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应用液相基因芯片技术检测食品中弓形虫和旋毛虫的研究: 为建立一种可以同时检测食品中弓形虫和旋毛虫的液相基因芯片方法,本研究以弓形虫B1基因和旋毛虫18S rDNA基因为研究对象,设计并合成特异性探针和引物,通过PCR方法扩增目的片段并测序,建立一种基于双重PCR的液相基因芯...; 杨朋欣张子群路义鑫韩彩霞李晓云宋铭忻; 关键词：弓形虫旋毛虫; 文献传递

食品中弓形虫和旋毛虫液相基因芯片检测方法的研究被引量：15: 2010年; 为建立一种可同时检测食品中弓形虫和旋毛虫的液相基因芯片方法,本研究以弓形虫B1基因和旋毛虫18S rDNA基因为靶序列,设计并合成特异性探针和引物,通过PCR方法扩增目的片段并测序,建立一种基于双重PCR的液相基因芯片检测方法。结果显示:在约180bp和90bp处分别扩增出目的条带;测序结果与GenBank登录的弓形虫和旋毛虫的相关基因一致性分别为99.47%和100%;液相基因芯片对单重PCR产物和双重PCR产物的检测结果一致,特异性和重复性良好。应用该方法检测弓形虫和旋毛虫变异系数(CV%)均在7%以内;灵敏度分别为65.6ng/mL和39.06ng/mL,比琼脂糖凝胶电泳灵敏高约8倍;模拟污染试验准确率达98%以上。本研究建立的液相基因芯片检测食品中弓形虫和旋毛虫的方法具有高效、灵敏和特异等优点,为食源性寄生虫的检测和监控提供了新方法。; 杨朋欣张子群路义鑫韩彩霞李晓云宋铭忻; 关键词：弓形虫旋毛虫

不同发育时期旋毛虫脂肪酸组成的研究: 2010年; 为探讨旋毛虫生长发育过程中脂肪酸组分的变化及外界环境对其影响,本研究采用贝尔曼氏装置分别收集旋毛虫肌幼虫和成虫,同时,将少量骨骼肌和肠黏膜进行酯化处理,通过气相色谱质谱联用技术进行分析。结果显示:肌幼虫和成虫的脂肪酸组分涵盖了C12～C22的22种,主要为16、18和20碳脂肪酸,但旋毛虫肌幼虫与成虫的各脂肪酸相对含量有明显差异(p<0.05)。分别对旋毛虫肌幼虫和成虫及其各自寄生部位骨骼肌和肠黏膜中的脂肪酸成份进行比较分析,结果显示:各脂肪酸组成相似,但在相对含量上却有显著差异(p<0.05)。表明不同发育时期旋毛虫的脂肪酸组成在种类和相对含量上均存在明显差异,这可能与其所处的不同宿主环境和不同发育时期虫体的特殊生理结构有关。; 赵风强路义鑫韩彩霞张晓波兰静宋铭忻; 关键词：旋毛虫脂肪酸气相色谱-质谱联用技术

不同发育时期旋毛虫脂肪酸组成的研究: 为探讨旋毛虫生长发育过程中脂肪酸组分的变化及外界环境对其影响,本研究采用贝尔曼氏装置分别收集旋毛虫肌幼虫和成虫,同时,将少量骨骼肌和肠黏膜进行酯化处理,通过气相色谱质谱联用技术(GC-MS)进行分析。结果显示:肌幼虫和成...; 赵风强路义鑫韩彩霞张晓波兰静宋铭忻; 关键词：旋毛虫脂肪酸 GC-MS; 文献传递

旋毛虫53ku ES重组蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制: 为建立一种简易、快速检测动物血清中的旋毛虫排泄分泌(Excretory-secretory,ES)抗原的胶体金免疫层析试纸法。选用旋毛虫53 ku ES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(MA...; 路义鑫韩彩霞张子群李晓云谢晓峰赵黎黎扈炳新宋铭忻; 关键词：旋毛虫单克隆抗体胶体金; 文献传递

