辽宁省科技厅博士启动基金(20091049)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
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- p38MAPK蛋白在体外培养神经元中的表达及W-7的干预作用被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨p38MAPK蛋白在体外培养神经元中的激活及钙调蛋白抑制剂W-7的干预作用。方法:神经元原代培养并采用NSE免疫细胞化学技术鉴定神经元。取原代培养7d的大鼠皮质神经元随机分为5组:正常对照组,仅用DMEM/F12完全培养基;NMDA组,去除正常神经元培养液,加入NMDA50μmol.L-1,处理时间10min;W-7干预组,W-7浓度分别为25、50和100μmol.L-1,继续培养24h,加入NMDA 50μmol.L-1。免疫细胞化学染色法及免疫印记法检测皮质神经元内p38MAPK蛋白的表达水平。结果:培养6～12h后大部分神经元贴壁,随时间延长形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间互相接触形成网络。NSE鉴定神经元纯度为90.86%;免疫细胞化学染色法检测,NMDA组p38MAPK蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),W-7组低于NMDA组(P<0.05或P<0.01),呈剂量依赖性;Western blotting法检测,NMDA组p38MAPK蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),W-7干预组p38MAPK表达水平低于NMDA组(P<0.01),呈剂量依赖性。结论:NMDA导致皮质神经元p38MAPK蛋白表达增高,W-7可降低p38MAPK的蛋白表达。
- 刘学文胥向红郎森阳蔡爱民
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶类神经元N-甲基天冬氨酸
- W-7对PTZ诱导的癫痫大鼠的脑保护作用及机制的实验研究被引量：5
- 2010年
- 目的观察钙调蛋白抑制剂W-7对PTZ诱导的癫痫大鼠的保护作用,并探讨药物作用机制。方法健康SD大鼠38只,随机分为5组,对照组(腹腔注射生理盐水)、PTZ组(腹腔注射戊四唑)和3个剂量的W-7组(腹腔注射戊四唑和W-7)。观察行为学表现;乳酸脱氢酶(LDH)含量测定;免疫组织化学法检测caspase-3蛋白表达。结果对照组无发作,PTZ诱导的癫痫大鼠发作程度为IV-V级,W-7保护组发作程度明显减轻(P<0.01);PTZ组脑组织LDH含量较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),W-7保护组同PTZ组比较,LDH含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学染色PTZ组caspase-3蛋白表达明显增强(P<0.01),3个剂量的W-7组表达明显减弱,其差异均具有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论 W-7对PTZ诱导的癫痫大鼠具有脑保护作用,其作用是通过抑制caspase-3的蛋白表达实现的。
- 张海奇刘学文郎森阳刘媛媛
- 关键词：PTZ癫痫LDHCASPASE-3
- 钙调蛋白抑制剂对N-甲基-D-天冬氨酸诱导的大鼠皮质神经元损伤的保护作用被引量：1
- 2010年
- 目的观察钙调蛋白抑制剂W-7对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的皮质神经元损伤的影响,并探讨其可能的机制。方法原代培养SD大鼠(120只)皮质神经元,神经元特异性稀醇化酶(NSE)染色方法确定神经元的比例;添加不同浓度的NMDA,制备细胞损伤模型,MTT法评估细胞生存力;原代大鼠皮质神经元培养后,随机分为对照组、损伤组(NMDA)、不同剂量W-7保护组(25、50、100μmol/L),MTT法评价细胞生存力;对上述各组进行吖啶橙荧光染色,观察细胞凋亡形态;采用Western Blot方法 ,测定上述各组神经元的p38MAPK和NF-κBp65表达情况。结果①以NSE抗体标记培养的神经元,阳性神经元的比例为90.86%。