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SAMHD1蛋白单克隆抗体的制备及SAMHD1在不同细胞中的表达鉴定被引量：1: 2013年; SAMHD1是最近发现的在人髓系细胞中发挥抗艾滋病毒作用的一种天然蛋白。为制备抗人huSAMHD1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的人huSAMHD1重组蛋白为免疫原,经腹腔免疫4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA法筛选和4次有限稀释法克隆纯化,获得了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。Western blot与间接免疫荧光试验结果表明,获得的MAb与人huSAMHD1的真核表达蛋白呈阳性反应,而与猴、马SAMHD1的真核表达蛋白呈阴性反应,表明其具有很好的特异性,可以用于ELISA、免疫荧光和免疫印迹检测以及对huSAMHD1的进一步研究。; 戈曼吴星亮尹鑫魏萍王晓钧; 关键词：单克隆抗体 ELISA 免疫荧光免疫印迹

马胞嘧啶脱氨基酶A3Z3的多态性及抗马传染性贫血病毒作用: 2014年; 马胞嘧啶脱氨基酶家族成员之一的A3Z3分子(eqA3Z3),可通过胞嘧啶脱氨基酶活性限制马传染性贫血病毒(EIAV)的复制。为研究eqA3Z3分子多态性与其抗EIAV活性之间的关系,本实验采用RT-PCR技术从10匹马体内扩增A3Z3基因,对获得的不同马体内A3Z3分子的序列进行比对分析,发现了两种不同于已报道eqA3Z3分子的突变体。将其克隆于真核表达载体pcDNA-HA中,并分别与EIAV感染性质粒共转染293T细胞,通过GST Pull-down方法证明了3种分子均能够与EIAV Gag蛋白相互作用。此外,western blot结果显示3种分子均能够被包装进病毒粒子。同时荧光素酶活性结果表明3种分子具有相同的限制EIAV复制功能。以上研究结果有助于进一步深入了解和评价马属动物Apobec3分子抗逆转录病毒的作用。; 张泽力马建陈方锐尹鑫曹苏亚艾有为王玉龙王晓钧; 关键词：多态性马传染性贫血病毒抗病毒作用

恒河猴Tetherin蛋白对马传染性贫血病毒抑制作用的研究被引量：2: 2013年; Tetherin是新发现的具有限制多种病毒从细胞膜释放功能的细胞蛋白。本研究采用RT-PCR技术从恒河猴巨噬细胞中扩增Tetherin基因,将其插入真核表达载体pEF4/myc-His B中构建重组质粒pHF-Tetherin。并将其转染293T细胞,通过western blot和激光共聚焦分析Tetherin在293T细胞中的表达及亚细胞定位。将pHF-Tetherin分别与马传染性贫血病毒(EIAV)或猴免疫缺陷病毒(SIV)假病毒粒子感染性质粒共转染293T细胞,分析Tetherin对EIAV及SIV出芽的限制作用。研究结果表明,pHF-Tetherin转染293T细胞48 h后可以检测到Tetherin的表达并定位于细胞膜,而且该蛋白具有抑制EIAV及SIV从转染细胞中出芽的生物学功能。; 谷勤雍胡哲尹鑫张泽力吴星亮魏萍王晓钧; 关键词：马传染性贫血病毒猴免疫缺陷病毒

绿色荧光示踪马传染性贫血病毒样颗粒在活细胞中的组装过程被引量：1: 2013年; 马传染性贫血病毒(EIAV)gag基因编码的多聚Gag蛋白能够自动组装形成病毒样颗粒(VLPs)。为研究EIAV衣壳蛋白合成、组装及释放过程,本实验通过构建表达EIAV Gag-GFP融合蛋白重组质粒,并将其转染293T细胞,采用western blot检测不同时间点VLPs的产生及释放。并进一步通过活细胞和3D成像技术观察Gag-GFP在细胞中的表达动态及VLPs的组装过程。结果表明:Gag和GFP蛋白融合表达不影响VLPs的组装,转染约6 h后EIAV Gag蛋白进行合成并在细胞胞质聚集完成组装形成VLPs。该实验结果为进一步研究EIAV在细胞中的组装路线和机制奠定了重要基础。; 张泽力马建尹鑫谷勤雍艾有为曹苏亚王玉龙王晓钧; 关键词：病毒样颗粒

天然免疫限制因子Tetherin的抗病毒机理研究进展被引量：2: 2014年; 天然免疫限制因子Tetherin(骨髓基质细胞抗原2)是Ⅰ型干扰素诱导产生的Ⅱ型跨膜蛋白.Tetherin通过其特殊的拓扑结构,在病毒出芽过程中将病毒粒子连接在细胞膜表面,限制病毒的有效释放,从而发挥广谱性的抗病毒活性,而病毒也可以通过多种策略拮抗Tetherin的抗病毒活性.病毒与宿主长期抗争进化的结果表现为病毒特定拮抗蛋白对抗不同种属细胞Tetherin的限制存在种属特异性.本文通过对Tetherin的分子结构、抗病毒活性及其拮抗蛋白的对抗机制等最新进展进行综述,为研究病毒与宿主相互作用的分子机制以及新型抗病毒药物的筛选提供借鉴.; 尹鑫魏萍王晓钧; 关键词：TETHERIN 抗病毒活性拮抗蛋白进化

一株抗马传染性贫血病毒p26蛋白单克隆抗体识别差异表位鉴定: 2015年; 为研究本实验室制备的抗马传染性贫血病毒（EIAV）p26蛋白单克隆抗体（MAb）1G11的B细胞表位识别特性,本研究通过对不同EIAV株p26蛋白进行系统进化分析,将其划分为3大分支群。根据已经鉴定的线性表位（命名为1G11）,通过对3个分支群中的8株代表性病毒株p26蛋白1G11表位区域分析,并原核表达8株病毒1G11表位区域多肽P26-（1～8）,经SDS-PAGE和western blot鉴定,结果表明除表位多肽P26-7以外,其他多肽均能够被MAb 1G11所识别。分析显示P26-7多肽序列同时发生N^200S和M^215L变异。由于N^200S和M^215L单独改变并不影响MAb 1G11识别,因此我们推测N^200与M^215同时改变可能影响两侧末端半胱氨酸（C）及附近氨基酸所形成的表位构象,进而影响MAb 1G11识别;同时,其他氨基酸差异并不影响MAb 1G11识别,表明该抗体对1G11表位区域识别具有广谱性。这为进一步应用该MAb作为检测抗体和开发广谱性诊断检测方法提供了依据。; 常浩胡哲戈曼郭继珂王晓钧周建华; 关键词：马传染性贫血病毒

应用酵母双杂交方法筛选与马传染性贫血病毒Rev蛋白相互作用的蛋白: 2015年; 为研究马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白与马巨噬细胞蛋白之间的相互作用,本研究利用SMART技术构建了马巨噬细胞的酵母双杂交c DNA文库,并利用该文库调取与EIAV Rev蛋白相互作用的细胞蛋白,构建诱饵质粒p GBKT7-rev,通过表型检测Rev的自激活和细胞毒性作用,并与构建的文库进行杂交筛选。对获得阳性克隆进行序列测定和比对分析,根据分析结果进行共转化验证。结果显示,文库的容量为3×108 cfu/m L。Rev蛋白在酵母双杂交系统中无自激活现象和细胞毒性作用。此外,本实验共筛选得到5个与EIAV Rev相互作用的宿主细胞蛋白。本研究为进一步研究Rev蛋白的生物学新功能奠定了基础。; 苏朝尹鑫马建王晓钧; 关键词：马传染性贫血病毒

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国家自然科学基金(31072113)