抗旋毛虫P53ES蛋白单克隆抗体的制备被引量：2: 2009年; 为制备抗旋毛虫的单克隆抗体(MAb),以旋毛虫P53ES基因的重组蛋白免疫BALB/c鼠,经ELISA筛选和有限稀释法克隆,得到2株能稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株。亚类鉴定2株MAb均属IgM亚类,其轻链均为κ链;腹水效价均达到1:104以上;Western blot证实2株MAb均能与约53ku处的ES抗原反应,出现特异性条带;杂交瘤细胞株连续传代,细胞生长良好,效价稳定;所得MAb与隐孢子虫、猪鞭虫、猪囊尾蚴囊液抗原、多头蚴囊液、日本血吸虫抗原均无交叉反应。抗旋毛虫P53ES蛋白的MAb的制备,为旋毛虫病的研究和研制旋毛虫病诊断试剂盒奠定了基础。; 雷帅路义鑫张子群韩彩霞王守育宋铭忻; 关键词：旋毛虫重组蛋白单克隆抗体

6株旋毛虫49 ku ES抗原基因克隆及序列分析被引量：2: 2011年; 应用RT-PCR方法从不同来源的6株旋毛虫肌幼虫总RNA中克隆49 ku ES抗原基因序列,与GenBank中T.spiralis相应序列进行比对分析。结果表明,旋毛虫49 ku ES基因具有相当强的保守性,不同虫株核苷酸和氨基酸序列的同源性分别达97.2%和94.0%以上,序列间差异很小,不能较好地区分各旋毛虫种;该基因编码蛋白的抗原性很稳定,不同旋毛虫49 ku ES抗原性几乎没有差别,只要获得一个虫株的重组49 ku ES蛋白,即可用于其他不同种株旋毛虫病的免疫诊断及预防。; 路义鑫韩彩霞李晓云董晓波宋铭忻; 关键词：旋毛虫 KU

猪囊尾蚴和华支睾吸虫液相基因芯片检测方法的建立被引量：4: 2015年; 为建立一种可以同时检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的液相基因芯片方法,本研究以猪囊尾蚴ITS基因和华支睾吸虫ITS基因为靶序列,设计并合成特异性探针和引物,通过PCR方法扩增目的片段,构建阳性重组质粒标准品并对其进行测序,建立一种基于双重PCR的液相基因芯片检测方法。结果显示,扩增目的片段长度分别约为150 bp和170 bp,测序结果与Gen Bank登录的猪囊尾蚴和华支睾吸虫相关基因一致性分别为99.35%和98.27%;液相基因芯片对单重PCR产物和双重PCR产物的检测结果一致,特异性和重复性良好。应用该方法检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的灵敏度分别为5.13×104拷贝/μL和2.03×104拷贝/μL,比琼脂糖凝胶电泳灵敏高约8倍;应用该方法检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的变异系数均在8%以内,模拟污染样品的检验试验准确率达98%。本研究初步建立了可以同时高效、灵敏和特异检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的液相基因芯片方法,为人畜共患寄生虫的检测和监控提供了新方法。; 刘畅路义鑫杨朋欣李晓云王泽汪洋宋铭忻; 关键词：猪囊尾蚴华支睾吸虫

鸡组蛋白去乙酰化酶3的重组表达与结构信息学分析被引量：1: 2014年; 为比较柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)与鸡的组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)蛋白质序列和结构差异,以发现和筛选E.tenella HDAC3(EtHDAC3)的特异性抑制物。用RTPCR方法从杂交黄羽肉鸡的肠上皮细胞克隆ChHDAC3基因,以原核表达载体pMAL-C2X构建重组质粒pMAL-C2X-ChHDAC3,经双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌Transetta,进行IPTG诱导表达。使用Swiss-Model对ChHDAC3和EtHDAC3进行同源建模,比较分析ChHDAC3和EtHDAC3的活性位点。利用Autodock 4.2进行分子对接,研究抑制剂Apicidin与ChHDAC3、EtHDAC3结合模式的差异。结果显示,克隆的ChHDAC3基因的ORF由1 287个核苷酸组成,编码428个氨基酸,能在大肠杆菌中进行可溶性表达。构建的ChHDAC3和EtHDAC3的三维模型均由8个串联的β折叠和11个α螺旋组成,其活性位点高度保守,仅在表面识别区有1个氨基酸的差异。Apicidin与EtHDAC3有更低的结合能,提示Apicidin对EtHDAC3具有更强的抑制活性和选择性。; 路义鑫刘兵马雪婷殷昊龚振兴宋铭忻袁金钱蔡建平; 关键词：同源建模分子对接

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黑龙江省教育厅科学技术研究项目(1153Lz04)

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