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南京军区医学科技创新课题(102039)
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张凤玉
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恙虫病东方体合肥分离株截短56kDa蛋白抗原表达及活性分析
2014年
本文获得恙虫病东方体合肥分离株截短56kDa外膜蛋白基因工程纯化抗原,并鉴定其免疫学活性,为进一步研制广谱诊断试剂、疫苗以及分析其在东方体致病的分子机制奠定基础。我们通过DNA Star和Mega等软件对含有440个氨基酸的合肥株56kDa蛋白序列进行抗原性分析;将合肥株56kDa截短蛋白基因克隆至原核表达载体pET28a获重组质粒,转入大肠杆菌E.coli BL21感受态中,经IPTG诱导,SDS—PAGE电泳分析检测蛋白表达;采用亲和层析法纯化目的蛋白,Western-blot及ELISA法鉴定其免疫学活性。序列分析发现合肥分离株56kDa蛋白可分为4个保守区和3个可变区,抗原性分析结果显示,其保守区的亲水性和抗原性均有很高峰值。SDS—PAGE电泳显示约56kDa的目的重组蛋白表达条带,Western—blot分析显示该重组蛋白可与恙虫病病人血清反应,阴性血清则未出现相应印迹,ELISA分析结果显示该蛋白最低浓度为80ng/μL时仍可检出阳性血清;5μg/mL蛋白可检测阳性血清滴度高达1:12800,证实其具有较强反应原性。本实验获得恙虫病东方体合肥株56kDa截短外膜蛋白基因工程抗原具有良好的抗原活性,有望进一步应用于恙虫病的诊断、疫苗研制及致病机制分析。
耿美玲
郑峰
吕恒
朱进
胡丹
郝丽娜
张凤玉
龚秀芳
李丙军
李先富
潘秀珍
王长军
操敏
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恙虫病东方体
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