国家自然科学基金(30570905)
- 作品数：7 被引量：79H指数：5
- 相关作者：刘拥军韩忠朝陈志哲张浪辉张颢更多>>
- 相关机构：福建医科大学中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脐带间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞样细胞的研究被引量：22
- 2008年
- 目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)体外诱导分化为肝细胞的可行性和方法,观察分化后的细胞白细胞表面抗原表达的改变。方法采用酶学法从脐带全层组织中分离UC-MSCs,采用改良的肝分化培养体系体外诱导UC-MSCs向肝细胞分化。诱导后2、4周,观察细胞形态,免疫荧光细胞化学染色法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB);RT-PCR检测肝细胞标志性基因AFP、ALB和CK19 mRNA。ELISA法检测诱导后的细胞培养液中ALB水平。流式细胞仪检测诱导后细胞白细胞表面抗原HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ。结果从人脐带基质中分离培养的UC-MSCs在向肝细胞诱导分化培养体系的培养下,细胞形态由长梭形逐渐转化成为多角形或类圆形,并且表达AFP、ALB mRNA和蛋白,诱导后的UC-MSCs以时间依赖方式产生ALB,诱导后的细胞不表达HLA-DR。结论UC-MSCs具有向肝细胞分化的潜能,分化后的M细胞仍具有低免疫原性。
- 任红英赵钦军刘拥军卢士红李妍涵韩忠朝
- 关键词：脐带间充质干细胞肝细胞分化
- 脐带源间充质干细胞对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的抑制作用被引量：24
- 2006年
- 目的:观察人脐带源间充质干细胞(hUC-MSC)对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的影响,探讨其在免疫调控中的作用。方法:建立分离、扩增hUC-MSC的方法,检测其MHC表型;实验分3组:(1)单纯脐带血组(阴性组);(2)脐带血+丝裂原刺激组(对照组);(3)脐带血+丝裂原刺激+MSC共培养组(实验组);流式细胞术检测各组脐带血T细胞及其CD4+和CD8+亚型细胞共培养8h后早期激活标志CD69的表达,MTT法检测各组脐带血T细胞共培养5d后增殖情况。结果:成功建立分离、扩增hUC-MSC的方法,免疫表型分析显示hUC-MSC不表达HLA-Ⅱ抗原,低表达HLA-I抗原;流式细胞术检测示在hUC-MSC共培养情况下,经丝裂原刺激后,脐带血T淋巴细胞CD69表达与对照组[(22.6±5.2)%]的阳性率相比较,下降至(7.8±3.5)%(P<0.01),而且这种抑制对不同亚型T细胞(CD4+/CD8+)均起作用;MTT检测显示在hUC-MSC共培养条件下,丝裂原刺激T细胞增殖受到抑制,抑制的程度与hUC-MSC的剂量呈依赖性。结论:hUC-MSC对异源性脐带血T淋巴细胞激活和增殖具有抑制作用,而且这种作用为非选择性的,呈剂量依赖性。
- 张浪辉刘拥军吕璐璐王爱萍许贞书朱雄鹏陈志哲韩忠朝
- 关键词：间充质干细胞脐带T淋巴细胞免疫调控
- 脐带间充质干细胞对脐血单个核细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:观察在低浓度血清培养下脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对脐血单个核细胞(MNC)的增殖和凋亡的影响。方法:利用密度梯度法分离脐血单个核细胞,接种于脐带MSC建立的饲养层培养,通过计数细胞、半固体培养和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡,以评价脐带MSC的支持造血功能和抗凋亡作用。结果:脐带间充质干细胞组单个核细胞总数及集落形成细胞(CFC)显著高于单培养组(P<0.01),且单个核细胞凋亡率低于单培养组(P<0.01)。结论:体外证实脐带MSC具有促进造血和抗凋亡作用。
- 张颢龚伟孟磊池颖陈志哲刘拥军韩忠朝
- 关键词：脐带间质干细胞胎血单核
- 脐带源间充质干细胞促进造血细胞在NOD/SCID小鼠归巢被引量：12
- 2006年
