石家庄市科学技术研究与发展计划(111461683)
- 作品数：8 被引量：36H指数：4
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- 食源性金黄色葡萄球菌溶血素基因的多重PCR检测和聚类分析被引量：6
- 2012年
- 目的建立多重PCR方法检测金黄色葡萄球菌α-溶血素、β-溶血素、h-溶血素基因以及16S rDNA,了解食源性金黄色葡萄球菌中3种溶血素基因的分布情况和溶血表型,并对菌株进行聚类分析。方法建立多重PCR方法检测148株食源性金黄色葡萄球菌的hla、hlb和hemolysin基因,并研究其分布情况,同时用血平板法检验其溶血表型,对数据进行汇总分析。结果148株菌中131株检出hla基因(88.51%),90株菌检出hlb基因(60.81%),28株菌检出hemolysin基因(18.92%);表型溶血的有131株(88.51%),不溶血的有17株(11.49%);以溶血素基因型和溶血表型为聚类因素,将148株菌以100%相似度为界分为A～L共12个型,其中以A型为主,有58株(39.19%),B型37株(25.00%),C型18株(12.16%)。结论该四重PCR方法特异性高,快速简便,能满足高通量菌株筛选的要求;食源性金黄色葡萄球菌普遍携带hla基因,聚类分析以A型和B型为主。
- 卫沛楠吕国平徐保红
- 关键词：金黄色葡萄球菌聚类分析
- 食品金黄色葡萄球菌的污染调查被引量：10
- 2013年
- 目的了解食品金黄色葡萄球菌的污染状况。方法对2011年石家庄市6类销售点销售的9类食品进行金黄色葡萄球菌分离鉴定,并对数据进行汇总分析。结果 225份食品中分离出30株金黄色葡萄球菌,检出率为13.33%;各类食品间的差异没有统计学意义(χ2=13.785,P>0.05);第三季度食品中金黄色葡萄球菌的污染率最高,为25.9%,季节间的差异有统计学意义(χ2=11.05,P<0.05);街头食品金黄色葡萄球菌的污染率最高,为31.6%,销售点间的差异有统计学意义(χ2=15.374,P<0.05)。结论金黄色葡萄球菌广泛污染我们的食品,应进一步提高食品卫生意识并加强食品卫生安全监督。
- 吕国平秦丽云王苋郭玉梅李云徐保红
- 关键词：食品卫生金黄色葡萄球菌食源性致病菌
- 金黄色葡萄球菌的多重PCR快速鉴定方法被引量：3
- 2012年
- 目的建立多重PCR快速鉴定金黄色葡萄球菌检测方法,并了解nuc和nucA基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布状况。方法设计nuc、nucA和16S rDNA基因的引物,利用单重PCR方法和测序验证引物的特异性;建立多重PCR快速检测方法,并应用此方法对23株食源性金黄色葡萄球菌、15株其他种属细菌以及一起食物中毒样品的增菌液进行检验,以评价该方法的特异性和灵敏性。结果利用单对引物对实验室的4个菌株进行盲筛,出现的条带均为单一条带,且与目的片段长度一致,测序结果显示扩增片段为目的基因片段。建立的多重PCR方法对金黄色葡萄球菌有很好的特异性和灵敏性,灵敏度达100 cfu/μl,研究所涉及的23株食源性金黄色葡萄球菌nuc和nucA基因均为阳性。结论该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高,适用于金黄色葡萄球菌的快速鉴定。
- 吕国平王苋秦丽云
- 关键词：金黄色葡萄球菌多重PCR
- 多位点序列分型在食源性金黄色葡萄球菌分型中的应用研究被引量：6
- 2013年
- 对食源性金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型(MLST)分析,了解其基因型特征,并与流行病学资料进行对比分析。应用MLST方法对2012年石家庄市分离出的18株食源性金葡菌进行基因分型,并对该地区食源性金葡菌分子特性和流行病学特性进行分析。18株食源性金葡菌通过MLST分析得到10个ST序列型,其中ST5序列型最多,共5株;其次为ST464序列型,共3株;ST7型和ST15各2株;ST6型、ST9型、ST59型和ST2138型各1株,有2个菌株是2个新的ST型其ST码分别为287-1-1-8-1-1-1和10-14-8-6-278-3-2。本地区食源性金葡菌的ST型别丰富,主要流行克隆系为ST5和ST464,ST6、ST7、ST9、ST15、ST59和ST2138等克隆系也有分布。
- 吕国平卫沛楠徐保红芦飞
- 关键词：金黄色葡萄球菌食源性致病菌分子流行病学
- 食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR快速检测法被引量：7
