浙江省自然科学基金(LY12C17002)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 沙壳蛋钙化壳的结构特征被引量：2
- 2014年
- 为了深入研究蛋壳品质的形成机理,本文通过比较沙壳蛋和正常蛋钙化壳中粗灰分含量,以及沙壳蛋中砂质壳部和正常壳部超微结构和方解石晶体特征,结果表明:沙壳蛋砂质壳部粗灰分(无机物)含量极显著低于正常鸡蛋壳(P<0.01)。沙壳蛋的砂质壳部厚度明显低于正常壳部;砂质壳部乳锥层的乳突密度小于正常壳部,但未达统计学显著性(P>0.05),砂质壳乳突更圆钝、间隙更大,乳突中气孔明显更多;此外,砂质壳部垂直晶体层质地疏松,有颗粒状或块状堆叠,其下方的棱柱层中气孔明显减少。所有蛋壳样品外表面(104)晶面衍射峰强度高于内表面,其中沙壳蛋正常壳部以及正常鸡蛋壳的增长幅度明显高于砂质壳;此外,不论是内表面还是外表面,正常鸡蛋壳和沙壳蛋正常壳部晶粒均大幅度地小于砂质壳部,沙壳蛋砂质壳部和正常壳部内外表面的晶粒大小相近,而正常鸡蛋壳由内向外有较大幅度的减小。根据上述结果可得出,在鸡蛋壳形成过程中,砂质壳部晶化界面的有机组分诱导晶核形成的效率可能更低,晶粒间有机组分分布的持续性更差;此外,生物晶体的生长及优势取向或许不单纯取决于有机组分的量,可能还依赖于有机组分的构成、结构属性等。
- 王佩伦王淑红刘长国
- 关键词：粗灰分超微结构
- 鸡WDR72基因的克隆表达及其相应抗体的制备
- 2012年
- WDR72是课题组前期初步鉴定的蛋壳强度相关基因,它是个新基因。本文首先参考GenBank中原鸡(G.gallus)的WDR72基因序列设计3对引物,从仙居鸡子宫组织的cDNA中克隆WDR72基因,并构建家鸡WDR72编码基因的pEGFP-N1真核表达重组质粒;其次,将所克隆的WDR72基因的3′端编码序列构建到原核表达质粒pET-28b,然后利用0.4mmol/L的IPTG于37℃诱导表达WDR72的C端肽链;最后利用500mmol/L的咪唑纯化该肽链,并免疫大白兔制备wdr72特异性多抗。上述工作将为深入研究WDR72基因的生物学特性及其生化功能提供基础。
- 李炳熠刘长国
- 关键词：基因克隆
- 蛋鸡OC-116基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2014年
- 参考原鸡(G.gallus)OC-116编码基因序列(登录号:NM_204569.1)设计3对引物,特异性地从仙居鸡子宫组织中克隆OC-116编码基因的N端、中段和C端,测序鉴定后通过酶切连接获得家鸡OC-116的全长编码基因。根据本研究的测序结果,初步发现突变概率较高的碱基有:第1233位(A→G)、1336位(C→G)、1358位(T→G)、1391位(T→G)、1491位(T→G)、1754位(G→T)、1841位(T→C)、1843位(C→T)、1983位(C→T)和2057位(T→C);其中第1358,1754,1841,1983和2057位的碱基突变均为同义突变,第1233、1336、1391、1491和1843位是错义突变。而且突变碱基主要属于T:G颠换类型,其次是T:C转换类型。另外根据同源性分析,家鸡的OC-116编码基因在进化过程中很保守。总之,本研究已经从仙居鸡子宫组织中克隆到OC-116编码基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础。
- 王淑红王利刘长国
- 关键词：克隆突变位点
- 鸡OC-116基因编码区真核表达载体的筛选及其Real-time PCR检测体系的优化
- 2014年
- 实验旨在比较鸡OC-116基因编码区在不同载体上的表达差异,筛选表达量相对较高的重组质粒,同时优化OC-116基因编码区的Real-timePCR体系;制备OC116-GFP、OC116-pcDNA、OC116(M1)-pcDNA和OC116(M1)-GFP4种质粒,分别转染CHO细胞,瞬时表达后制备cDNA、提取总蛋白;然后优化OC-116基因编码区的Real-time PCR体系,并分别通过Real-time PCR、Western blotting鉴定表达水平相对更高的重组质粒。结果表明:优化PCR产物中GC碱基的分布可以排除Real-time PCR反应中熔解曲线双峰问题;更换其他实验空间可以有效解决Real-time PCR反应中的疑似气溶胶污染;pcDNA3.1/myc-His(-)A表达载体诱导OC-116基因编码区翻译表达的能力比pEGFP-N1强;在两类真核表达质粒中,Kozak序列的引入均能明显增强OC-116基因编码区的转录以及翻译水平。结果提示,Real-time PCR反应中双峰熔解曲线以及气溶胶污染可以通过引物设计、更换实验环境进行解决;携带Kozak序列的OC-116(M1)-pcDNA重组质粒目标基因转录、翻译表达水平相对更高,可用于后续研究。
- 王利王淑红刘长国
- 关键词：熔解曲线
- 鸡蛋壳Ovocleidin-116(OC-116)研究进展被引量：10
- 2015年
- Ovoeleidin—116（OC-116）是一种与生物钙化紧密关联的古老蛋白质，也是鸡蛋壳钙化层、表面有机层的主要构成组分。在蛋壳钙化层中存在两种OC～116形式：发生糖胺聚糖修饰的蛋白多糖（180～200ku）和不携带糖胺聚糖的糖蛋白（116～120ku）。单核苷酸多态（SNP）研究表明，OC—116与鸡蛋的蛋形指数、蛋壳厚度以及蛋壳强度密切相关。体内及体外研究表明，OC-116能够调控方解石晶体的生长与形态，从而对蛋壳的形成、质地以及强度有重要影响。另外，OC-116能够显著影响蛋壳表面有机层的沉积，可能是鸡蛋防御微生物侵染的关键因素。总之，OC-116是鸡蛋壳中一个重要的基质组分。
- 杨凌霄刘长国
- 关键词：鸡蛋壳