- 目的探讨脐带源间充质干细胞(hUC-MSC)在促进造血细胞归巢,提高造血干细胞植入中的作用。方法RT-PCR检测经体外培养扩增所得hUC-MSC归巢相关分子的表达;将hUC-MSC和CFDA-SE荧光标记的人脐带血单个核细胞(MNC)植入NOD/SCID小鼠建立共移植模型,分离共移植24h后小鼠骨髓有核细胞,用流式细胞仪和荧光倒置显微镜观察脐带血造血细胞在NOD/SCID小鼠骨髓中含量的变化。结果hUC-MSC表达SDF-1及其受体CXCR-4以及相关黏附分子CD11a/ICAM-1、CD49d/VCAM-1;在hUC-MSC共移植情况下,流式细胞仪检测和荧光显微镜下细胞计数均发现人脐带血MNC在小鼠骨髓中的含量与单独脐带血移植相比较有显著提高〔(145±59)/1×105vs(298±72)/1×105;(755±158)/5×105vs(1598±227)/5×105个骨髓有核细胞;n=9,P<0.05)〕。结论hUC-MSC具有表达化学趋化因子及相关黏附分子的特性,有利于实现自身的归巢定位并引导造血干祖细胞的有效归巢与植入;动物模型的建立进一步证实其引导脐带血MNC在NOD/SCID小鼠体内向造血龛———骨髓富集(归巢)的作用。
- 张浪辉陈志哲吕璐璐王爱萍韩忠朝刘拥军
- 关键词：间充质干细胞脐带
- 人脐带间充质干细胞体外分离、培养、扩增方法及生物学特性研究被引量：7
- 2007年
- 目的建立从足月脐带分离间充质干细胞和体外传代培养技术，并对其生物学特性进行研究。方法采用双酶法分离脐带间充质干细胞，并通过传代进行纯化和扩增培养，绘制生长曲线；用流式细胞仪检测脐带表面抗原及细胞周期；采用软琼脂克隆实验以观察脐带致瘤性。结果成功建立了脐带间充质干细胞分离及培养扩增的方法；流式细胞仪检测结果显示，贴壁细胞均表达CD105、CD44、CD13和CD29，不表达造血细胞表型CD34、CD45和内皮细胞表型CD31，不表达CD106、CD166和HLA-DR；细胞倍增时间为30 h，细胞周期分析表明，G0-G1期和S＋G2＋M期所占比例分别为78.84%和11.16%，脐带间充质干细胞在软琼脂中无克隆形成。结论双酶法是一种较好的分离和培养方法间充质干细胞的方法，培养的细胞具有间充质干细胞的基本特性，无致瘤性，为建立间充质干细胞库和临床应用提供了理论依据。
- 张颢龚伟韩之波赵辉张浪辉陈志哲刘拥军韩忠朝
- 关键词：脐带间充质干细胞细胞
- 脐带间充质干细胞对T细胞的免疫调控研究被引量：17
- 2007年
- 目的:研究脐带源间充质干细胞(UC-MSCs)异源T淋巴细胞的免疫调节作用。方法:从脐带中分离和培养间充质干细胞,流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;用Brdu法测定细胞增殖率,观察UC-MSCs对异体T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测共培养体系中CD4+、CD8+水平检测及UC-MSCs对T淋巴细胞转化的影响;且用ELISA法检测共培养上清细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平。结果:从脐带获得的MSC免疫表型分析显示,其不表达HLA-II抗原。对PHA刺激的脐带血T淋巴细胞,UC-MSCs对其的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性;UC-MSC与脐带血单个核细胞共培养体系中,CD8+细胞比例降低,与对照组有显著性差异(P<0.01),CD4+细胞比例无明显变化(P>0.05);UC-MSC抑制了共培细胞养体系中IFN-γ分泌,然而促进了IL-4的分泌,与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论:UC-MSCs抑制PHA刺激的T淋巴的增殖,能够改变T细胞亚群及T细胞分泌的细胞因子,这种抑制特性表明,UC-MSCs对免疫反应具负调节作用,可能为GVHD的防治以及自身免疫性疾病治疗提供一条新途径,有助于UC-MSC的临床应用。
- 张颢龚伟孟磊池颖张浪辉陈志哲刘拥军韩忠朝
- 关键词：脐带间质干细胞脐带T淋巴细胞免疫调节
- 人脐带间充质干细胞对NOD／SCID小鼠造血重建的影响被引量：5
- 2008年
- 目的探讨脐带间充质干细胞(MSC)对NOD/SCID小鼠造血重建的影响。方法以足月胎儿脐带分离的MSC和脐血单个核细胞作为供体,化疗预处理后NOD/SCID小鼠作为受体。将小鼠随机分为以下3组(每组10只):单纯化疗组,仅做化疗预处理,不输注任何细胞;单移植组,化疗后输注单纯脐血单个核细胞(1×107/只);共移植组,化疗后输注脐血单个核细胞(1×107/只)和脐带MSC(1×106/只)。移植后第3、7、14、21、28天分别计数小鼠外周血白细胞,观察其变化;移植后第6周计算小鼠的生存率,并用流式细胞仪检测小鼠骨髓内人CD45+细胞的表达(即植入率)。结果共移植组小鼠移植后第14、21天外周血白细胞[分别为(5.73±0.38)×109/L、(5.90±0.42)×109/L]明显高于单移植组[分别为(3.30±0.58)×109/L、(4.83±0.41)×109/L],差异有显著性(P<0.05)。移植后第6周,共移植组小鼠骨髓人CD45+细胞表达明显高于单移植组(P<0.05),而两组小鼠生存率无显著性差异(P>0.05)。结论成功地建立了异种异基因小鼠脐血移植模型,脐带MSC作为一种新来源的MSC,能够促进造血重建,提高植入率,有望应用于临床共移植治疗中。
- 张颢龚伟孟磊池颖张浪辉陈志哲刘拥军韩忠朝
- 关键词：间质干细胞移植单个核细胞造血干细胞移植