- 2012年
- 目的建立食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR快速检测方法。方法根据公布的金黄色葡萄球菌肠毒素基因A～D型序列,分别设计引物并验证引物的特异性,建立多重PCR方法,检测食品风险监测和食物中毒事件中分离得到的165株金黄色葡萄球菌肠毒素基因A～D型。结果 165株金黄色葡萄球菌有95株携带肠毒素基因,毒素基因携带率为57.6%(95/165),携带一种基因型的占42.4%(72/165),同时携带两种以上毒素基因的占13.9%(23/165)。结论该方法具有简便快速、灵敏度高、特异性强等特点,适用于食源性金黄色葡萄球菌和食物中毒中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。
- 秦丽云魏绣萍吕国平
- 关键词：多重聚合酶链反应金黄色葡萄球菌肠毒素基因
- 多重PCR检测食源金黄色葡萄球菌毒素基因的建立及应用被引量：2
- 2013年
- 建立了快速检测食源性金黄色葡萄球菌(SA)16SrDNA、纤维蛋白结合蛋白(clfa A和clfa B)、纤连蛋白结合蛋白(fnbp A和fnbp B)的多重PCR方法.利用GenBank SA的16SrDNA,clfa A,clfa B,fnbp A和fnbp B基因序列,设计5对特异性引物,建立鉴定SA及分析SA毒素基因的五重PCR方法,并对160株食源SA进行属鉴定和毒素基因检测.结果显示,供试的160株食源SA中葡萄球菌属16SrDNA鉴定均为阳性;4种SA毒素基因检出率由高到低依次为clfa A(91.88%),fnbp A(21.88%),clfa B(19.38%),fnbp B(8.13%).该方法简便、快捷、准确,为食源SA的属鉴定和毒素基因分析提供了快速检测方法,同时可作为食源性疾病事件处理的溯源技术.
- 李云魏秀萍卫沛楠吕国平
- 关键词：金黄色葡萄球菌食源性致病菌多重PCR
- 基于毛细管电泳的MLVA分型方法在金黄色葡萄球菌食物中毒中的应用被引量：3
- 2013年
- 目的利用毛细管电泳技术和多位点可变数目串联重复序列分析方法(MLVA)对引起一起食物中毒的金黄色葡萄球菌进行分子分型,了解毒株的肠毒素类型,为金黄色葡萄球菌的流行病学调查和溯源提供参考数据。方法以食物中毒分离出的10株金黄色葡萄球菌的基因组为模板,选用8个可变数目串联重复序列(VNTR)位点进行PCR扩增,扩增产物进行毛细管电泳分析,利用BioCalculator软件对电泳图谱进行分析,产生的数据与MLVA数据库提供信息进行比对。同时测定毒株的肠毒素类型。结果 10株菌的8个VNTR位点的PCR扩增产物一致,VNTR09_01、VNTR61_01、VNTR61_02、VNTR67_01、VNTR21_01、VNTR24_01、VNTR63_01和VNTR81_01扩增出的条带大小分别为373、361、328、279、845、354、394和658 bp。其VNTR重复数目为15、2、2、2、35、8、2和7。10株菌的MLVA型(MT)与目前MLVA数据库公布的3892个MT均不相同,是一种新的MLVA型别,10株不同来源金黄色葡萄球菌均产肠毒素A和肠毒素B。结论 10株金黄色葡萄球菌的肠毒素特性和MLVA分型结果均一致,此次食物中毒分离出的10株菌具有高度同源性。
- 吕国平魏秀萍卫沛楠王苋芦飞
- 关键词：MLVA毛细管电泳食物中毒金黄色葡萄球菌葡萄球菌肠毒素
- 食源性金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素和葡萄球菌A蛋白的多重PCR检测法被引量：1
- 2012年
- 目的建立食源性金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素luk-F、luk-S和葡萄球菌A蛋白SPA基因的多重PCR检测方法。方法设计luk-F、luk-S和SPA基因的引物,利用单重PCR方法和测序验证引物的特异性;建立多重PCR快速检测方法,并对方法的特异性进行评价。结果利用单对引物对实验室的多个菌株进行盲筛,出现的条带均为单一条带,且与目的片段长度一致。多重PCR反应体系:25μl套装反应液2,上、下游引物(20μmol/L)各0.4μl,0.25μl套装反应液1,基因组模板6μl,加超纯水至50μl。扩增条件:94℃预热2 min;94℃保持30 s,54℃保持60 s,72℃保持60 s,34个循环;72℃延伸5 min。结论该方法对金黄色葡萄球菌有很好的特异性,快速简便,可以同时对大量菌株进行筛选。
- 吕国平卫沛楠徐保红
- 关键词：杀白细胞毒素葡萄球菌A蛋白