②不同浓度的NMDA对培养大鼠皮质神经细胞具有损伤作用,实验结果表明50μmol/L的NMDA对细胞的损伤以凋亡为主,以此剂量做后续实验。③与对照组比较,损伤组的吸光度(A)值降低,差异有统计学意义,P<0.01;与损伤组比较,W-7各保护组A值均升高(P<0.01或P<0.05),差异有统计学意义。④吖啶橙荧光染色可观察到凋亡细胞,保护组随着W-7剂量的增加凋亡细胞数量减少。⑤Western Blot结果显示,W-7可以使p38MAPK和NF-κB p65表达下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 W-7可能通过降低p38MAPK和NF-κBp65的途径,对NMDA诱导的神经元损伤起保护作用。
- 李洪凤刘学文
- 关键词：钙调蛋白凋亡诱导因子
- 三氟拉嗪对戊四氮致痫大鼠行为学及学习和记忆的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪(TFP)对戊四氮所致慢性癫痫大鼠模型癫痫发作及学习和记忆的影响。方法 40只大鼠随机分为4组,空白对照组、戊四氮(PTZ)诱导癫痫慢性模型组及三氟拉嗪高、低剂量组,观察大鼠行为学改变,应用Morris水迷宫试验,检测大鼠学习和记忆能力。结果模型组大鼠均有发作,其中2只5级发作,而TFP组发作程度减轻,以高剂量组为明显。Morris水迷宫试验:定位航行试验:TFP组大鼠在2 min内找到平台,时间与对照组比较明显缩短(P<0.05),以高剂量组明显;空间探索试验:与对照组比较,TFP组第一象限停留时间延长(P<0.05),穿环指数增加(P<0.05)。结论 TFP能减轻PTZ致痫大鼠发作程度,提高大鼠的学习和记忆能力。
- 孙健吕弘闻刘学文
- 关键词：三氟拉嗪癫痫发作学习记忆
- p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3在NMDA诱导的体外培养神经元中的激活及SB203580的保护作用被引量：4
- 2012年
- 目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化(P-MAPK)水平及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的体外培养神经元中的激活及p38MAPK抑制剂SB203580的保护作用。方法随机将原代培养7 d的大鼠皮质神经元分为对照组,NMDA组,SB203580低、中、高剂量组。对照组仅用DMEM/F12完全培养基,NMDA组去除正常神经元培养液,加入50μmol/L NMDA,处理时间10 min;SB203580低、中、高剂量组浓度分别为5、10、20μmol/L,继续培养24 h,加入50μmol/L NMDA。采用MTT法评价细胞生存力,丫啶橙(AO)染色检测凋亡细胞数量及乳酸脱氢酶(LDH)含量;免疫细胞化学染色法(IHC)及免疫印记法(WB)检测皮质神经元内P-MAPK及Caspase-3的表达水平。结果与对照组比较,NMDA组的吸光度值明显降低、神经元凋亡明显增加、P-MAPK及Caspase-3表达增加(P均<0.01),SB203580低、中、高剂量组P-MAPK及Caspase-3随着浓度的增加表达减少,以高剂量组为明显(P<0.05,P<0.01);与NMDA组比较,SB203580低、中、高剂量组吸光度值均升高,以高剂量组为明显,细胞凋亡数量明显减少(P均<0.05)。结论 P-MAPK及Caspase-3在NMDA诱导的皮质神经元中表达增强,SB203580对NMDA诱导的神经元损伤具有保护作用,其作用机制可能与p38MAPK的活化,进而直接或间接激活Caspase-3的表达有关。
- 刘学文朱锦莉田步先李熙东蔡爱民邢瑞仙张雪杰李秋实
- 关键词：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
- W-7对NMDA诱导的体外培养神经元凋亡的保护作用及机制被引量：1
- 2011年
