引量：4
- 2009年
- 采用胸腔活体注射PHA及秋水仙素溶液,取头肾细胞,低渗处理,空气干燥法制片,对染色体进行Giemsa染色来研究花鳗鲡的核型。结果表明,花鳗鲡核型为2n=38,8m+2sm+9t,NF=58。
- 尹绍武廖经球娄甜甜齐兴柱陈国华张本
- 关键词：花鳗鲡核型
- 人工诱导花鳗鲡的精巢发育成熟及其精子的生物学特性被引量：7
- 2009年
- 用肌肉注射HCG的处理方式（剂量为500U／kg体重，每周注射1次，注射时间为6周）诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟，成熟率达80．0％。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明：花鳗鲡精子头部长径为（3．81±0．69）μm，短径为（1．24±0．15）μm；尾部长度为（24．83±3．05）μm；精液pH为7．3～7．5，精子密度每毫升1．02×10^10尾。精子的适宜盐度为15～20，其中盐度为15时，精子激活比率最高，快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6．0～8．0，pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外，4种金属离子（Mg^2＋、Ca^2＋、Na^＋和K^＋）对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致，金属离子浓度过高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而MgCl2、CaCl2、KCl、NaCl溶液浓度为0．4～0．6g／mL时，精子活力最好，最高激活比率为3级（41．0％～60．0％）。
- 周雯伊黄海尹绍武齐鑫张勇刘晓春陈国华林浩然
- 关键词：花鳗鲡精子活力
- 花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析被引量：6
- 2009年
- 以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素(mGnRH和cGnRH-II)cDNA序列。序列分析表明,花鳗鲡mGnRHcDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—22位氨基酸)、mGnRH十肽(23—32位氨基酸)、一个三肽裂解位点(33—35位氨基酸)和56个氨基酸的GnRH相关肽(36—91位氨基酸);花鳗鲡cGnRH-IIcDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—24位氨基酸)、cGnRH-II十肽(25—34位氨基酸)、一个三肽裂解位点(34—36位氨基酸)和50个氨基酸的GnRH相关肽(37—87位氨基酸)。序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-IIcDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%—78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低(63%—67%)。采用RT-PCR方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。
- 黄海张勇刘晓春尹绍武杨丽萍朱培齐兴柱林浩然
- 关键词：花鳗鲡CDNA文库促性腺激素释放激素克隆基因表达
- 花鳗鲡重组促黄体生成素在毕赤酵母中的表达
- 2012年
- 采用聚合酶链反应从花鳗鲡垂体cDNA中分别扩增出GTHα、LHβ基因,再利用搭桥技术,中间以lin-ker将两个基因连接成单个基因LHβα。然后利用双酶切、连接,将LHβα基因连接到载体pPICZαA中,构建出促黄体生成素的酵母共表达载体pPICZαA-LHβα。再利用电转化法将其转入到酵母野生型菌株X-33中,在含不同浓度的zeocinYPDS平板上筛选高拷贝转化子,阳性克隆经φ=0.7%甲醇诱导表达,表达产物采用SDS-PAGE和western blot进行分析,得到所表达的产物相对分子质量约为45 000。
- 毛黎敏张勇李阳源黄海李波李文笙陈国华林浩然
- 关键词：花鳗鲡促黄体生成激素LINKER毕赤酵母