- 目的:观察钙调蛋白抑制剂N-(6-氨基己烷基)-5-氯-1萘-黄胺(W-7)对N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)诱导的体外培养皮质神经元凋亡的影响,并探讨药物干预机制。方法:取原代培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为5组:对照组,NMDA组,低(25μmo.lL-1)、中(50μmol.L-1)和高(100μmol.L-1)剂量W-7组。采用丫啶橙(acridine orange,AO)染色检测凋亡细胞数量;用免疫细胞化学染色法检测皮质神经元内p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)蛋白的表达。结果:与对照组比较,NMDA损伤组神经元凋亡明显增加(P<0.01);与NMDA组比较,W-7预处理组凋亡数量明显减少(P<0.05)。NMDA组p38MAPK蛋白表达显著增加(P<0.01),W-7干预组表达明显减少(P<0.05)。结论:W-7可减少NMDA诱导的神经元的凋亡,其作用机制可能是间接抑制p38MAPK的蛋白表达。
- 刘学文胥向红杨锐贾玉洁
- 关键词：N-甲基-D-天冬氨酸神经元凋亡P38丝裂原活化蛋白激酶
- NF-κB p65在癫癇大鼠海马中的激活及W-7的保护作用
- 2010年
- 目的:探讨核转录因子(NF-κB)p65在癫癇大鼠海马结构中的激活及其意义,并观察钙调蛋白抑制剂W-7的干预作用。方法:健康SD大鼠58只,随机分为5组,对照组、戊四唑(PTZ)组和三个剂量的W-7组,通过行为学观察探讨W-7的抗癫癇作用,应用免疫组织化学方法和免疫印迹方法检测海马组织NF-κBp65蛋白表达的变化。结果:同对照组比较,3个剂量的W-7大鼠发作程度明显减轻,差异有显著性(P<0.01);免疫组织化学染色和免疫印记实验显示,PTZ组NF-κBp65蛋白表达明显增强(P<0.01),3个剂量的W-7组表达明显减弱,其差异均具有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论:PTZ导致癫癇大鼠脑组织中NF-κBp65蛋白表达增高。W-7对PTZ诱导的癫癇大鼠具有保护作用,其作用是通过抑制NF-κBp65的蛋白表达实现的。
- 刘学文蔡爱民田步先韩锟张雪杰
- 关键词：NF-ΚBP65戊四唑
- p38MAPK信号通路在癫痫大鼠中的激活及普瑞巴林的干预作用被引量：2
- 2011年
- 目的观察Y一氨基丁酸（GABA）受体阻滞剂普瑞巴林（PGB）对癫痫大鼠的干预作用及其作用机制。方法按随机数字表法将38只健康成年SD大鼠分为对照组，戊四氮（P＇rz）组，PGB低、中、高剂量组。按Racine分级方法观察癫痫大鼠行为学表现，同时描记脑电图变化；通过苏木素一伊红染色法观察海马神经元的形态学改变，采用免疫组织化学法检测海马组织p38MAPK的蛋白表达。结果与对照组比较，PTZ组大鼠癫痫发作级别明显增高，表现为Ⅳ一V级发作（P〈0．01），海马组织中p38MAPK的蛋白表达增强（P〈0．01）；与Prz组比较，PGB组大鼠癫痫发作级别明显降低，表现为I～Ⅲ级发作（P〈0．01），海马组织中p38MAPK的蛋白表达减弱（P〈O．05）；PGB组间比较，高、中剂量组大鼠癫痫发作级别较低剂量组降低（P〈0．05），海马组织中p38MAPK的蛋白表达较低剂量组减弱（P〈0．05）。结论p38MAPK通路在阿z诱导的癫痫大鼠海马中表达增强，GABA受体阻滞剂PGB对癫痫大鼠具有保护作用，其作用是通过间接下调p38MAPK的蛋白表达实现的。
- 刘学文朱锦莉田步先李熙东蔡爱民韩锟张雪杰李秋实
- 关键词：普瑞巴林戊四唑P38丝裂原活化蛋白激酶
- SB202190对KA诱导的难治性癫痫大鼠海马神经元的保护作用被引量：4
- 2011年
- 目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）选择性抑制剂SB202190对海人酸（KA）诱导的难治性癫痫大鼠神经细胞的保护作用。方法随机将健康SD大鼠50只,分为空白组、对照组和SB202190低、中、高剂量组。对各组进行行为学观察,采用免疫组织化学法及免疫蛋白印迹法检测C-myc、Mkk3蛋白表达,采用TUNEL检测细胞凋亡并计算凋亡率。结果按Racine分级标准观察癫痫行为学发作分级。空白组无癫痫发作,对照组发作程度减低为Ⅲ~Ⅳ级,SB202190的3个剂量组发作程度多为Ⅰ~Ⅱ级,SB202190的3个剂量组较对照组C-myc、Mkk3蛋白表达明显减弱,细胞凋亡减少（P〈0.01）。结论 SB202190对KA诱导的难治性癫痫大鼠神经细胞具有保护作用,可能与其抑制C-myc、Mkk3蛋白表达相关。
- 刘学文张海奇田步先蔡爱民韩锟张雪杰
- 关键词：癫痫持续状态细胞凋亡海人酸
